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非酒精性脂肪肝病（Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是一种不依赖酒精引起的肝细胞脂质蓄积的疾病,由刚开始的单纯性脂肪肝可逐渐发展为更为严重的非酒精性脂肪肝炎,肝纤维化甚至是肝细胞癌。线粒体相关内质网膜（Mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane,MAM）是位于线粒体和内质网间的蛋白复合物,为线粒体和内质网间行使正常功能发挥重要作用。其中,位于MAM上的三磷酸肌醇受体蛋白（Inositol-1,4,5-triphosphate receptor,IP3R）是主要的Ca2+运输蛋白,也为维持细胞稳态发挥重要作用。褪黑素（Melatonin,Mel）是由松果体分泌的主要神经内分泌激素,其具有抗氧化、抗糖尿病、抗肥胖、心血管保护等生物功能。目前,Mel治疗NAFLD已有研究,但是Mel是否可以通过调控MAM中IP3R的表达情况从而治疗NAFLD还尚未研究。本研究主要利用油酸（Oleic acid,OA）和棕榈酸（Palmitic acid,PA）诱导AML12细胞建立体外脂质积累模型。利用泰洛沙泊（Tyloxapol,Ty）和高脂饮食（high fat diet,HFD）诱导C57BL/6小鼠建立体内脂质积累模型。利用甘油三酯（Triglyceride,TG）试剂盒、油红O染色、BODIPY染色、Western blot检测脂质代谢蛋白、荧光定量检测脂代谢基因的方法分析AML12细胞及小鼠肝脏的脂质含量以及脂质代谢情况。研究发现,不同浓度的OA和PA以及Ty和不同时间的HFD引起了不同的脂质蓄积情况,进一步的研究发现,低浓度OA和PA以及低浓度Ty、4周HFD可以促进脂质代谢而高浓度OA和PA以及12周HFD抑制脂质代谢。重要的是,通过以上试验方法发现Mel具有减轻脂质蓄积和促进脂质代谢的作用。本研究接下来利用Western blot、荧光定量、免疫组化的方法探讨了Mel通过IP3R促进自噬的机制。结果发现,低浓度OA和PA以及4周HFD可以促进Atg5、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3β（Microtubule-associated protein 1 light chain3β,Lc3B）的表达,抑制B细胞淋巴瘤基因-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、泛素结合蛋白（Ubiquitin-binding protein,P62）的表达。而高浓度OA和PA以及12周HFD,抑制了Atg5的表达,促进了Beclin1、Lc3B、Bcl-2、P62的表达。重要的是,经过Mel治疗后,可以显著增加Atg5、Beclin1、Lc3B的表达,抑制Bcl-2、P62的表达。此外,低浓度OA和PA以及4周HFD可以适当激活IP3R通路,以及增加细胞内Ca2+含量,而高浓度OA和PA以及12周HFD可以极显著的激活IP3R通路,以及增加细胞内Ca2+含量,并且增加了小鼠血清中丙氨酸转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）、活性氧（Reactive oxygen species,ROS）含量,减少了小鼠肝脏中谷胱甘肽（Glutathione,GSH）含量。研究发现,Mel可以降低由Ty诱导的小鼠血清中ALT、AST、ROS含量增加以及小鼠肝脏中Ca2+含量增加和IP3R增加。通过进一步的研究发现,IP3R的减少可以抑制低浓度OA和PA对IP3R通路的激活作用以及细胞内的Ca2+含量。并且在IP3R减少的情况下,低浓度OA和PA可减少Beclin1的表达从而可能减少了Bcl-2和Beclin1复合物的生成,但是却增加了Lc3B和P62的表达。本研究还发现,在IP3R减少的情况下低浓度OA和PA可以抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/腺苷酸活化蛋白激酶（mammalian target of rapamycin,m TOR/Adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK）通路激活自噬的作用。本研究还利用油红O染色、BODIPY染色、Western blot检测脂质代谢相关蛋白的表达,发现当IP3R减少后,低浓度OA和PA进一步加剧了脂质积累以及脂质代谢紊乱。同样的,利用si RNA-IP3R验证当IP3R敲低后对Mel治疗组调控自噬的影响,发现IP3R敲低后会使Bcl-2、Beclin1、Lc3B、P62的表达减少,并且会抑制m TOR/AMPK通路激活自噬的作用。而且,IP3R敲低后会使Mel治疗OA和PA诱导的脂质积累的能力下降。接下来本研究探究了MAM的增加或减少对Mel调控IP3R的影响。结果发现,低浓度OA和PA以及4周HFD和高浓度OA和PA以及12周HFD可以分别轻微和严重的影响MAM含量。有趣的是,本研究发现Mel可以减少OA和PA引起的MAM增加。为了进一步研究IP3R是否在MAM上,通过Western blot以及激光共聚焦试验发现,IP3R确实与MAM存在共定位现象。为了研究MAM的增多与减少是否会影响IP3R的功能,利用si RNA-MFN2、si RNA-PACS-2减少MAM和利用linker增加MAM。发现当MAM的增多或减少时均会影响低浓度OA和PA对IP3R的调控作用。重要的是,当MAM增多或减少时会影响Mel对的IP3R调控作用。综上所述,Mel可以缓解NAFLD模型引起的脂质蓄积。Mel通过减少IP3R增加,调节m TOR/AMPK通路从而激活自噬达到缓解NAFLD的作用。在OA和PA诱导的AML12细胞中,Mel对IP3R的作用与MAM的增加或减少有关。