【摘 要】
:
传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒引起的鸡的一种急性高度接触性免疫抑制性传染病,目前疫苗免疫是防制该病的唯一途径。但是近年来由于超强毒株变异毒株的出现,使疫苗免
论文部分内容阅读
传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒引起的鸡的一种急性高度接触性免疫抑制性传染病,目前疫苗免疫是防制该病的唯一途径。但是近年来由于超强毒株变异毒株的出现,使疫苗免疫的效果大打折扣,给家禽养殖业带来极大的经济损失。VP3是传染性法氏囊病病毒的核衣壳蛋白,是病毒的多功能蛋白,在病毒基因组复制、病毒粒子装配、介导抑制宿主先天免疫方面都起着关键作用。为了为深入研究VP3在传染性法氏囊病病毒感染中的作用及其介导的致病机制提供有效的检测工具及细胞感染模型,本研究首先构建了VP3的原核表达载体,进一步在大肠杆菌中表达VP3并纯化。以纯化的VP3蛋白免疫BALB/c小鼠,并经筛选成功获得2株VP3单克隆抗体,mabVP3-1和mabVP3-2,都能很特异地与传染性法氏囊病病毒VP3反应。腹水效价分别为1:32000、1:64000。VP3基因在不同株的传染性法氏囊病病毒基因序列中高度保守。利用生物信息学软件对传染性法氏囊病病毒不同毒株VP3基因编码区保守序列进行分析,设计并合成一系列shRNAs。首先以mabVP3-1介导的免疫印迹筛选方法在HEK293T细胞中测试这些shRNAs沉默VP3的效果。将其中沉默效果最佳的一条shRNA克隆到pLVX-IRES-Puro慢病毒表达载体上,与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T细胞进行慢病毒的包装。将包装好的慢病毒转导DF-1细胞,用嘌呤霉素筛选14天后获得稳定表达shRNA的DF-1细胞系,利用免疫印迹和噬斑实验检测该稳定细胞系对病毒的敏感性。结果:(1)获得了2株针对VP3蛋白的鼠单克隆抗体,mabVP3-1和mabVP3-2,都能很特异地与传染性法氏囊病病毒VP3反应;(2)构建了针对传染性法氏囊病病毒VP3基因的RNA干扰慢病毒表达载体;(3)得到了稳定干扰VP3基因的DF-1细胞系;(4)发现稳定细胞系对病毒蛋白的表达以及病毒的复制有显著的抑制作用。结论:本研究获得了2株针对VP3蛋白的特异性鼠单克隆抗体;首次采用慢病毒载体介导的RNA干扰技术建立了沉默VP3基因表达的稳定DF-1细胞系。该细胞系对IBDV病毒敏感性降低。这些结果为深入探索IBDV致病机制及防制方法提供新型的检测工具和细胞模型。
其他文献
南海已经成为二十一世纪为我国提供矿物资源、生物资源、旅游资源和航运的重要海域。建立海洋测量网,实现海洋从上至下的监测,对船舰航运、资源勘探与开采、地质灾害预防等具有重要的科学研究价值和实践应用意义。海底原位观测系统是整个海洋观测网的基础系统,其研究是海洋技术开发的难点和热点。为了实现海底沉积物声学特性的原位观测,设计海底原位声学观测装置,完成观测装置的运动状态测量、海底沉积物的声学物理特性测量、海
为了促进文言文教学的发展,提升学生的文言文能力,本文尝试将选修教材《先秦诸子选读》作为文言文教学的辅助材料。本文由绪论、正文、结语三部分组成。第一章阐释了将《先秦
再制造作为实现经济可持续发展的重要途径之一,其本质是对已经损坏或报废的产品进行修复,使其质量和性能达到重新使用的要求。磨损是导致金属材料失效的主要原因,而且磨损失
“三违”是造成煤矿安全生产事故最主要的原因之一,严重危害煤矿职工的生命安全和心理健康,更影响企业的发展扩大,损坏企业的社会形象。虽然煤炭企业已经纷纷制定了各种管理
进入21世纪以来,随着科技进步和产品升级加速,人防面具的市场需求也在朝着快速响应,多元化,高质量的方向发展。传统民用人防面具无论从生产组织还是质量等方面的管理要求越来
伴随着我国经济的高速发展,矿产资源需求量急剧上升,资源开发利用逐渐向深部方向发展。资源开采过程中,裂隙矿岩的工程安全性成为必须面对的问题。高峰矿105号矿体品位高、价
随着人类社会的不断发展,社区已成为人们工作生活的主要场所,社区治安状况直接关系到整个社会的稳定和谐。社区警务在社会基础防控工作中起着重要作用,主要以社区为依托,通过组织协调政府、人民群众以及社会各界力量,共同参与社会治理,预防和控制犯罪的发生,维护社会治安稳定。传统的警务模式主要以打击犯罪为主,其粗放的工作模式不仅没有抑制犯罪发生的作用,反而会让群众对公安工作产生不满。为了适应新时期社会治安形势,
肝纤维化是由各种致病因子所致的细胞外基质(Extra cellular matrix,ECM)过度沉淀的病理过程,阻止或减缓肝纤维化的发生与发展是预防肝硬化的关键。目前临床主要采糖皮质激素类、黄酮类等化学药物进行肝纤维化治疗,这种治疗方式虽然疗效确切,但存在副作用大和易耐药等问题,因此,现阶段迫切需要寻找一种作用温和、毒副作用小和耐药性低的新型抗纤维化疗法。Omega-3多不饱和脂肪酸(Omega
大新锰矿分公司是中信大锰矿业有限责任公司的直属矿山,是我国最大的锰矿山企业。该矿体主要是由原生沉积碳酸锰矿和次生氧化锰矿组成,有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三个锰矿层,锰矿资源丰富
金属焊接结构广泛应用在石油化工、机械制造和核电等基础行业。在焊接和服役过程中,焊缝中产生的夹杂、未融合、未焊透等缺陷会对焊接质量产生不同程度的影响。焊接质量直接关系着结构运行安全,因此有必要对焊缝结构进行检测。利用常规超声阵列成像技术对焊缝进行检测时,存在超声数据量大、空间表征不足等问题。针对以上问题,论文进行基于压缩感知的焊缝超声阵列成像方法研究,主要内容包括:(1)基于压缩感知的超声A扫信号重