Galectin-9通过结合TLR-4促进脑出血后脑损伤修复的研究

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:slb135
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
第一部分Gal-9在大鼠脑出血后脑组织中表达水平变化的研究目的:通过建立成年 Sprague-Dawley(SD)大鼠脑出血(Intracerebral Hemorrhage,ICH)模型,检测半乳糖凝集素-9(Galectin-9,Gal-9)在ICH后不同时间点脑组织中的蛋白表达水平变化以及与其结合的TLR-4的水平变化。方法:1.随机选取36只体重在250-300g之间的成年SD大鼠分为假手术(Sham)组、ICH 后 1day 组、ICH 后 3day 组、ICH 后 7day 组、ICH 后 10day 组、ICH 后 14day组,每组6只,分别建立假手术和ICH模型。2.造模成功后的各只大鼠在相应时间点脱颈处死,取得相应脑组织,用蛋白质免疫印迹实验检测Gal-9在ICH之后不同时间点的蛋白表达水平变化;用免疫荧光实验探究表达Gal-9的细胞类型;用免疫共沉淀实验检测ICH后Gal-9与TLR-4的结合水平变化。结果:1.内源性Gal-9蛋白表达水平在ICH发生后开始上升,在ICH发生后第7天达到峰值,之后逐渐下降,但表达水平会维持在较高水平。2.内源性Gal-9蛋白主要表达于小胶质细胞中上,在神经元以及星形胶质细胞中不表达。3.发在ICH生后第7天,当Gal-9的表达水平升高时,与Gal-9结合的TLR-4分子的水平也较Sham组明显增高。结论:ICH后表达于小胶质细胞中的Gal-9水平会升高,与其相结合的TLR-4的水平也明显升高。第二部分探究Gal-9与ICH后中枢神经系统炎症反应以及细胞死亡的关系目的:探究ICH发生后,Gal-9表达水平变化与小胶质细胞各表型之间转换的关系;探究调节Gal-9水平变化后,中枢神经系统相关炎症因子的变化趋势;探究调节Gal-9表达水平变化对大鼠ICH后中枢神经系统细胞死亡的影响。方法:1.随机选取72只SD大鼠分为假手术组(Sham)、脑出血组(ICH)、小干扰RNA阴性对照组(siRNA negative control,Si-NC)、Gal-9 小干扰 RNA 组(Si-Gal-9)、空载组(Vector)、过表达 Gal-9 组(Over-expression-Gal-9,OE-Gal-9),每组 1 2 只。Si-Gal-9组、Si-NC组、OE-Gal-9组、Vector组大鼠分别在侧脑室注射小干扰RNA及其阴性对照试剂、过表达质粒及其对照试剂,48h后6组大鼠分别进行假手术以及ICH造模。2.ICH造模后7天后取得各组大鼠动脉血及脑脊液,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各只大鼠血清及脑脊液中炎症因子IL-4和IL-13的水平。3.ICH造模7天后取相应脑组织制作石蜡切片,分别进行免疫荧光染色、TUNEL染色和FJB染色。结果:1.WB和IF实验结果显示:与Vector组相比,过表达质粒转染后提高了 Gal-9的表达水平;与Si-NC组相比,小干扰RNA转染后降低了 Gal-9的表达水平;Si-NC组、Vector组、ICH组的Gal-9表达水平无统计学差异。2.CO-IP结果显示:当Gal-9蛋白表达水平升高时,与Gal-9结合的TLR-4的水平也升高;当Gal-9蛋白表达水平降低时,与Gal-9结合的TLR-4的水平降低。3.ELISA实验结果显示:与Vector组相比,当Gal-9表达水平增高时IL-4、IL-13 的浓度也相应增高;与 Si-NC 组相比,当 Gal-9 表达水平降低时 IL-4、IL-13 的浓度降低;4.小胶质细胞IF实验结果显示:当Gal-9蛋白表达水平增高时,M2型小胶质细胞的数量增多;当Gal-9蛋白表达水平降低时,M2型小胶质细胞的数量减少。5.TUNEL染色和FJB染色结果显示:增加Gal-9蛋白表达可以抑制ICH造成的脑细胞死亡。结论:过表达Gal-9可以促进小胶质细胞转化为M2表型,促进抑炎因子释放,减轻中枢神经系统细胞死亡。第三部分探究在ICH模型下Gal-9对大鼠行为认知能力恢复的影响目的:探究在ICH模型中干预Gal-9蛋白表达水平后对ICH大鼠在行为与认知水平上的影响。方法:1.随机选取60只体重在250-300g之间的成年SD大鼠(8-12周)平均分为假手术组(Sham)、脑出血组(ICH)、小干扰RNA阴性对照组(siRNA negative control,Si-NC)、Gal-9 小干扰 RNA 组(Si-Gal-9)、空载组(Vector)、过表达 Gal-9 组(Over-expression-Gal-9,OE-Gal-9),共6组,每组10只SD大鼠,各组干预及造模方法同第二部分。2.在各组大鼠模型建立后第1天、第3天、第5天、第7天依照神经功能学评分标准对各只大鼠进行评分。在各组大鼠模型建立后第1天、第3天、第5天、第7天、第10天、第14天、第21天、第28天、第35天等时间点分别进行转棒实验以及贴纸实验。在模型建立后第29天、第30天、第31天、第32天、第33天等时间点进行水迷宫实验。结果:1.转棒实验和贴纸实验结果表明:过表达Gal-9组大鼠的运动能力和感觉功能明显优于Vector组大鼠,Si-Gal-9组大鼠运动能力和感觉功能比Si-NC组大鼠更差。2.ICH后大鼠自发性活动、本体感觉、触摸鼻毛、肢体对称性、侧转、前肢伸展、攀爬等行为活动方面逐渐好转,OE-Gal-9组大鼠此七方面行为的恢复速度比Vector组大鼠更快。3.水迷宫实验结果表明,相比于Vector组大鼠,当Gal-9蛋白表达水平增高后,大鼠找到目标平台的时间和游泳距离总体缩短,穿过目标区域的次数和停留在目标象限的时间增加。结论:过表达Gal-9有助于ICH大鼠运动、感觉、学习和记忆能力的恢复。
其他文献
随着海洋经济发展和海上石油勘探、开采、运输规模扩大,溢油事故不断发生,严重破坏海洋生态环境,且给生命财产带来重大安全隐患,及时准确监测海面溢油的发生发展具有重要意义。本文通过分析海面油膜的光谱、偏振等光学特性,研究其偏振光谱探测方法,设计适用于星载遥感探测的光谱偏振成像系统。首先,介绍遥感探测海面溢油、偏振遥感仪器和溢油偏振特性的国内外研究现状,虽然已提出了多种光谱偏振成像技术,但鲜见专门用于遥感
学位
目的:以血管收缩药五羟色胺(5-hydroxytrptamine,5-HT)、血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)、苯肾上腺素(Phenylephrine,PE)和血管舒张药乙酰胆碱(Acetylcholine,ACH)、硝普钠(Sodium nitroprusside,SNP)为工具药,研究孕期缺氧对成年雄性子代大鼠肺动脉血管舒张和收缩功能的影响及机制。方法:将自然受孕的母鼠随
学位
目的:探讨脉冲振荡肺功能技术在支气管哮喘患者临床诊断中的应用价值。方法:本次研究选择上海市肺科医院2016年5月-2020年7月期间门诊的75例支气管哮喘患者为观察组,再选择同期来该院常规检查身体的健康者75例为对照组,两组均行脉冲振荡肺功能(impulse oscillometry,IOS)及常规肺功能(pulmonary function test,PFT)检测,对各组的PFT中的参数如用力肺
学位
背景:本研究旨在探讨接触式A型超声与Lenstar LS 900测量晶状体厚度(LT)的一致性,以及二种测量方法对前房深度(ACD)和眼轴长度(AL)测量的差异对白内障患者晶状体厚度测量的影响。方法:对1247例(1247眼)白内障患者进行回顾性横断面研究。对用Lenstar LS 900和A型超声进行眼部生物测量到的数据值,用Pearson相关系数(r)和Bland-Altman分析比较眼轴长度
学位
目的:评价冠状动脉树描述及病变评估(Coronary Artery Tree description and Lesion EvaluaTion,CatLet?,专利号,ZL201710066056.0)系统预测急性心肌梗死行延迟经皮冠状动脉介入术(PCI)患者临床预后的价值。背景:我们课题组自主开发了可用于解释冠脉解剖变异,病变严重程度和复杂性的CatLet冠脉评分系统。课题组既往的验证研究表明
学位
目的:初步探讨胃癌细胞来源的外泌体在调控yδT细胞活性、凋亡以及细胞因子表达中的作用。研究外泌体miR-135b-5p在γδT细胞内的作用靶点,并初步探索相关分子机制。方法:1.收集人胃黏膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞MGC803的条件培养基,刺激γδT细胞,通过流式细胞术检测γδT细胞的凋亡率和细胞因子IFN-γ和TNF-α的表达。2.使用外泌体提取试剂盒分离外泌体,透射电镜观察外泌体形态;通
学位
第一部分Tmprss6基因敲除在放射性肠损伤中的作用研究目的:研究TMPRSS6基因对小鼠放射性肠损伤的影响并探索可能的机制。方法:7-8周龄雄性野生型(WT)小鼠和TMPRSS6基因敲除(KO)小鼠随机分成非辐照组和辐照组,其中辐照组采用11.5 GyX射线全腹部照射建立放射肠损伤模型。H&E染色和TUNEL染色分别观察不同肠段病理损伤和凋亡情况。测量不同肠段辐照前后铁、SOD、GSH、T-AO
学位
第一部分GALNT14在胰腺癌中的表达及其作用机制研究目的:明确GALNT14在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌患者临床病理因素及预后的关系;明确GALNT14对胰腺癌细胞生物学行为的影响及其对吉西他滨化疗抵抗的作用效应。方法:(1)从生物信息数据库GEO、Xena、ArrayExpress和GSA获取胰腺癌相关数据集 GSE62452、GSE15471、GSE62165、GSE71729、GSE1
学位
研究背景肺癌是我国发病率最高的恶性肿瘤之一,临床上约80%的肺癌为非小细胞肺癌(NSCLC),约80%NSCLC患者会接受放疗,不同剂量电离辐射对恶性肿瘤细胞生物学特性有不同影响,较大剂量照射(如8 Gy以上)对恶性肿瘤细胞产生损伤效应的研究已有不少报道,而较小剂量照射(如4 Gy以下)对恶性肿瘤细胞的生物学特性影响的研究较少。我们前期实验研究发现,较小剂量照射可能会对恶性肿瘤细胞产生“兴奋”效应
学位
目的:应用环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的核酸,为临床快速诊断EV71感染提供依据。EV71拥有复杂的免疫逃逸机制阻碍宿主细胞固有免疫应答,固有免疫是机体抵抗病原微生物感染的第一道防线,病原微生物入侵宿主细胞时,宿主通过自身模式识别受体(Pattern reco
学位