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摘要：目的 观察参龙汤对脑缺血大鼠学习记忆能力及大脑海马区Bcl-2 和 Bax 表达的影响。方法 利用双侧颈总动脉结扎的方法制备慢性脑缺血大鼠模型，50只大鼠随机分为对照组、模型组、脑复康组及参龙汤大、小剂量组。造模后药物处理4周，采用Morris 水迷宫实验观察大鼠逃避潜伏期的时间及跨越平台的次数，采用免疫组化方法观察大鼠海马Bcl-2 和 Bax 表达的变化。结果 模型组大鼠逃避潜伏期时间较对照组明显延长，跨越平台次数较对照组明显减少（P<0.01）。参龙汤大剂量组大鼠的逃避潜伏期时间较模型组明显缩短（P<0.05），跨越平台次数明显增加（P<0.05）；参龙汤大剂量组大鼠海马Bax蛋白阳性表达显著低于模型组（P<0.05），Bcl-2蛋白阳性表达则显著高于模型组（P<0.01）。结论 参龙汤可以改善脑缺血大鼠学习记忆能力，其作用机理可能与增加脑缺血大鼠海马Bcl-2蛋白阳性表达、减少Bax蛋白阳性表达有关。
关键词：参龙汤；脑缺血；学习记忆能力；Bcl-2蛋白；Bax蛋白；大鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）10-0041-03
随着我国人口老龄化趋势日益严重，缺血性脑血管病的发生率不断升高，有关缺血性脑血管病所引起的学习、记忆的保护作用及其神经生物学机制的研究一直是神经科学的研究热点。目前研究认为：缺血性神经元损伤的病理较为复杂，主要过程包括神经细胞的自身损伤机制和脑缺血性损伤级联反应，其中神经细胞的凋亡发挥着重要的作用[1]。细胞凋亡是生命进化过程中为更好地适应生存环境而主动进行的一种死亡过程。研究显示，许多神经系统疾病的发生与细胞异常凋亡有关，如Alzheimer病、痴呆、神经退行性病变、自身免疫性疾病等[2]。凋亡调控蛋白Bax为促凋亡蛋白，Bcl-2为抗凋亡蛋白，在中枢神经系统中有表达[3]。近年来，中医药治疗干预脑血管病的研究日益增多，研究发现参龙汤具补肾益气活血的作用，能提高脑缺血大鼠的学习记忆能力[4]。本研究采用慢性脑缺血动物模型，观察参龙汤对慢性脑缺血大鼠学习记忆能力，以及对海马凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax表达的影响，为临床治疗提供依据。
1 材料与方法
1.1 动物
SPF级Wistar大鼠，鼠龄3个月，体质量180～220 g，雌雄各半，中国人民解放军总医院医学动物实验中心提供，许可证号：SCXK（京）2009-0015。
1.2 药物、试剂与仪器
参龙汤（由中国人民解放军总医院中医科提供处方，制剂室制备），吡拉西坦（脑复康，石家庄中诺药业有限公司，批号09075103）。Bcl-2多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司，批号990785W），Bax多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司，批号909901W）；二抗显色试剂盒：EnVision Detection Kit 基因科技（上海）有限公司产品（Code No.GK500705）。全自动真空脱水机（LEICAASP300）、组织包埋机（LEICA EG1140H）、石蜡切片机（LEICA RM2135）、展片机（LEICA HI1210）：德国LEICA公司；光学显微镜：日本OLYMPUS BX60系统显微镜。
1.3 造模与分组
根据文献[5]制备慢性脑缺血模型。大鼠禁食12 h，禁水6 h，10%水合氯醛腹腔麻醉（30 mg/100 g）后，备皮消毒，剪开颈部皮肤，找到双侧颈总动脉，0号丝线结扎。伤口撒头孢唑啉钠粉末（0.25 g/只）后逐层缝合，放回笼中饲养。对照组10只大鼠仅分离颈总动脉，不做任何处理。造模后大鼠分为模型组、脑复康组及参龙汤小、大剂量组，每组10只，排除有明显肢体障碍的大鼠，最后模型组8只、参龙汤大剂量组8只、参龙汤小剂量组9只、脑复康组8只纳入统计。术后3 d开始参照文献[6]方法给药，根据参龙汤和脑复康的临床口服用量，按体质量换算出大鼠对应于人的等效量定为小剂量组及脑复康组的剂量，确定参龙汤小、大剂量组和脑复康组分别含原药材80、240、90 g/L。治疗组大鼠每只灌胃1 mL/d，对照组、模型组大鼠等量生理盐水灌胃，连续4周。
1.4 Morris水迷宫实验
给药4周后进行水迷宫实验，在暗室中放置一直径1.3 m、深0.5 m圆形水池，池壁为黑色，标明A、B、C、D四个象限，在任一象限放置一个直径10 cm、高30 cm的安全平台，水面没过平台约2 cm，水中注入适量墨汁，以目视看不到平台为宜，水温控制在26 ℃左右；大鼠训练2 d，开始实验5 d，记录大鼠寻找到安全平台的时间（即逃避潜伏期）作为学习成绩；第6日撤去平台，选第二象限入水点，将大鼠面向池壁放入水中，记录90 s内大鼠跨越原平台次数，作为大鼠记忆成绩。
1.5 免疫组化
水迷宫实验结束后大鼠10%水合氯醛（3 mL/kg ）腹腔注射麻醉，暴露心脏，断头取脑，参照大鼠脑立体定位图谱[7]对大鼠海马组织取材、脱水、包埋，置于APES防脱玻片上。60 ℃烤片4 h，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，0.01 mol/L PBS（pH 7.2～7.4）浸洗2 min，共3次；3%H2O2 10 min，PBS浸洗2 min，共3次；浸入0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）。微波热修复后，滴加一抗Bcl-2（1∶150）、Bax（1∶300），阴性对照组加0.01 mol/L PBS代替一抗，4 ℃冰箱孵育过夜，室温复温30 min后PBS浸洗5 min，共3次后滴加非生物素二抗，湿盒中室温30 min，PBS浸洗5 min，共3次，DAB显色光镜下控制时间，常规脱水，透明，中性树胶封片。图像分析采用Image Pro plus 5.1 图像分析系统测定每张照片的平均光密度值，每张切片同一部位取5个不同的视野。 1.6 统计学方法
采用SPSS10.0统计软件进行分析。所有数据用—x±s表示，进行正态性检验，多个样本均数比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 参龙汤对脑缺血大鼠学习、记忆能力的影响
脑缺血模型组大鼠逃避潜伏期时间较对照组明显延长，跨越平台次数较假手术组明显减少，模型组与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。参龙汤大剂量组大鼠的逃避潜伏期时间较模型组明显缩短（P<0.05），跨越平台次数明显增加（P<0.05）。见表1。
2.2 参龙汤对脑缺血大鼠海马Bax和Bcl-2免疫组化蛋白阳性表达的影响
Bax和Bcl-2免疫组化蛋白阳性表达呈黄色或棕黄色染色、深浅不一，主要位于细胞质中，胞核不染色。从表2可以看出：模型组Bax蛋白阳性表达明显强于对照组（P<0.01）；与模型组比较，参龙汤大剂量组Bax蛋白阳性表达显著降低（P<0.05）。Bcl-2阳性蛋白表达在模型组最弱，对照组最强，模型组与对照组比较差异显著（P<0.01）；参龙汤大剂量组Bcl-2蛋白阳性表达较模型组显著增强（P<0.01）。见表2。
3 讨论
缺血后引起的脑组织神经元损伤是缺血性脑血管病导致的神经功能损伤的重要机制之一。海马是大脑边缘系统的重要组成部分，参与了情绪、学习、记忆、行为、免疫调节等，在学习和记忆功能及调节神经内分泌和自主神经活动中起着重要作用，是参与调节情感、认知行为重要的边缘系统结构[8]。脑缺血后，在缺血程度较重的核心区发生不可逆神经元坏死，缺血程度较轻的半影区主要表现为细胞凋亡，研究表明，缺血性脑血管病导致的神经功能损伤与缺血后海马神经元凋亡有关，如果迅速恢复脑缺血半影区的血供，可以抑制缺血神经元凋亡，改善神经元的生存环境，对缺血性脑损伤有积极的保护作用[9]。Bcl-2基因家族成员是细胞凋亡的调控蛋白，在凋亡的发生中起重要的作用。Bcl-2家族是一组原癌基因蛋白，包含抑制和促进细胞凋亡二类功能相反的一组蛋白质，Bcl-2和Bax被认为是细胞凋亡调控的最后通路之一，是目前细胞凋亡相关基因研究最多的一类蛋白质，它们具有较高的同源性[10]。Bcl-2家族是一种重要的内源性神经保护因子，通过抑制线粒体细胞色素C释放，抑制caspase激活和蛋白水解级联反应，抑制细胞凋亡，Bax是重要的促凋亡基因，机制是形成Bax同源二聚体，Bcl-2蛋白能增强细胞存活能力，促进神经元再生[11]。
实验结果显示：模型组大鼠逃避潜伏期时间较对照组明显延长，跨越平台次数较对照组明显减少，说明造模成功。参龙汤治疗后，脑缺血大鼠逃避潜伏期时间较模型组明显缩短，跨越平台次数较脑缺血模型组明显增加，说明参龙汤可以改善脑缺血大鼠学习、记忆的能力。免疫组化结果显示：参龙汤能够增加脑缺血大鼠脑Bcl-2蛋白阳性表达，减少Bax蛋白阳性表达，参龙汤能够通过调节凋亡调控基因来发挥其抑制神经细胞凋亡的作用，对大鼠脑缺血神经元的损伤具有保护作用。参龙汤由生晒参、制何首乌、淫羊藿、地龙、石菖蒲、川芎、远志等药物组成。其中君药人参大补元气、安神益智。臣药制何首乌补血养肝、益精固髓，淫羊藿温肾壮阳，二者配伍针对肾精不足的基本病机。佐以地龙、川芎活血行气通络，去除脑络之瘀阻；石菖蒲、远志开窍宁心安神。全方共奏补肾填精、益气活血、安神增智的功效。前期临床研究表明，参龙汤对于脑缺血及血管性痴呆具有较好的疗效[12-13]，参龙汤大剂量组可降低脑缺血大鼠炎性细胞因子的含量，对大鼠脑缺血损伤有保护作用[14]。
综上，参龙汤可以改善脑缺血大鼠学习记忆能力，其作用机理可能与其增加脑缺血大鼠脑Bcl-2免疫组化蛋白阳性表达、减少Bax蛋白阳性表达有关，可抑制神经细胞凋亡，保护大鼠脑缺血神经元的损伤，其作用与剂量呈正相关。
参考文献：
[1] 李小玲，张在强，龙洁.脑缺血细胞凋亡的分子生物学机制[J].国外医学：脑血管疾病分册，2008，8（4）：247-250.
[2] Cheung EC， Melanson-Drapeau L， Cregan SP， et a1. Apoptosis- inducing factor is a key factor in neuronal cell death propagated by BAX-dependent and BAX-independent mechanisms[J]. J Neurosci， 2005，25（6）：1324-1334.
[3] Raj PV， Nitesh K， Prateek J， et al. Effect of lecithin on d-galactosamine induced hepatotoxicity through mitochondrial pathway involving Bcl-2 and Bax[J]. Indian J Clin Biochem， 2011，26（4）：378-384.
[4] 张岗，许成勇，耿淼，等.参龙健脑胶囊对慢性脑缺血大鼠氧化损伤及胆碱能神经递质的影响[J].中国中医药信息杂志，2011，18（1）：41-43.
[5] 叶翠飞，白容，刘汇波，等.双侧颈总动脉结扎对大鼠学习记忆相关脑区血流量的影响[J].中国实验动物学报，1999，7（1）：23-25.
[6] 陈奇.中药药理研究方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2006：1167.
[7] 诸葛启钏，译.大鼠脑立体定位图谱[M].3版.北京：人民卫生出版社， 2005：43-51.
[8] 韩济生.神经科学[M].3版.北京：北京大学医学出版社，2009：299-303.
[9] Burda J， Matiasova M， Gottlieb M. Evidence for a role of second pathophysiological stress in prevention of delayed neuronal death in the hippocampal CA1 region[J]. Neurochem Res，2005，30（11）：1397-1405.
[10] You BR， Park WH. Trichostatin A induces apoptotic cell death of HeLa cells in a Bcl-2 and oxidative stress-dependent manner[J]. Int J Oncol，2012，19（10）：397-401.
[11] Fadeel B， Orrenius S. Apoptosis：a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in human disease[J]. J Intern Med， 2005，258（6）：479-517.
[12] 许成勇，张岗，黄泉智，等.参龙健脑胶囊对脑缺血大鼠模型海马CGRP表达的影响[J].中国中医急症，2011，20（9）：1428-1429.
[13] Chen Li-ping， Wang Fa-wei， Zuo Fang. Clinical research on comprehensive treatment of senile vascular dementia[J]. Journal of Traditional Chinese Medicine，2011，31（3）：33-35.
[14] 陈利平，赵桂景，王发渭，等.参龙汤对脑缺血大鼠血管内皮生长因子表达的影响[J].中国中医急症，2012，21（10）：1587-1589.
（收稿日期：2012-12-09，编辑：华强）
关键词：参龙汤；脑缺血；学习记忆能力；Bcl-2蛋白；Bax蛋白；大鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）10-0041-03
随着我国人口老龄化趋势日益严重，缺血性脑血管病的发生率不断升高，有关缺血性脑血管病所引起的学习、记忆的保护作用及其神经生物学机制的研究一直是神经科学的研究热点。目前研究认为：缺血性神经元损伤的病理较为复杂，主要过程包括神经细胞的自身损伤机制和脑缺血性损伤级联反应，其中神经细胞的凋亡发挥着重要的作用[1]。细胞凋亡是生命进化过程中为更好地适应生存环境而主动进行的一种死亡过程。研究显示，许多神经系统疾病的发生与细胞异常凋亡有关，如Alzheimer病、痴呆、神经退行性病变、自身免疫性疾病等[2]。凋亡调控蛋白Bax为促凋亡蛋白，Bcl-2为抗凋亡蛋白，在中枢神经系统中有表达[3]。近年来，中医药治疗干预脑血管病的研究日益增多，研究发现参龙汤具补肾益气活血的作用，能提高脑缺血大鼠的学习记忆能力[4]。本研究采用慢性脑缺血动物模型，观察参龙汤对慢性脑缺血大鼠学习记忆能力，以及对海马凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax表达的影响，为临床治疗提供依据。
1 材料与方法
1.1 动物
SPF级Wistar大鼠，鼠龄3个月，体质量180～220 g，雌雄各半，中国人民解放军总医院医学动物实验中心提供，许可证号：SCXK（京）2009-0015。
1.2 药物、试剂与仪器
参龙汤（由中国人民解放军总医院中医科提供处方，制剂室制备），吡拉西坦（脑复康，石家庄中诺药业有限公司，批号09075103）。Bcl-2多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司，批号990785W），Bax多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司，批号909901W）；二抗显色试剂盒：EnVision Detection Kit 基因科技（上海）有限公司产品（Code No.GK500705）。全自动真空脱水机（LEICAASP300）、组织包埋机（LEICA EG1140H）、石蜡切片机（LEICA RM2135）、展片机（LEICA HI1210）：德国LEICA公司；光学显微镜：日本OLYMPUS BX60系统显微镜。
1.3 造模与分组
根据文献[5]制备慢性脑缺血模型。大鼠禁食12 h，禁水6 h，10%水合氯醛腹腔麻醉（30 mg/100 g）后，备皮消毒，剪开颈部皮肤，找到双侧颈总动脉，0号丝线结扎。伤口撒头孢唑啉钠粉末（0.25 g/只）后逐层缝合，放回笼中饲养。对照组10只大鼠仅分离颈总动脉，不做任何处理。造模后大鼠分为模型组、脑复康组及参龙汤小、大剂量组，每组10只，排除有明显肢体障碍的大鼠，最后模型组8只、参龙汤大剂量组8只、参龙汤小剂量组9只、脑复康组8只纳入统计。术后3 d开始参照文献[6]方法给药，根据参龙汤和脑复康的临床口服用量，按体质量换算出大鼠对应于人的等效量定为小剂量组及脑复康组的剂量，确定参龙汤小、大剂量组和脑复康组分别含原药材80、240、90 g/L。治疗组大鼠每只灌胃1 mL/d，对照组、模型组大鼠等量生理盐水灌胃，连续4周。
1.4 Morris水迷宫实验
给药4周后进行水迷宫实验，在暗室中放置一直径1.3 m、深0.5 m圆形水池，池壁为黑色，标明A、B、C、D四个象限，在任一象限放置一个直径10 cm、高30 cm的安全平台，水面没过平台约2 cm，水中注入适量墨汁，以目视看不到平台为宜，水温控制在26 ℃左右；大鼠训练2 d，开始实验5 d，记录大鼠寻找到安全平台的时间（即逃避潜伏期）作为学习成绩；第6日撤去平台，选第二象限入水点，将大鼠面向池壁放入水中，记录90 s内大鼠跨越原平台次数，作为大鼠记忆成绩。
1.5 免疫组化
水迷宫实验结束后大鼠10%水合氯醛（3 mL/kg ）腹腔注射麻醉，暴露心脏，断头取脑，参照大鼠脑立体定位图谱[7]对大鼠海马组织取材、脱水、包埋，置于APES防脱玻片上。60 ℃烤片4 h，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，0.01 mol/L PBS（pH 7.2～7.4）浸洗2 min，共3次；3%H2O2 10 min，PBS浸洗2 min，共3次；浸入0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）。微波热修复后，滴加一抗Bcl-2（1∶150）、Bax（1∶300），阴性对照组加0.01 mol/L PBS代替一抗，4 ℃冰箱孵育过夜，室温复温30 min后PBS浸洗5 min，共3次后滴加非生物素二抗，湿盒中室温30 min，PBS浸洗5 min，共3次，DAB显色光镜下控制时间，常规脱水，透明，中性树胶封片。图像分析采用Image Pro plus 5.1 图像分析系统测定每张照片的平均光密度值，每张切片同一部位取5个不同的视野。 1.6 统计学方法
采用SPSS10.0统计软件进行分析。所有数据用—x±s表示，进行正态性检验，多个样本均数比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 参龙汤对脑缺血大鼠学习、记忆能力的影响
脑缺血模型组大鼠逃避潜伏期时间较对照组明显延长，跨越平台次数较假手术组明显减少，模型组与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。参龙汤大剂量组大鼠的逃避潜伏期时间较模型组明显缩短（P<0.05），跨越平台次数明显增加（P<0.05）。见表1。
2.2 参龙汤对脑缺血大鼠海马Bax和Bcl-2免疫组化蛋白阳性表达的影响
Bax和Bcl-2免疫组化蛋白阳性表达呈黄色或棕黄色染色、深浅不一，主要位于细胞质中，胞核不染色。从表2可以看出：模型组Bax蛋白阳性表达明显强于对照组（P<0.01）；与模型组比较，参龙汤大剂量组Bax蛋白阳性表达显著降低（P<0.05）。Bcl-2阳性蛋白表达在模型组最弱，对照组最强，模型组与对照组比较差异显著（P<0.01）；参龙汤大剂量组Bcl-2蛋白阳性表达较模型组显著增强（P<0.01）。见表2。
3 讨论
缺血后引起的脑组织神经元损伤是缺血性脑血管病导致的神经功能损伤的重要机制之一。海马是大脑边缘系统的重要组成部分，参与了情绪、学习、记忆、行为、免疫调节等，在学习和记忆功能及调节神经内分泌和自主神经活动中起着重要作用，是参与调节情感、认知行为重要的边缘系统结构[8]。脑缺血后，在缺血程度较重的核心区发生不可逆神经元坏死，缺血程度较轻的半影区主要表现为细胞凋亡，研究表明，缺血性脑血管病导致的神经功能损伤与缺血后海马神经元凋亡有关，如果迅速恢复脑缺血半影区的血供，可以抑制缺血神经元凋亡，改善神经元的生存环境，对缺血性脑损伤有积极的保护作用[9]。Bcl-2基因家族成员是细胞凋亡的调控蛋白，在凋亡的发生中起重要的作用。Bcl-2家族是一组原癌基因蛋白，包含抑制和促进细胞凋亡二类功能相反的一组蛋白质，Bcl-2和Bax被认为是细胞凋亡调控的最后通路之一，是目前细胞凋亡相关基因研究最多的一类蛋白质，它们具有较高的同源性[10]。Bcl-2家族是一种重要的内源性神经保护因子，通过抑制线粒体细胞色素C释放，抑制caspase激活和蛋白水解级联反应，抑制细胞凋亡，Bax是重要的促凋亡基因，机制是形成Bax同源二聚体，Bcl-2蛋白能增强细胞存活能力，促进神经元再生[11]。
实验结果显示：模型组大鼠逃避潜伏期时间较对照组明显延长，跨越平台次数较对照组明显减少，说明造模成功。参龙汤治疗后，脑缺血大鼠逃避潜伏期时间较模型组明显缩短，跨越平台次数较脑缺血模型组明显增加，说明参龙汤可以改善脑缺血大鼠学习、记忆的能力。免疫组化结果显示：参龙汤能够增加脑缺血大鼠脑Bcl-2蛋白阳性表达，减少Bax蛋白阳性表达，参龙汤能够通过调节凋亡调控基因来发挥其抑制神经细胞凋亡的作用，对大鼠脑缺血神经元的损伤具有保护作用。参龙汤由生晒参、制何首乌、淫羊藿、地龙、石菖蒲、川芎、远志等药物组成。其中君药人参大补元气、安神益智。臣药制何首乌补血养肝、益精固髓，淫羊藿温肾壮阳，二者配伍针对肾精不足的基本病机。佐以地龙、川芎活血行气通络，去除脑络之瘀阻；石菖蒲、远志开窍宁心安神。全方共奏补肾填精、益气活血、安神增智的功效。前期临床研究表明，参龙汤对于脑缺血及血管性痴呆具有较好的疗效[12-13]，参龙汤大剂量组可降低脑缺血大鼠炎性细胞因子的含量，对大鼠脑缺血损伤有保护作用[14]。
综上，参龙汤可以改善脑缺血大鼠学习记忆能力，其作用机理可能与其增加脑缺血大鼠脑Bcl-2免疫组化蛋白阳性表达、减少Bax蛋白阳性表达有关，可抑制神经细胞凋亡，保护大鼠脑缺血神经元的损伤，其作用与剂量呈正相关。
参考文献：
[1] 李小玲，张在强，龙洁.脑缺血细胞凋亡的分子生物学机制[J].国外医学：脑血管疾病分册，2008，8（4）：247-250.
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[3] Raj PV， Nitesh K， Prateek J， et al. Effect of lecithin on d-galactosamine induced hepatotoxicity through mitochondrial pathway involving Bcl-2 and Bax[J]. Indian J Clin Biochem， 2011，26（4）：378-384.
[4] 张岗，许成勇，耿淼，等.参龙健脑胶囊对慢性脑缺血大鼠氧化损伤及胆碱能神经递质的影响[J].中国中医药信息杂志，2011，18（1）：41-43.
[5] 叶翠飞，白容，刘汇波，等.双侧颈总动脉结扎对大鼠学习记忆相关脑区血流量的影响[J].中国实验动物学报，1999，7（1）：23-25.
[6] 陈奇.中药药理研究方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2006：1167.
[7] 诸葛启钏，译.大鼠脑立体定位图谱[M].3版.北京：人民卫生出版社， 2005：43-51.
[8] 韩济生.神经科学[M].3版.北京：北京大学医学出版社，2009：299-303.
[9] Burda J， Matiasova M， Gottlieb M. Evidence for a role of second pathophysiological stress in prevention of delayed neuronal death in the hippocampal CA1 region[J]. Neurochem Res，2005，30（11）：1397-1405.
[10] You BR， Park WH. Trichostatin A induces apoptotic cell death of HeLa cells in a Bcl-2 and oxidative stress-dependent manner[J]. Int J Oncol，2012，19（10）：397-401.
[11] Fadeel B， Orrenius S. Apoptosis：a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in human disease[J]. J Intern Med， 2005，258（6）：479-517.
[12] 许成勇，张岗，黄泉智，等.参龙健脑胶囊对脑缺血大鼠模型海马CGRP表达的影响[J].中国中医急症，2011，20（9）：1428-1429.
[13] Chen Li-ping， Wang Fa-wei， Zuo Fang. Clinical research on comprehensive treatment of senile vascular dementia[J]. Journal of Traditional Chinese Medicine，2011，31（3）：33-35.
[14] 陈利平，赵桂景，王发渭，等.参龙汤对脑缺血大鼠血管内皮生长因子表达的影响[J].中国中医急症，2012，21（10）：1587-1589.
（收稿日期：2012-12-09，编辑：华强）