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摘要：目的 建立同时测定复方补乌糖浆中3种成分含量的方法。方法 采用薄层色谱扫描法（TLCS），硅胶G薄层板，环己烷-乙酸乙酯-二氯甲烷-甲酸（3∶1∶1∶0.2）为展开剂，检测波长λS=300 nm。结果 阿魏酸在0.36～0.84 μg、补骨脂素在0.12～0.28 μg、大黄素在0.01～0.05 μg线性范围内呈良好的线性关系，平均回收率分别为100.7%、100.8%、101.0%，RSD分别为1.26%、1.44%、1.86%。结论 该方法简单、快速、高效，稳定可靠，可作为复方补乌糖浆的质量控制方法。
关键词：复方补乌糖浆；薄层色谱扫描法；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）02-0092-03
复方补乌糖浆（原名白癜风糖浆）系安徽省中医院院内制剂，由补骨脂、川芎、当归、何首乌等组成，具有养血活血、补肾之功效，主治白癜风，疗效确切，不良反应小[1-3]。补骨脂素、大黄素和阿魏酸为该制剂的3种主要有效成分，将其纳入质量评价体系中十分必要。目前，已有关于阿魏酸[4]、补骨脂素[5]、大黄素[6]含量测定的相关研究，但采用薄层色谱扫描法（TLCS）同时测定3种成分的含量鲜有报道。TLCS可以使用少量溶剂同时测定多个样品，分析效率较高，用于该制剂的质量控制更加经济实用。本试验建立TLCS同时测定复方补乌糖浆中3种成分含量的方法。
1 仪器与试药
AMAG TCL SCANNER Ⅲ扫描仪（瑞士CAMAG公司）， CAMAG NANOMAT4型点样仪，CAMAG荧光灯（瑞士CAMAG公司），定量毛细管（瑞士CAMAG公司），CANON数码照相机，BP211D Sartorius天平，HH-S型水浴锅（巩义市英峪予华仪器厂），薄层硅胶G板（青岛海洋化工总厂）， SK3200H超声清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）。
阿魏酸对照品（批号110773-200611）、补骨脂素对照品（批号110739-200814）、大黄素对照品（批号0757-200005）均购自中国药品生物制品检定所，复方补乌糖浆（批号20120229、20120514、20120716）由安徽省中医院制剂中心提供，所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 供试品溶液的制备 取复方补乌糖浆10 mL，加1%Na2CO3 10 mL，超声处理（150 W，53 kHz）10 min，加稀盐酸调pH 2～3，再加水饱和的正丁醇萃取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，加甲醇定容于5 mL容量瓶中。
2.1.2 对照品溶液的制备 ①阿魏酸对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1 mL含0.12 mg的溶液，作为对照品溶液。②补骨脂素对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.04 mg的溶液，作为对照品溶液。③大黄素对照品溶液的制备：取大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.1.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取1/10除补骨脂素、生首乌、当归、川芎以外的药材，置圆底烧瓶中，第1次加10倍水，加热微沸1.5 h，滤出滤液；第2、3次加8倍水，各加热微沸1 h，分别滤出滤液。合并3次滤液，置烧杯中于电炉上加热浓缩至100 mL，取上述溶液10 mL，加1%Na2CO3 10 mL，超声处理（150 W，53 kHz）10 min，加稀盐酸调pH 2～3，再加水饱和的正丁醇萃取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，加甲醇定容于5 mL容量瓶中。
2.2 薄层色谱条件
薄层板：硅胶G预制薄层板；展开剂：环己烷-乙酸乙酯-二氯甲烷-甲酸（3∶1∶1∶0.2）；点样量：2 μL。展开条件：预饱和后展开，取出，晾干，紫外光灯（365 nm）下检视。
2.3 阴性试验
分别取供试品溶液2 ?L、阴性对照溶液2 ?L、大黄素对照品溶液3 ?L、阿魏酸对照品溶液5 ?L、补骨脂素对照品溶液5 ?L，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二氯甲烷-甲酸（3∶1∶1∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，紫外光灯（365 nm）下检视。结果表明，对照品在与供试品相应的位置有对应点，且阴性对照无干扰。
2.4 波长的选择
取阿魏酸、补骨脂素、大黄素对照品溶液和复方补乌糖浆供试品溶液，进行紫外光谱扫描，其在300 nm有最大吸收峰，因此选择300 nm进行检测。见图1。
2.5 线性关系考察
精密吸取大黄素对照品溶液1、2、3、4、5 ?L，补骨脂素对照品溶液3、4、5、6、7 ?L，阿魏酸对照品溶液3、4、5、6、7 ?L，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二氯甲烷-甲酸（3∶1∶1∶0.2）为展开剂，预饱和10 min再展开，取出，晾干。于检测波长300 nm下进行扫描，以点样量为横坐标，吸收峰面积为纵坐标，试验数据经线性回归，得回归方程。阿魏酸：Y=-1485.962+11 573.407X，r=0.999 34；补骨脂素：Y=1055.781+22 365.317X，r=0.999 18；大黄素：Y=11.071+26.989X，r=0.999 10。结果表明，阿魏酸在0.36～0.84 ?g、补骨脂素在0.12～0.28 ?g、大黄素在0.01～0.05 ?g范围内呈良好的线性关系。
2.6 精密度考察
精密吸取大黄素对照品溶液3 ?L、阿魏酸对照品溶液5 ?L、补骨脂素对照品溶液5 ?L，在同一硅胶G薄层板上，重复点样6次，依法展开后，取出，晾干，扫描测定峰面积积分值。结果阿魏酸平均峰面积为5462.67，RSD=1.56%；补骨脂素平均峰面积为5541.91，RSD=1.41%；大黄素平均峰面积为802.85， RSD=1.35%（n=6）。表明精密度良好。 2.7 稳定性试验
精密吸取（批号20120716）供试品溶液2 ?L、大黄素对照品溶液3 ?L、阿魏酸对照品溶液5 ?L、补骨脂素对照品溶液5 ?L，点于同一硅胶G板上，依法展开后，取出，晾干，扫描测定峰面积积分值。在室温下放置，每隔1 h测定1次。结果斑点在至少5 h内稳定。阿魏酸RSD=1.05%，补骨脂素RSD=1.09%，大黄素RSD=1.20%（n=6）。
2.8 重复性试验
精密量取同一批（批号20120716）复方补乌糖浆6份，按“2.1.2”项下方法分别制成供试品溶液，定容于6个5 mL容量瓶中，标为1、2、3、4、5、6号供试品溶液。精密吸取大黄素对照品溶液1、5 ?L，阿魏酸对照品溶液3、7 ?L，补骨脂素对照品溶液3、7 ?L， 1～6号供试品各2 ?L，点于同一硅胶G薄层板上，依法展开，取出，晾干，扫描测定峰面积积分值。结果阿魏酸RSD=1.23%，补骨脂素RSD=1.19%，大黄素RSD=1.32%（n=6），表明重复性良好。
2.9 加样回收率试验
精密取已知复方补乌糖浆中3种成分准确含量的样品6份（批号20120514），每份约5 mL加入0.9 mg阿魏酸、0.3 mg补骨脂素、0.025 mg大黄素对照品，按前述方法制成供试品溶液，定容于5 mL容量瓶中。精密吸取供试品溶液2 ?L，大黄素对照品溶液1、5 ?L，阿魏酸对照品溶液3、7 ?L，补骨脂素对照品溶液3、7 ?L，点于同一硅胶G板上，依法展开后，计算含量。结果表明本方法回收率良好，阿魏酸平均回收率为100.7%，RSD=1.26%（n=6）；补骨脂素平均回收率为100.8%，RSD=1.44%（n=6）；大黄素平均回收率为101.0%，RSD=1.86%（n=6）。结果见表1～表3。
2.10 含量测定
取3批复方补乌糖浆（批号20120229、20120514、20120716），依法制成供试品溶液。精密吸取大黄素对照品溶液1、5 ?L，阿魏酸对照品溶液3、7 ?L，补骨脂素对照品溶液3、7 ?L，各批供试品溶液2 ?L，点于同一硅胶G板上，依法展开，取出，晾干，测定3批样品中3种成分的含量。结果见表4。
3 讨论
本试验在前期研究基础上[7]，对萃取溶剂进行了摸索。通过试验探究发现在加稀盐酸调pH 2～3值，再加水饱和的正丁醇萃取比乙酸乙酯萃取效率更高、更完全。
由于补骨脂、当归、川芎和生首乌作为复方补乌糖浆中君药和臣药[8]，而阿魏酸、补骨脂素和大黄素为上述4种药材中的主要有效成分，因此对于这3种成分的检测，有利于控制该制剂的整体质量，方法学考察结果表明，该方法快速、简便、高效，且稳定可靠。
参考文献：
[1] 张虹亚，冯璐，査日煌，等.复方补乌糖浆治疗白癜风临床观察及血清肾上腺素和去甲肾上腺素的影响[J].新中医，2009，41（10），35-37.
[2] 刘涛峰，张虹亚，李美莲.自体表皮移植加白癜风糖浆联合治疗白癜风[J].安徽医学，2005，26（4）：308-309.
[3] 冯璐，张虹亚，刘小平，等.复方补乌糖浆加外用药物治疗白癜风临床观察[J].中医药临床杂志，2010，22（4）：323-324.
[4] 林丽，晋玲，李应东，等.当归干、鲜品中游离阿魏酸和总阿魏酸含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（22）：94-97.
[5] 宋亮，李忠琼，董媛，等.补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素含量与其果实饱满程度的相关性研究[J].中国现代中药，2011，13（5）：14-15.
[6] 王陈翔，叶其蓁，林观样.不同年限首乌藤大黄素含量比较[J].中国中医药科技，2012，19（6）：508-509.
[7] 陈莉，王盛，魏良兵，等.响应面分析法优化复方补乌糖浆微波提取工艺参数[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（2）：26-29.
[8] 高家荣，程志清，夏伦祝.复方补乌糖浆质量标准研究[J].中国药房， 2009，20（24）：1890-1892.
（收稿日期：2013-08-22，编辑：陈静）
关键词：复方补乌糖浆；薄层色谱扫描法；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）02-0092-03
复方补乌糖浆（原名白癜风糖浆）系安徽省中医院院内制剂，由补骨脂、川芎、当归、何首乌等组成，具有养血活血、补肾之功效，主治白癜风，疗效确切，不良反应小[1-3]。补骨脂素、大黄素和阿魏酸为该制剂的3种主要有效成分，将其纳入质量评价体系中十分必要。目前，已有关于阿魏酸[4]、补骨脂素[5]、大黄素[6]含量测定的相关研究，但采用薄层色谱扫描法（TLCS）同时测定3种成分的含量鲜有报道。TLCS可以使用少量溶剂同时测定多个样品，分析效率较高，用于该制剂的质量控制更加经济实用。本试验建立TLCS同时测定复方补乌糖浆中3种成分含量的方法。
1 仪器与试药
AMAG TCL SCANNER Ⅲ扫描仪（瑞士CAMAG公司）， CAMAG NANOMAT4型点样仪，CAMAG荧光灯（瑞士CAMAG公司），定量毛细管（瑞士CAMAG公司），CANON数码照相机，BP211D Sartorius天平，HH-S型水浴锅（巩义市英峪予华仪器厂），薄层硅胶G板（青岛海洋化工总厂）， SK3200H超声清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）。
阿魏酸对照品（批号110773-200611）、补骨脂素对照品（批号110739-200814）、大黄素对照品（批号0757-200005）均购自中国药品生物制品检定所，复方补乌糖浆（批号20120229、20120514、20120716）由安徽省中医院制剂中心提供，所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 供试品溶液的制备 取复方补乌糖浆10 mL，加1%Na2CO3 10 mL，超声处理（150 W，53 kHz）10 min，加稀盐酸调pH 2～3，再加水饱和的正丁醇萃取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，加甲醇定容于5 mL容量瓶中。
2.1.2 对照品溶液的制备 ①阿魏酸对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1 mL含0.12 mg的溶液，作为对照品溶液。②补骨脂素对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.04 mg的溶液，作为对照品溶液。③大黄素对照品溶液的制备：取大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.1.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取1/10除补骨脂素、生首乌、当归、川芎以外的药材，置圆底烧瓶中，第1次加10倍水，加热微沸1.5 h，滤出滤液；第2、3次加8倍水，各加热微沸1 h，分别滤出滤液。合并3次滤液，置烧杯中于电炉上加热浓缩至100 mL，取上述溶液10 mL，加1%Na2CO3 10 mL，超声处理（150 W，53 kHz）10 min，加稀盐酸调pH 2～3，再加水饱和的正丁醇萃取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，加甲醇定容于5 mL容量瓶中。
2.2 薄层色谱条件
薄层板：硅胶G预制薄层板；展开剂：环己烷-乙酸乙酯-二氯甲烷-甲酸（3∶1∶1∶0.2）；点样量：2 μL。展开条件：预饱和后展开，取出，晾干，紫外光灯（365 nm）下检视。
2.3 阴性试验
分别取供试品溶液2 ?L、阴性对照溶液2 ?L、大黄素对照品溶液3 ?L、阿魏酸对照品溶液5 ?L、补骨脂素对照品溶液5 ?L，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二氯甲烷-甲酸（3∶1∶1∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，紫外光灯（365 nm）下检视。结果表明，对照品在与供试品相应的位置有对应点，且阴性对照无干扰。
2.4 波长的选择
取阿魏酸、补骨脂素、大黄素对照品溶液和复方补乌糖浆供试品溶液，进行紫外光谱扫描，其在300 nm有最大吸收峰，因此选择300 nm进行检测。见图1。
2.5 线性关系考察
精密吸取大黄素对照品溶液1、2、3、4、5 ?L，补骨脂素对照品溶液3、4、5、6、7 ?L，阿魏酸对照品溶液3、4、5、6、7 ?L，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二氯甲烷-甲酸（3∶1∶1∶0.2）为展开剂，预饱和10 min再展开，取出，晾干。于检测波长300 nm下进行扫描，以点样量为横坐标，吸收峰面积为纵坐标，试验数据经线性回归，得回归方程。阿魏酸：Y=-1485.962+11 573.407X，r=0.999 34；补骨脂素：Y=1055.781+22 365.317X，r=0.999 18；大黄素：Y=11.071+26.989X，r=0.999 10。结果表明，阿魏酸在0.36～0.84 ?g、补骨脂素在0.12～0.28 ?g、大黄素在0.01～0.05 ?g范围内呈良好的线性关系。
2.6 精密度考察
精密吸取大黄素对照品溶液3 ?L、阿魏酸对照品溶液5 ?L、补骨脂素对照品溶液5 ?L，在同一硅胶G薄层板上，重复点样6次，依法展开后，取出，晾干，扫描测定峰面积积分值。结果阿魏酸平均峰面积为5462.67，RSD=1.56%；补骨脂素平均峰面积为5541.91，RSD=1.41%；大黄素平均峰面积为802.85， RSD=1.35%（n=6）。表明精密度良好。 2.7 稳定性试验
精密吸取（批号20120716）供试品溶液2 ?L、大黄素对照品溶液3 ?L、阿魏酸对照品溶液5 ?L、补骨脂素对照品溶液5 ?L，点于同一硅胶G板上，依法展开后，取出，晾干，扫描测定峰面积积分值。在室温下放置，每隔1 h测定1次。结果斑点在至少5 h内稳定。阿魏酸RSD=1.05%，补骨脂素RSD=1.09%，大黄素RSD=1.20%（n=6）。
2.8 重复性试验
精密量取同一批（批号20120716）复方补乌糖浆6份，按“2.1.2”项下方法分别制成供试品溶液，定容于6个5 mL容量瓶中，标为1、2、3、4、5、6号供试品溶液。精密吸取大黄素对照品溶液1、5 ?L，阿魏酸对照品溶液3、7 ?L，补骨脂素对照品溶液3、7 ?L， 1～6号供试品各2 ?L，点于同一硅胶G薄层板上，依法展开，取出，晾干，扫描测定峰面积积分值。结果阿魏酸RSD=1.23%，补骨脂素RSD=1.19%，大黄素RSD=1.32%（n=6），表明重复性良好。
2.9 加样回收率试验
精密取已知复方补乌糖浆中3种成分准确含量的样品6份（批号20120514），每份约5 mL加入0.9 mg阿魏酸、0.3 mg补骨脂素、0.025 mg大黄素对照品，按前述方法制成供试品溶液，定容于5 mL容量瓶中。精密吸取供试品溶液2 ?L，大黄素对照品溶液1、5 ?L，阿魏酸对照品溶液3、7 ?L，补骨脂素对照品溶液3、7 ?L，点于同一硅胶G板上，依法展开后，计算含量。结果表明本方法回收率良好，阿魏酸平均回收率为100.7%，RSD=1.26%（n=6）；补骨脂素平均回收率为100.8%，RSD=1.44%（n=6）；大黄素平均回收率为101.0%，RSD=1.86%（n=6）。结果见表1～表3。
2.10 含量测定
取3批复方补乌糖浆（批号20120229、20120514、20120716），依法制成供试品溶液。精密吸取大黄素对照品溶液1、5 ?L，阿魏酸对照品溶液3、7 ?L，补骨脂素对照品溶液3、7 ?L，各批供试品溶液2 ?L，点于同一硅胶G板上，依法展开，取出，晾干，测定3批样品中3种成分的含量。结果见表4。
3 讨论
本试验在前期研究基础上[7]，对萃取溶剂进行了摸索。通过试验探究发现在加稀盐酸调pH 2～3值，再加水饱和的正丁醇萃取比乙酸乙酯萃取效率更高、更完全。
由于补骨脂、当归、川芎和生首乌作为复方补乌糖浆中君药和臣药[8]，而阿魏酸、补骨脂素和大黄素为上述4种药材中的主要有效成分，因此对于这3种成分的检测，有利于控制该制剂的整体质量，方法学考察结果表明，该方法快速、简便、高效，且稳定可靠。
参考文献：
[1] 张虹亚，冯璐，査日煌，等.复方补乌糖浆治疗白癜风临床观察及血清肾上腺素和去甲肾上腺素的影响[J].新中医，2009，41（10），35-37.
[2] 刘涛峰，张虹亚，李美莲.自体表皮移植加白癜风糖浆联合治疗白癜风[J].安徽医学，2005，26（4）：308-309.
[3] 冯璐，张虹亚，刘小平，等.复方补乌糖浆加外用药物治疗白癜风临床观察[J].中医药临床杂志，2010，22（4）：323-324.
[4] 林丽，晋玲，李应东，等.当归干、鲜品中游离阿魏酸和总阿魏酸含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（22）：94-97.
[5] 宋亮，李忠琼，董媛，等.补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素含量与其果实饱满程度的相关性研究[J].中国现代中药，2011，13（5）：14-15.
[6] 王陈翔，叶其蓁，林观样.不同年限首乌藤大黄素含量比较[J].中国中医药科技，2012，19（6）：508-509.
[7] 陈莉，王盛，魏良兵，等.响应面分析法优化复方补乌糖浆微波提取工艺参数[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（2）：26-29.
[8] 高家荣，程志清，夏伦祝.复方补乌糖浆质量标准研究[J].中国药房， 2009，20（24）：1890-1892.
（收稿日期：2013-08-22，编辑：陈静）