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目的探讨阿司匹林对体外肺癌脑转移的影响及其可能机制。方法培养A549肺癌细胞、人脑微血管内皮细胞,建立体外血脑屏障模型后,给予阿司匹林(8m M/L)刺激不同时间点(0 min、30 min、60 min、120 min、180min和240 min)后,用自动细胞计数仪计数、台盼蓝染色并用倒置显微镜镜下观察Transwell下室的A549肺癌细胞数,AO/PI染色分析细胞的存活率;采用辣根过氧化物酶通量法测定体外血脑屏障通透性改变,鬼笔环肽荧光染色法观察细胞骨架形态变化;应用ELISA法测定肺癌细胞培养液内肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量;应用Western blot法检测血脑屏障脑微血管内皮细胞的热休克蛋白70(HSP70)、紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达水平变化。结果1体外细胞迁移法测定细胞侵袭性:肺癌细胞悬液置于体外血脑屏障模型上室,与对照组相比,给予阿司匹林处理后下室培养液内细胞数目减少,在处理120min时下室培养液内的细胞数量最少,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);阿司匹林处理后的A549肺癌细胞进行AO/PI染色染色发现,阿司匹林处理120min时细胞死亡数最多,说明此时细胞的侵袭性最低。2血脑屏障的通透性变化:通过HRP通量分析体外血脑屏障的通透性,在Transwell上室给与阿司匹林(8m M/L)处理后,观察不同时间点(0 min、30 min、60 min、120min、180 min和240 min)阿司匹林对体外血脑屏障的影响,结果发现,与对照组相比,阿司匹林处理60 min时HRP渗漏率开始减少,且于给药后120min时HRP通量最低;鬼笔环肽染色后细胞骨架发生改变,与对照组相比,阿司匹林给药后120min时细胞呈管束状细胞骨架结构,细胞间隙变小,说明此时血脑屏障通透性最小,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。3肺癌细胞培养液内TNF-α含量的变化:用ELISA法测定阿司匹林给药后不同时间点(0 min、30 min、60 min、120 min、180 min和240 min)A549肺癌细胞培养液中TNF-α的浓度。与对照组相比,阿司匹林给药后A549肺癌细胞分泌TNF-α浓度明显减少,且阿司匹林给药60 min后TNF-α分泌明显被抑制,较对照组低1.21～5.03倍(P<0.05)。说明肺癌细胞经过阿司匹林刺激培养后,可以引起肺癌细胞释放TNF-α减少。4脑微血管内皮细胞中的HSP70和血脑屏障内皮细胞ZO-1、Occludin蛋白的表达水平:将阿司匹林处理后的A549肺癌细胞培养液作用于构建好的体外血脑屏障模型后,Western blot法检测结果显示,HSP70蛋白浓度在60min时最高;ZO-1和Occludin的蛋白表达水平于120min时达最高,其后随时间的延长而下降。与此同时,我们又在阿司匹林处理的120min组中加入TNF-α,结果发现,ASP+TNF-α组的HSP70、ZO-1和Occludin的蛋白表达水平明显低于阿司匹林120min组。结论阿司匹林可能是通过TNF-α和HSP70上调紧密连接蛋白的表达,从而降低血脑屏障的通透性,最终抑制肺癌脑转移的发生。图10幅;表3个;参136篇。