桃树类病毒鉴定及序列多样性分析

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桃树在我国大部分地区广泛栽培,据统计截至2006年,我国桃种植面积达67.7万公顷。但是,近年来随着桃树产业的发展,桃树类病毒的侵染日益增强,导致斑果、叶片上出现斑点或黄化等,严重影响果品的经济价值及果树业的正常发展。目前国外报道侵染桃树的类病毒有两种:啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)和桃潜隐花叶类病毒(Peach latent mosaic viroid,PLMVd)。PLMVd在我国桃树上有报道,HSVd的发生情况则没有报道。桃树起源于我国,调查和了解这两种类病毒在我国发生分布情况以及我国HSVd桃树分离株的序列变异情况对于类病毒病害检测和防治以及进一步研究类病毒起源、致病性等具有重要意义。本文对采自中国北京50个桃叶样品(L1-L50)和6个桃果实样品(F1-F6),河北、山东、陕西、广西、北京、新疆、福建、甘肃等地41个不同桃枝条样品(B1-B41)共97个样品进行RNA抽提。经斑点杂交、RT-PCR以及生物学鉴定检测,来自北京、陕西、新疆、福建以及甘肃的18个样品检测到HSVd,总检出率达18.6%。三种方法均可用于检测桃树上的HSVd,具有一致性。经斑点杂交检测,88个桃样品呈现PLMVd阳性,总检出率高达90.7%,除了福建的样品未检测到之外,北京、陕西、新疆、河北、山东、广西、甘肃的样品都检测到了PLMVd,而且发生率都很高。从地理分布上看,采自我国北京、陕西、新疆以及甘肃的17个桃样品受到HSVd和PLMVd的混合侵染,而福建的桃样品则仅检测到HSVd,河北、广西以及山东桃样品仅检测到PLMVd。18个HSVd阳性样品中选取9个样品(L19,L42,L48,B6,B18,F1,F4,F5,F6)进行HSVd克隆测序,得到22条不同HSVd核酸序列,所得序列与GenBank中已报道的HSVd序列同源性达93%~100%,可以看出,国内桃树HSVd分离物核酸序列变异比较小,地域和品种间核酸序列无明显差异。本研究完成了22条HSVd核酸序列的GenBank登录,登录号为DQ362900、DQ362902~DQ362903、EF080841~EF080859。
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