基于SHH信号通路探讨通督活血汤治疗急性脊髓损伤的作用机制

来源 :福建中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:czyangcdut
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目的:通过观察通督活血汤对大鼠急性脊髓损伤的作用,明确其发挥作用与SHH信号通路介导炎症的关系,探讨通督活血汤对急性脊髓损伤的作用机制。方法:将56只SPF级SD大鼠(雌雄各半)行椎板切除术后采用分层随机法分为假手术组8只、模型组24只、通督活血汤组24只(后两组根据损伤后的不同时间分为1d、3d、7d三个亚组)。假手术组只行椎板剥离而不打击脊髓,其余两组采用改良Allen’s打击器打击脊髓制备急性脊髓损伤模型。通督活血汤组大鼠自术后第1d起,每天通督活血汤灌胃,其余两组大鼠灌喂等量生理盐水。假手术组大鼠干预1d、3d、7d后评分,并于7d评分后取材;其余两组大鼠分别在干预1d、3d、7d评分,并于评分后取材。BBB和Reuter评分评估各组大鼠后肢感觉运动功能;HE和Nissl染色观察各组大鼠脊髓和神经元的形态与结构;Elisa检测各组大鼠脊髓组织中IL-1β、TNF-α的含量;Western Blot检测各组大鼠脊髓组织中SHH、GLi1蛋白表达量;qPCR检测各组大鼠脊髓组织中IL-1β、TNF-α、SHH、GLi1mRNA表达量。结果:1.BBB和Reuter评分:与假手术组相比,其余两组大鼠BBB评分显著降低(P<0.01),Reuter评分显著增高(P<0.01);与模型组大鼠相比,通督活血汤组大鼠BBB评分在3d后显著升高(P<0.01),Reuter评分在7d后显著降低(P<0.01)。2.HE和Nissl染色:假手术组大鼠脊髓形态结构完整,灰白质分界明显且灰质呈蝴蝶状,尼氏小体饱满,呈虎斑状,未见核坍缩、空洞,而模型组与通督活血汤组大鼠脊髓由于遭受打击,脊髓形态结构发生了变化,但相较于模型组,通督活血汤组大鼠损伤后的脊髓组织中水肿与炎性反应较轻,尼氏小体相对饱满、清晰,细胞核坍缩、溶解、消失的神经元细胞相对较少。3.Elisa:与假手术组大鼠脊髓组织中IL-1β、TNF-α含量相比,其余两组中IL-1β、TNF-α含量显著升高(P<0.01);与模型组相比,通督活血汤组中IL-1β、TNF-α含量显著降低(P<0.05或P<0.01)。4.Western Blot:与假手术组大鼠脊髓组织中SHH、GLi1表达量相比,其余两组中SHH、GLi1表达量显著升高(P<0.05);与模型组相比,通督活血汤组中SHH、GLi1表达量显著增高(P<0.05或P<0.01)。5.qPCR:与假手术组大鼠脊髓组织中IL-1β、TNF-α、SHH、GLi1mRNA表达量相比,其余两组中IL-1β、TNF-α、SHH、GLi1mRNA表达量显著升高(P<0.01);与模型组相比,通督活血汤组中IL-1β、TNF-αmRNA表达量显著降低(P<0.05或P<0.01),SHH、GLi1mRNA表达量显著增高(P<0.05或P<0.01)。结论:1.通督活血汤能够促进急性脊髓损伤后大鼠后肢感觉运动功能的恢复。2.通督活血汤能够通过促进急性脊髓损伤后SHH信号通路,抑制损伤后的炎症反应,起到修复急性脊髓损伤的作用。
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