观察人重组真核表达质粒pIRES-骨形态发生蛋白2(BMP2)-血管内皮生长因子165(VEGF165)的体外转染对兔骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。
方法以原代分离的兔骨髓间充质干细胞为研究对象，在脂质体的介导下将重组质粒pIRES-BMP2-VEGF165转染至细胞中，采用G418体外筛选稳转细胞株，且在mRNA和蛋白水平上分别检测转染效果。继续培养稳转细胞株，细胞分：空质粒pIRES组、pIRES-BMP2-VEGF165转染组以及成骨诱导剂组；采用Western blot分别检测培养7 d和21 d后各组细胞Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和骨钙素(OCN)蛋白表达水平；培养14 d后，采用Gomori改良钙钴法染色检测碱性磷酸酶活性；培养21 d后，采用茜素红法钙质染色检测各组细胞钙化结节情况。
结果与空质粒pIRES组比较，pIRES-BMP2-VEGF165质粒组细胞在mRNA和蛋白水平上均检测到骨形态发生蛋白2和VEGF165的表达；与空质粒组及成骨诱导剂组比较，重组质粒pIRES-BMP2-VEGF165组细胞ColⅠ和OCN蛋白的表达水平均显著提升(ColⅠ：0.597±0.040比0.230±0.020，P＝0.000；0.597±0.040比0.457±0.035，P＝0.005；OCN：0.433±0.038比0.083±0.021，P＝0.000；0.433±0.038比0.350±0.036，P＝0.046)；碱性磷酸酶染色阳性区域占比均显著增加[(69.000±5.568)%比(18.333±3.056)%，P＝0.000；(69.000±5.568)%比(43.333±5.508)%，P＝0.002]，钙化结节阳性区域占比均明显增加[(37.747±3.763)%比(1.587±0.972)%，P＝0.000；(37.747±3.763)%比(19.330±4.033)%，P＝0.008]。
结论人重组真核表达质粒pIRES-BMP2-VEGF165成功转染至兔骨髓间充质干细胞，且与成骨诱导剂比较，重组质粒pIRES-BMP2-VEGF165对该细胞的成骨分化能力有更明显的促进作用。