【摘 要】
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研究背景:化疗联合放射治疗是局部晚期鼻咽癌的主要治疗方法,顺铂耐药和晚期转移往往是导致鼻咽癌治疗失败的关键原因。泛素特异性蛋白酶9X（ubiquitin-specificpeptidase9X-linked,USP9X）的高表达参与了多种肿瘤的发生、进展、凋亡和转移。然而,USP9X异常表达与鼻咽癌细胞顺铂耐药的关系尚不清楚。β-catenin在Wnt信号通路中是一个重要的调节因子,调控着癌症进展
【基金项目】
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湖北省重点实验室开放基金（编号:2018SYS005）；
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研究背景:化疗联合放射治疗是局部晚期鼻咽癌的主要治疗方法,顺铂耐药和晚期转移往往是导致鼻咽癌治疗失败的关键原因。泛素特异性蛋白酶9X（ubiquitin-specificpeptidase9X-linked,USP9X）的高表达参与了多种肿瘤的发生、进展、凋亡和转移。然而,USP9X异常表达与鼻咽癌细胞顺铂耐药的关系尚不清楚。β-catenin在Wnt信号通路中是一个重要的调节因子,调控着癌症进展的各种重要过程。寻找能够改善鼻咽癌转移和化疗耐药的生物标志物是至关重要的。研究目的:本项目旨在探讨沉默USP9X表达对鼻咽癌细胞顺铂耐药的作用及机制,并探讨其对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、侵袭和转移能力的影响。研究方法:采用实时荧光定量RT-PCR和蛋白免疫印迹方法检测鼻咽癌细胞中USP9X和β-catenin的mRNA和蛋白表达情况。采用小干扰RNA（siRNA）转染技术构建USP9X和β-catenin沉默鼻咽癌细胞系模型。将鼻咽癌亲本HNE1和顺铂耐药HNE1/DDP细胞系分别分为四组（空白对照Control组、阴性对照siNC转染组、si USP9X沉默组、si β-catenin沉默组）进行后续实验。采用CCK-8法、流式细胞凋亡、细胞划痕、Transwell细胞侵袭等实验检测USP9X及β-catenin对细胞顺铂耐药、增殖、凋亡和转移的影响。采用Co-IP法、实时荧光定量RT-PCR和蛋白免疫印迹方法,探讨USP9X与β-catenin相互作用的具体分子机制及其对下游MDR1、MRP2、Bcl-2、Bax、MMP2、MMP9基因在mRNA和蛋白表达水平的影响。研究结果:我们发现USP9X和β-catenin在鼻咽癌顺铂耐药细胞株（HNE1/DDP）的mRNA和蛋白表达水平均明显高于顺铂敏感细胞株（HNE1）,与亲本HNE1细胞株相比,USP9X在HNE1/DDP细胞株中mRNA的表达上调约4.3倍（P<0.01）,β-catenin 在 HNE1/DDP 细胞株中 mRNA 的表达上调约 3.4 倍（P<0.01）。Co-IP检测结果表明,USP9X与β-catenin在鼻咽癌细胞中可以发生内源性免疫共沉淀。与空白对照组和阴性对照组相比,沉默USP9X和β-catenin的表达可以部分逆转鼻咽癌细胞顺铂耐药,增加顺铂诱导的细胞凋亡,降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力。此外,沉默USP9X表达可在蛋白水平显著下调MDR1、MRP2、Bcl-2、MMP2、MMP9的表达,并且显著上调Bax的蛋白表达,而在mRNA水平对以上基因无明显作用。而沉默β-catenin表达既可以通过蛋白水平,又可以通过mRNA水平作用于下游基因。研究结论:上述结果提示USP9X的高表达在鼻咽癌顺铂耐药中起重要作用,沉默USP9X表达可以通过下调β-catenin而影响其下游MDR1、MRP2、Bcl-2、Bax、MMP2、MMP9的表达水平,进而逆转鼻咽癌细胞顺铂耐药、增加顺铂诱导的细胞凋亡、减弱细胞增殖及转移的能力。本研究阐明了鼻咽癌细胞顺铂耐药的可能机制,对逆转恶性肿瘤顺铂耐药有一定的指导意义。
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