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目的:宫颈癌是妇科恶性肿瘤,早期发现是肿瘤有效治疗的关键,而早期预警指标筛选可以为肿瘤早期诊断提供依据。人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）感染是宫颈癌发生的主要因素,可能与任何宫颈癌早期预警指标存在一定的关系。本研究选择HPV16阳性宫颈癌和HPV阴性正常宫颈或宫颈炎组织,依托基于新兴iTRAQ技术的蛋白质组学研究、生物信息学分析及RNA和蛋白质表达水平的定量验证,筛选肿瘤组织特异性改变的候选差异表达蛋白质,明确宫颈癌发生与肿瘤组织内蛋白质表达调控的关系,以及与HPV感染的依赖性,建立HPV筛查对宫颈癌预警的辅助诊断指标,为宫颈癌临床诊断、治疗和HPV疫苗推广提供科学依据。方法:1)收集汉族和维吾尔族妇女新鲜宫颈鳞状细胞癌（cervical squamous cell carcinoma,CSCC）、宫颈内上皮瘤样病变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）Ⅱ-Ⅲ级及正常宫颈对照组织（normal cervical control,NCC）标本76例;2)提取组织DNA,采用定量-PCR方法对组织DNA进行HPV感染阳性鉴定和高危型HPV分型;3)由于8标-iTRAQ试剂可以同步标记和定量8份蛋白质标本,我们按照维吾尔族和汉族妇女病例分组,构建了2组由8例组织标本组成的测试标本,每一组含4例HPV16阳性肿瘤组织和4例HPV阴性的正常宫颈（或宫颈炎）组织。以此提取组织蛋白质、酶切和标记,依托北京华大蛋白质组学研究中心技术平台,对肿瘤和正常对照组织蛋白质进行基于iTRAQ技术的蛋白质组学研究,筛选宫颈癌组织和HPV16感染特异性改变的候选差异表达蛋白质指标,并在此基础上,寻找汉族和维吾尔族妇女宫颈癌组织共性的候选蛋白质群;4)选择MetaCoreTM软件及其数据库,对候选蛋白质进行生物信息学分析,评价候选蛋白质功能异常与疾病或肿瘤发生和发展的关系;5)提取组织总RNA,选择一系列宫颈癌组织特异性上调表达蛋白质指标,设计编码候选蛋白质的mRNA序列特异性引物,通过组织RNA的荧光定量RT-PCR筛查分析,进一步验证蛋白质组学数据和生物信息学分析结果;6)在定量RT-PCR分析基础上,以病例回顾的方式,选取宫颈癌、癌前病变（CIN）和正常宫颈（或宫颈炎）组织切片,采用免疫组织化学方法鉴定候选蛋白质表达水平,进一步验证蛋白质组学数据的准确性。结果:1)对76例宫颈标本组织DNA进行了HPV阳性鉴定及HPV16、18、33、52、58和67等6种高危型HPV分型,其结果显示,HPV阳性检出为36例CSCC,11例CINII-III和5例正常对照,其中仅HPV16检出为28例CSCC,11例CINII-III和5例正常对照;2)通过蛋白质组学研究、蛋白质和医学文献数据库检索,以及汉族和维吾尔族妇女宫颈癌组织的蛋白质组学数据比较,并以差异倍数大于1.2为上调表达或小于0.83（1/1.2）为下调表达作为量化标准,筛选出58种宫颈癌组织及HPV16感染特异性候选差异表达蛋白质,其中有33种上调表达蛋白质和25种下调表达蛋白质;3)依据对上述58种候选差异表达蛋白质,使用MetaCore?软件及在线数据库进行了生物信息学评价,其结果:（1）生物学过程富集分布:主要与损伤应答、损伤修复、急性炎症反应及血液凝集等10个方面密切相关。（2）亚细胞定位富集分布:结果显示部分蛋白位于细胞外基质,部分蛋白位于胶原蛋白,部分位于细胞外间隙,部分位于细胞膜等10个部位。（3）分子功能富集分布:主要与结构分子活性、细胞外基质结构成分、生长因子结合等功能相关。（4）蛋白质富集的通路:主要位于糖酵解和糖异生、蛋白折叠和成熟、线粒体功能障碍等通路上;4)选择ASAH1、PCBP2、DDX5、MCM5、TAGLN2、hnRNPA1、ENO1、TYMP、CYC、MCM4等10种候选上调表达蛋白质,设计与合成编码候选蛋白质的mRNA特异性引物,对76例组织RNA标本进行了定量RT-PCR筛查分析,肿瘤与正常对照比较,10种蛋白质表达水平显著上调（P<0.05）,证明蛋白质组学数据的正确性;CIN与正常对照组织比较,仅有DDX5表达水平有显著差异（P<0.05）;CSCC与CIN组织之间PCBP2、MCM5、hnRNPA1、TYMP和CYC表达水平有显著差异;5)选择PCBP2、hnRNPA1、DDX5、ASAH1和TAGLN2等候选上调表达蛋白质,对116例宫颈病变组织切片进行免疫组织化学分析,其结果显示,CSCC和CIN组织内ASAH1、PCBP2、DDX5和hnRNPA1表达水平显著上调,与正常对照差异显著（P<0.05）,与蛋白质组学数据和定量RT-PCR分析结果一致,但是TAGLN2表达定位于血管平滑肌,而不在宫颈上皮组织。结论:1)汉族和维吾尔族妇女宫颈癌发生及HPV感染与肿瘤组织内蛋白质表达调控存在因果关系;2)本研究报道的58种宫颈癌组织特异性候选差异表达蛋白质,参与多种生物学过程,其上调表达可能促进肿瘤发生和发展;3)通过ASAH1、PCBP2、DDX5和hnRNPA1等4种上调蛋白质指标的定量验证,认为这些指标有可能成为基于HPV筛查的宫颈癌预警的辅助诊断指标。