传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒引起的鸡的一种急性高度接触性免疫抑制性传染病,目前疫苗免疫是防制该病的唯一途径。但是近年来由于超强毒株变异毒株的出现,使疫苗免疫的效果大打折扣,给家禽养殖业带来极大的经济损失。VP3是传染性法氏囊病病毒的核衣壳蛋白,是病毒的多功能蛋白,在病毒基因组复制、病毒粒子装配、介导抑制宿主先天免疫方面都起着关键作用。为了为深入研究VP3在传染性法氏囊病病毒感染中的作用及其介导的致病机制提供有效的检测工具及细胞感染模型,本研究首先构建了VP3的原核表达载体,进一步在大肠杆菌中表达VP3并纯化。以纯化的VP3蛋白免疫BALB/c小鼠,并经筛选成功获得2株VP3单克隆抗体,mabVP3-1和mabVP3-2,都能很特异地与传染性法氏囊病病毒VP3反应。腹水效价分别为1:32000、1:64000。VP3基因在不同株的传染性法氏囊病病毒基因序列中高度保守。利用生物信息学软件对传染性法氏囊病病毒不同毒株VP3基因编码区保守序列进行分析,设计并合成一系列shRNAs。首先以mabVP3-1介导的免疫印迹筛选方法在HEK293T细胞中测试这些shRNAs沉默VP3的效果。将其中沉默效果最佳的一条shRNA克隆到pLVX-IRES-Puro慢病毒表达载体上,与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T细胞进行慢病毒的包装。将包装好的慢病毒转导DF-1细胞,用嘌呤霉素筛选14天后获得稳定表达shRNA的DF-1细胞系,利用免疫印迹和噬斑实验检测该稳定细胞系对病毒的敏感性。结果:(1)获得了2株针对VP3蛋白的鼠单克隆抗体,mabVP3-1和mabVP3-2,都能很特异地与传染性法氏囊病病毒VP3反应;(2)构建了针对传染性法氏囊病病毒VP3基因的RNA干扰慢病毒表达载体;(3)得到了稳定干扰VP3基因的DF-1细胞系;(4)发现稳定细胞系对病毒蛋白的表达以及病毒的复制有显著的抑制作用。结论:本研究获得了2株针对VP3蛋白的特异性鼠单克隆抗体;首次采用慢病毒载体介导的RNA干扰技术建立了沉默VP3基因表达的稳定DF-1细胞系。该细胞系对IBDV病毒敏感性降低。这些结果为深入探索IBDV致病机制及防制方法提供新型的检测工具和细胞模型。