【摘 要】
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目的研究结肠癌癌旁粘膜和正常结肠组织间DNA甲基化分布的差异以及甲基化在结肠癌发生中的作用.方法用甲基化CpG岛扩增(methylated CpG islands amplification, MCA)法富集基因组DNA甲基化序列,以癌旁粘膜DNA甲基化富集产物为检测子,正常结肠组织的甲基化富集产物为驱赶子进行代表性差异分析(representational difference analysis
【机 构】
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310031,杭州,浙江大学医学院公共卫生系,310031,杭州,浙江大学医学院病理学教研室
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目的研究结肠癌癌旁粘膜和正常结肠组织间DNA甲基化分布的差异以及甲基化在结肠癌发生中的作用.方法用甲基化CpG岛扩增(methylated CpG islands amplification, MCA)法富集基因组DNA甲基化序列,以癌旁粘膜DNA甲基化富集产物为检测子,正常结肠组织的甲基化富集产物为驱赶子进行代表性差异分析(representational difference analysis, RDA)获得DNA甲基化差异片段,经克隆、测序获得碱基序列.用生物信息学分析这些序列与相关基因结构的关系.结果获得25个不同的差异甲基化序列,位于相关基因的5′端、外显子、内含子和3′端.其中1A01片段位于CECR7基因的第1外显子和LOC256866基因的5′端及第1外显子;1A12片段位于GR6基因的第1外显子前204 bp处.符合DNA甲基化对基因转录的调控规律.以1A12片段为探针,点杂交分析表明,该探针与4轮RDA和检测子均有杂交信号,而与驱赶子无杂交信号.结论结肠癌癌旁组织和正常结肠组织的DNA甲基化存在差别,用MCA结合RDA方法可以有效分析这两种不同组织的甲基化分布差异.
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