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研究背景:恶性肿瘤在我国,乃至全世界范围内,正逐渐成为严重危害人类身心健康以及生命安全的重大疾病之一。CA Cancer J Clin 2015统计的中国癌症数据分析可知,随着发病率和死亡率的增加,癌症正逐渐成为中国人群死亡的主要原因和重要的公共健康问题。统计数据表明,女性患者发病率最高的癌症是乳腺癌。在中国女性人群中,乳腺癌的发生率占女性所有恶性肿瘤发生率的15%,死亡率高居第一位,其中,30-59岁中青年女性是高发人群。随着发病率和死亡率的持续快速增长,乳腺癌正以更快的速度威胁着女性人群的生命健康,造成严重的社会健康问题。三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌中一种比较特殊的类型,具有高度侵袭性、高复发率和死亡率、内分泌治疗无效且缺乏特异性的治疗靶点等生物学特性,是乳腺癌领域的研究重点和难点。最近研究发现,B细胞淋巴瘤/白血病11A(B-cell lymphoma/leukemia 11A,BCL11A)基因在TNBC中过表达并参与肿瘤的形成,有望成为TNBC的新的治疗靶点。本研究的目的旨在探讨BCL11A在TNBC发生发展中的分子机制,为TNBC的临床诊断和治疗提供新的分子靶点。研究目的(1)探讨BCL11A基因在乳腺癌尤其是TNBC中的表达情况;(2)探讨BCL11A基因的沉默对TNBC细胞株的功能影响。(3)探讨BCL11A基因与N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)、β-连环蛋白(β-catenin,β-cat)以及雄激素受体(Androgen receptor,AR)之间的关系及相互调节作用。研究方法(1)免疫组化方法检测140例乳腺癌患者组织芯片上BCL11A蛋白的表达及定位情况;(2)细胞平板克隆实验检测BCL11A shRNA稳转后MDA-MB-231和Hs 578T的细胞克隆形成情况。(3)Transwell 及划痕实验检测 BCL11A shRNA 稳转后 MDA-MB-231 和 Hs 578T的细胞迁移及侵袭情况。(4)流式细胞术检测BCL11A shRNA稳转后MDA-MB-231和Hs 578T的细胞周期变化情况。(5)BCL11A shRNA 稳转 TNBC 细胞株 MDA-MB-231 和 Hs 578T 后 Western blot检测干扰后的BCL11A、NDRG1、β-catenin及AR蛋白水平的变化。(6)用AR激动剂双氢睾酮及拮抗剂比卡鲁胺对MDA-MB-231和Hs 578T进行处理后Western blot检测AR和BCL11A蛋白水平的变化。研究结果(1)在乳腺癌组织芯片样本中,BCL11A在TNBC中过表达,亚细胞定位主要在细胞浆和细胞核中。BCL11A的表达水平与雌激素受体(Estrogen receptor,ER)状态(χ2=80.545,P=).000)、孕激素受体(Progesterone receptor,PR)状态(χ2=62.177,P=0.000)、人类上皮细胞生长因子受体 2(Human epithelial growth factor receptor 2,HER2)状态(χ2=9.503,P=0.009)以及 AR 状态(χ2=4.223,P=0.040)呈显著相关,与年龄(χ2=0.946,P=0.331)、组织学分级(χ2=3.278,P=0.166)以及TNM分期(χ2=0.714,P=0.700)未见相关性。(2)单因素Cox 比例风险回归模型分析结果显示,对患者生存有显著影响的因子为 TNM 分期(P=0.004)、ER 状态(P=0.044)、PR 状态(P=0.043)以及BCL11A状态(P=0.014)。而年龄(P=0.272)、肿瘤大小(依次为P=0.419;P=0.126)、淋巴结转移数(依次为P=0.994;P=).015;P=).174)、组织学分级(P=0.928)、HER2状态(P=0.634)以及AR状态(P=0.404)对乳腺癌患者的生存均无明显影响。多因素Cox 比例风险回归模型分析结果显示:TNM分期(P=0.002,HR=2.543)和BCL11A状态(P=0.020,HR=2.099)均是乳腺癌影响生存的独立危险预后因素。(3)采用Kaplan-Meier生存曲线分析发现,在乳腺癌患者中,BCL11A的高表达预示着总生存时间的减少(χ2=6.367,P=0.012)。(4)利用相关分析发现,在组织芯片中BCL11A与AR的表达呈正相关(r=0.174,P=0.040)。(5)克隆形成实验提示BCL11A可以促进TNBC细胞株的增殖。Transwell和划痕实验表明BCL11A可以促进MDA-MB-231和Hs 578T的细胞迁移(依次为P<0.001;P<0.001)和细胞侵袭(依次为P<0.001;P<0.001)。流式细胞术发现BCL11A对TNBC细胞的细胞周期没有产生影响。(6)Western blot结果显示,shRNA干扰TNBC细胞株中BCL11A的表达后NDRG1表达上调,BCL11A、AR及β-catenin表达下调。(7)Western blot结果显示,双氢睾酮能上调TNBC细胞株中AR的蛋白表达,而对BCL11A的蛋白表达无变化;而比卡鲁胺作用后,TNBC细胞株中AR的蛋白表达下调,对BCL11A的蛋白表达无影响。