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摘 要：目的：比较酶联法与放免法定量检测血液制品中抗-HBS效价的差异及各自的特点。方法：用酶联法和放免法分别检测静注人免疫球蛋白（pH4）和乙型肝炎人免疫球蛋白中抗-HBS效价各10个样本，每个样本重复检测20次。同时进行重复性、线性的比较，并进一步探讨两种方法各自的特点。结果：放免法重复性优于酶联法，但线性不及酶联法。结论：在检测时应选择放免法，需注意样本稀释后的效价应在标准曲线10mIU/ml到120mIU/ml之间。
关键词：乙型肝炎病毒表面抗体；酶联免疫法；放射免疫法
中图分类号：R331.1 文献标识码：A 文章编号：1005-0515（2013）7-034-02
乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病，它由乙肝病的感染引起。全世界乙肝携带者达5亿之多，我国乙肝携带者高于人群的10%[1]。急性乙肝中会有20%转为慢性，进而可能发展为肝硬化和肝癌【2】。对于低免疫或无免疫人群，注射血液制品使其快速达到暂时免疫保护状态，具有很大的临床学意义。常用的抗-HBS效价的检测方法有酶联免疫法和放射免疫法。为此，特取2个不同品种的血液制品分别用酶免法与放免法进行抗-HBS效价检测，现介绍如下。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 样本 我公司生产的静注人免疫球蛋白（pH4）和乙型肝炎人免疫球蛋白
1.1.2 标准品 抗HBS免疫球蛋白国家标准品（非人用）。批号20041001，含量2.5IU/支。
1.1.3 试剂 酶联法：北京万泰生物药业股份有限公司；放免法：北京北方生物技术研究所。
1.1.4 设备 酶联法：酶标仪（MK3 上海热电仪器有限公司）、电子恒温水箱（HH.WZ1.600 北京中兴伟业仪器有限公司）；放免法：γ放射免疫计数器（FJ-2008PS 西安核仪器厂）、自动洗珠器（IV 北京天石医疗用品制作所）、冷冻水浴恒温振荡器（SHA-2 金坛市盛威实验仪器厂）。
1.2 方法
1.2.1 试验方法
1.2.1.1重复性比较 分别用两种方法对10批静注人免疫球蛋白（pH4）和乙型肝炎人免疫球蛋白抗-HBS效价进行检测。静注人免疫球蛋白（pH4）样本做20倍、40倍、60倍3个稀释级，乙型肝炎人免疫球蛋白样本做1500倍、2000倍、3000倍3个稀释级。每批样本均重复检测20次，计算相对标准偏差，结果见表1、表2。
1.2.1.2 线性比较 取国家标准品1支，加生理盐水2.5ml稀释成1IU/ml，分装至小离心管中，-20°C贮存。取分装好的1IU/ml的国家标准品1支，用生理盐水稀释为10mIU/ml，20mIU/ml，40mIU/ml，80mIU/ml，120mIU/ml，160mIU/ml。分别用酶联法和放免法测定，以标准品各稀释倍数理论值与测定值做双对数回归，比较R值，结果见表3。
1.2.2 酶联法实验步骤 a.吸取样本、标准品各50μl，加入包被板相应孔中。样本、标准品均做1孔平行样。b.各孔加入酶试剂50μl，空白除外，振荡混匀。c.用封板膜封板后，置37°C温浴60分钟。d.揭掉封板膜，用洗涤液洗板5次，最后一次尽量扣干e.每孔加入显色剂A、B液各50μl，振荡混匀，37°C避光显色15分钟。f.每孔加入终止液50μl，振荡混匀。10分钟内于酶标仪450nm处测定【3】。
1.2.3 放免法实验步骤 a.吸取样本、标准品各50μl，加入相应试管中。样本、标准品均做1管平行样。b.各管加入125I-HBsAg200μl。c.各管加入包被珠1粒，轻轻振荡试管架以去除气泡。20°C温浴振荡2小时。d.吸除反应液，用自动洗珠器清洗包被珠4次，每次注水4ml【4】。e.24小时内用γ放射免疫计数器测量每管CPM值。仪器本底测5次，取平均值。测量时间60秒，活度30000。
2 结果
2.2 线性比较
3 讨论
抗-HBS的效价直接决定着静注人免疫球蛋白（pH4）和乙型肝炎人免疫球蛋白药品的有效性。稳定、准确的检测结果是企业质量控制的关键，更是对消费者和社会不可推卸的责任。
根据以上试验可以看出，酶联法和放免法检测结果的相对标准偏差均在10%以内，但酶联法检测结果的相对标准偏差明显大于放免法。这是因为，酶联法在检测中影响因素较多，如水浴箱、移液器、酶标仪之间的差异及操作人员手法间的区别，加完终止液到酶标仪读测时间间隔【5】，甚至液层厚度和实验室温度也会增加检测结果的不确定度【6】。
放免法在检测中影响因素相对较少，但线性比较则不及酶联法。由于125I-HBsAg的衰变，使得160mIU/ml的线性较差。
综上所述，在检测静注人免疫球蛋白（pH4）和乙型肝炎人免疫球蛋白抗-HBS的效价时应选择放免法，需注意的是样本稀释后的浓度应在标准曲线10mIU/ml到120mIU/ml之间，才能确保检测结果的准确性。
参考文献：
【1】 何印雷 实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义【J】 实用医学杂志，2006，13（22）：3954-3955
【2】 李引钰 两种免疫分析法检测乙型肝炎的分析 检验医学与临床，2011，2（8）：349-350
【3】 乙型肝炎病毒表面抗体定量诊测定剂盒（酶联免疫法）使用说明书 北京万泰生物药业股份有限公司
【4】乙型肝炎病毒表面抗体定量诊断试剂盒使用说明书 北京北方生物技术研究所
【5】 王福俊 罗佳臻 两种方法检测低浓度乙型肝炎病毒表面抗体的探讨 检验医学与临床，2007，6，4（6）：485-487
【6】 程秀吉 卢利军 姜永莉 李爱军 ELISA法检测HBsAg结果不确定度评定 中华临床医学研究杂志，2006，2，12（3）：283-285
关键词：乙型肝炎病毒表面抗体；酶联免疫法；放射免疫法
中图分类号：R331.1 文献标识码：A 文章编号：1005-0515（2013）7-034-02
乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病，它由乙肝病的感染引起。全世界乙肝携带者达5亿之多，我国乙肝携带者高于人群的10%[1]。急性乙肝中会有20%转为慢性，进而可能发展为肝硬化和肝癌【2】。对于低免疫或无免疫人群，注射血液制品使其快速达到暂时免疫保护状态，具有很大的临床学意义。常用的抗-HBS效价的检测方法有酶联免疫法和放射免疫法。为此，特取2个不同品种的血液制品分别用酶免法与放免法进行抗-HBS效价检测，现介绍如下。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 样本 我公司生产的静注人免疫球蛋白（pH4）和乙型肝炎人免疫球蛋白
1.1.2 标准品 抗HBS免疫球蛋白国家标准品（非人用）。批号20041001，含量2.5IU/支。
1.1.3 试剂 酶联法：北京万泰生物药业股份有限公司；放免法：北京北方生物技术研究所。
1.1.4 设备 酶联法：酶标仪（MK3 上海热电仪器有限公司）、电子恒温水箱（HH.WZ1.600 北京中兴伟业仪器有限公司）；放免法：γ放射免疫计数器（FJ-2008PS 西安核仪器厂）、自动洗珠器（IV 北京天石医疗用品制作所）、冷冻水浴恒温振荡器（SHA-2 金坛市盛威实验仪器厂）。
1.2 方法
1.2.1 试验方法
1.2.1.1重复性比较 分别用两种方法对10批静注人免疫球蛋白（pH4）和乙型肝炎人免疫球蛋白抗-HBS效价进行检测。静注人免疫球蛋白（pH4）样本做20倍、40倍、60倍3个稀释级，乙型肝炎人免疫球蛋白样本做1500倍、2000倍、3000倍3个稀释级。每批样本均重复检测20次，计算相对标准偏差，结果见表1、表2。
1.2.1.2 线性比较 取国家标准品1支，加生理盐水2.5ml稀释成1IU/ml，分装至小离心管中，-20°C贮存。取分装好的1IU/ml的国家标准品1支，用生理盐水稀释为10mIU/ml，20mIU/ml，40mIU/ml，80mIU/ml，120mIU/ml，160mIU/ml。分别用酶联法和放免法测定，以标准品各稀释倍数理论值与测定值做双对数回归，比较R值，结果见表3。
1.2.2 酶联法实验步骤 a.吸取样本、标准品各50μl，加入包被板相应孔中。样本、标准品均做1孔平行样。b.各孔加入酶试剂50μl，空白除外，振荡混匀。c.用封板膜封板后，置37°C温浴60分钟。d.揭掉封板膜，用洗涤液洗板5次，最后一次尽量扣干e.每孔加入显色剂A、B液各50μl，振荡混匀，37°C避光显色15分钟。f.每孔加入终止液50μl，振荡混匀。10分钟内于酶标仪450nm处测定【3】。
1.2.3 放免法实验步骤 a.吸取样本、标准品各50μl，加入相应试管中。样本、标准品均做1管平行样。b.各管加入125I-HBsAg200μl。c.各管加入包被珠1粒，轻轻振荡试管架以去除气泡。20°C温浴振荡2小时。d.吸除反应液，用自动洗珠器清洗包被珠4次，每次注水4ml【4】。e.24小时内用γ放射免疫计数器测量每管CPM值。仪器本底测5次，取平均值。测量时间60秒，活度30000。
2 结果
2.2 线性比较
3 讨论
抗-HBS的效价直接决定着静注人免疫球蛋白（pH4）和乙型肝炎人免疫球蛋白药品的有效性。稳定、准确的检测结果是企业质量控制的关键，更是对消费者和社会不可推卸的责任。
根据以上试验可以看出，酶联法和放免法检测结果的相对标准偏差均在10%以内，但酶联法检测结果的相对标准偏差明显大于放免法。这是因为，酶联法在检测中影响因素较多，如水浴箱、移液器、酶标仪之间的差异及操作人员手法间的区别，加完终止液到酶标仪读测时间间隔【5】，甚至液层厚度和实验室温度也会增加检测结果的不确定度【6】。
放免法在检测中影响因素相对较少，但线性比较则不及酶联法。由于125I-HBsAg的衰变，使得160mIU/ml的线性较差。
综上所述，在检测静注人免疫球蛋白（pH4）和乙型肝炎人免疫球蛋白抗-HBS的效价时应选择放免法，需注意的是样本稀释后的浓度应在标准曲线10mIU/ml到120mIU/ml之间，才能确保检测结果的准确性。
参考文献：
【1】 何印雷 实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义【J】 实用医学杂志，2006，13（22）：3954-3955
【2】 李引钰 两种免疫分析法检测乙型肝炎的分析 检验医学与临床，2011，2（8）：349-350
【3】 乙型肝炎病毒表面抗体定量诊测定剂盒（酶联免疫法）使用说明书 北京万泰生物药业股份有限公司
【4】乙型肝炎病毒表面抗体定量诊断试剂盒使用说明书 北京北方生物技术研究所
【5】 王福俊 罗佳臻 两种方法检测低浓度乙型肝炎病毒表面抗体的探讨 检验医学与临床，2007，6，4（6）：485-487
【6】 程秀吉 卢利军 姜永莉 李爱军 ELISA法检测HBsAg结果不确定度评定 中华临床医学研究杂志，2006，2，12（3）：283-285