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【摘 要】 目的 研究瘟必清口服液制备工艺。方法 用正交设计优化瘟必清口服液水提工艺和醇沉工艺。结果 水提的最佳工艺为加10倍量水提取2次，每次1.5 h；醇沉最佳工艺为将水提液浓缩至相对密度为1.08，醇沉浓度为60%，静置24 h。结论 按照最佳工艺制备的瘟必清口服液成品质量可控、稳定性良好
【关键词】 瘟必清口服液 制备工艺
【中图分类号】 R917 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）07-0284-01
近年来，蔓延全球的SARS病毒、禽流感病毒、甲流病毒等病毒引起的强传染性病毒性疾病（瘟疫），一旦感染，传播迅速，较难控制，死亡率高。现代研究表明，中药可同时具有广谱抗菌、抗病毒、抗炎、调节免疫功能等功能，能发挥整体综合调节作用，可在病毒性疾病的不同病理环节发挥其相应的作用。我们研制的纯中药制剂——瘟必清口服液具有清热、解毒、抗炎等功能。为保证制剂的稳定性，本研究对瘟必清口服液制备工艺进行了研究，现报道如下：
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters600高效液相色谱仪；二极管阵列检测器；FA1004电子分析天平。
1.2 试药
瘟必清口服液处方组成药物茵陈、大黄、黄芪、甘草等药味购自湖北省中医院中药库，全部药材均鉴定为正品。绿原酸；甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 正交实验设计优化口服液水提工艺
根据瘟必清口服液处方中主药茵陈有效成分绿原酸的性质及预实验结果，以口服液干浸膏得率与绿原酸提取率为综合考察指标，以加水量（倍数），煎煮时间（h），煎煮次数为影响因素，每个因素三个水平，按L9（34）进行正交实验设计，对组方药材进行水提研究。因素水平见表1（略）。
2.1.1 得膏率
将处方量药材，按正交实验方案进行水煎提取，提取液合并后蒸干，低温真空干燥，恒重，精密称重，计算得膏率。
2.1.2 绿原酸含量测定
2.1.2.1 标准品溶液
称取绿原酸标准品0.6 mg，用50%甲醇溶解定容至10 mL，作为对照品溶液（0.06 mg/mL）。
2.1.2.2 样品溶液制备
称取除大黄以外的处方量药材，加入大黄药渣，按正交实验方案进行水煎提取，提取液合并后与大黄提取液混合浓缩至75 mL。精密量取浓缩液1 mL于50 mL容量瓶中，加适量50%甲醇超声处理30 min，放冷至室温，补充50%甲醇至刻度，过滤，精密量取6 mL滤液于10 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得样品溶液。
2.1.2.3 线性回归方程
色谱柱：AichromBond-AQ C18柱（5 mm，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-1%乙酸水（30∶70）；柱温25℃；检测波长327 nm；流速1.0 mL/min。精密吸取标准品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μL进样，记录峰面积，得回归线性方程：Y=2×106X+25 118，Y为峰面积，X为绿原酸含量，相关系数r = 0.9997。
2.1.2.4 样品含量测定
精密吸取10 μL样品溶液，进样，记录峰面积，依据线性回归方程计算绿原酸的含量，并求出绿原酸的百分含量。
2.1.2.5 结果分析
实验结果及分析见表2、3（略）。从方差分析表3中可看出，因素C对结果有非常显著影响，因素B有显著影响，因素A的影响不大。各因素的影响程度是C>B>A。最佳工艺条件是A3B3C3，但从节省时间，降低成本考虑，最佳工艺条件为A3B2C2，即加10倍量水提取2次，每次1.5h。
表2 L9（34）实验方案及结果
注：K为各因素相应水平的和，R为K的极差；得膏率评分=（50/最大得膏率×得膏率）×100%；绿原酸含量评分=（50/最大绿原酸含量×绿原酸含量）×100%；综合评分=得膏率评分+绿原酸含量评分
表3 方差分析表
2.1.2.6 最佳工艺验证
按处方，称取3份药材，按优选提取工艺制备样品溶液。用HPLC方法测定绿原酸含量，结果3份样品绿原酸含量分别为0.564%、0.571%、0.577%，水提转移率分别是89.10%、90.20%、91.15%。验证试验结果和正交试验优选结果相近。
2.2 正交实验优化醇沉工艺
中药水提过程中淀粉、树脂、鞣质等成分会影响口服液的澄明度，放置后会出现沉淀。为保证制剂的质量和稳定性，需要进行醇沉除杂处理。
根据预实验结果，以醇沉后上清滤液的干浸膏得率与绿原酸转移率为考察指标，以水提浓缩液的相对密度、醇沉浓度、静置时间为三个主要影响因素，每个因素三个水平，按L9（34）正交设计，对水提浓缩液进行醇沉处理。因素水平见表4（略）。实验结果见表5（略）。
2.3 增溶剂的优选
为了保证制剂澄清，选吐温-80作助溶剂，对其用量进行筛选。结果表明：吐温-80用量在1.0%～2.0%时，药液均澄清。优化用量为1.0%。见表6（略）。
表6 不同吐温-80用量的比较试验结果
注：“-”表示药液澄清，“+”表示药液浑浊
2.4 瘟必清口服液制备工艺
加10倍大黄药材的100℃水，温浸3次，每次20 min，合并温浸液。将方中其他药材用10倍量水浸泡1 h，与大黄温浸后的药渣混合，加水煎煮2次，每次1.5 h，合并滤液并浓缩至相对密度为1.08，加适量95%的乙醇至浓度为60%，然后放置24 h，滤取上清液，水浴回收乙醇至无醇味。将上述大黄温浸液与其他药材醇沉回收液混合，浓缩至2 g生药/mL，加1.0%的吐温-80，再加0.2%的苯甲酸钠，灌封，灭菌。
3 讨论
大黄在高温、长时间提取时结合蒽醌易分解，致泻作用下降，故采用温浸提取大黄。茵陈为方中君药，其中绿原酸为其代表性成分，茵陈的主要有效成分为绿原酸，它具有抗病毒、保肝利胆、抗菌、清除自由基、抗氧化、抗内毒素等多种药理作用，故工艺研究以其为指标成分。试验中HPLC法的流动相是在查阅文献等的基础上，经多次实验而得，研究表明该流动相可使绿原酸与其他成分基线分离，峰形良好，保留时间合适。
参考文献
[1] 司存武.禽流感病毒的研究与进展[J].哈尔滨医药，2013，3（1）：6
[2] 李霞.禽流感流行特点及其防治综述[J].农业技术，2012，5（8）：13
【关键词】 瘟必清口服液 制备工艺
【中图分类号】 R917 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）07-0284-01
近年来，蔓延全球的SARS病毒、禽流感病毒、甲流病毒等病毒引起的强传染性病毒性疾病（瘟疫），一旦感染，传播迅速，较难控制，死亡率高。现代研究表明，中药可同时具有广谱抗菌、抗病毒、抗炎、调节免疫功能等功能，能发挥整体综合调节作用，可在病毒性疾病的不同病理环节发挥其相应的作用。我们研制的纯中药制剂——瘟必清口服液具有清热、解毒、抗炎等功能。为保证制剂的稳定性，本研究对瘟必清口服液制备工艺进行了研究，现报道如下：
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters600高效液相色谱仪；二极管阵列检测器；FA1004电子分析天平。
1.2 试药
瘟必清口服液处方组成药物茵陈、大黄、黄芪、甘草等药味购自湖北省中医院中药库，全部药材均鉴定为正品。绿原酸；甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 正交实验设计优化口服液水提工艺
根据瘟必清口服液处方中主药茵陈有效成分绿原酸的性质及预实验结果，以口服液干浸膏得率与绿原酸提取率为综合考察指标，以加水量（倍数），煎煮时间（h），煎煮次数为影响因素，每个因素三个水平，按L9（34）进行正交实验设计，对组方药材进行水提研究。因素水平见表1（略）。
2.1.1 得膏率
将处方量药材，按正交实验方案进行水煎提取，提取液合并后蒸干，低温真空干燥，恒重，精密称重，计算得膏率。
2.1.2 绿原酸含量测定
2.1.2.1 标准品溶液
称取绿原酸标准品0.6 mg，用50%甲醇溶解定容至10 mL，作为对照品溶液（0.06 mg/mL）。
2.1.2.2 样品溶液制备
称取除大黄以外的处方量药材，加入大黄药渣，按正交实验方案进行水煎提取，提取液合并后与大黄提取液混合浓缩至75 mL。精密量取浓缩液1 mL于50 mL容量瓶中，加适量50%甲醇超声处理30 min，放冷至室温，补充50%甲醇至刻度，过滤，精密量取6 mL滤液于10 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得样品溶液。
2.1.2.3 线性回归方程
色谱柱：AichromBond-AQ C18柱（5 mm，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-1%乙酸水（30∶70）；柱温25℃；检测波长327 nm；流速1.0 mL/min。精密吸取标准品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μL进样，记录峰面积，得回归线性方程：Y=2×106X+25 118，Y为峰面积，X为绿原酸含量，相关系数r = 0.9997。
2.1.2.4 样品含量测定
精密吸取10 μL样品溶液，进样，记录峰面积，依据线性回归方程计算绿原酸的含量，并求出绿原酸的百分含量。
2.1.2.5 结果分析
实验结果及分析见表2、3（略）。从方差分析表3中可看出，因素C对结果有非常显著影响，因素B有显著影响，因素A的影响不大。各因素的影响程度是C>B>A。最佳工艺条件是A3B3C3，但从节省时间，降低成本考虑，最佳工艺条件为A3B2C2，即加10倍量水提取2次，每次1.5h。
表2 L9（34）实验方案及结果
注：K为各因素相应水平的和，R为K的极差；得膏率评分=（50/最大得膏率×得膏率）×100%；绿原酸含量评分=（50/最大绿原酸含量×绿原酸含量）×100%；综合评分=得膏率评分+绿原酸含量评分
表3 方差分析表
2.1.2.6 最佳工艺验证
按处方，称取3份药材，按优选提取工艺制备样品溶液。用HPLC方法测定绿原酸含量，结果3份样品绿原酸含量分别为0.564%、0.571%、0.577%，水提转移率分别是89.10%、90.20%、91.15%。验证试验结果和正交试验优选结果相近。
2.2 正交实验优化醇沉工艺
中药水提过程中淀粉、树脂、鞣质等成分会影响口服液的澄明度，放置后会出现沉淀。为保证制剂的质量和稳定性，需要进行醇沉除杂处理。
根据预实验结果，以醇沉后上清滤液的干浸膏得率与绿原酸转移率为考察指标，以水提浓缩液的相对密度、醇沉浓度、静置时间为三个主要影响因素，每个因素三个水平，按L9（34）正交设计，对水提浓缩液进行醇沉处理。因素水平见表4（略）。实验结果见表5（略）。
2.3 增溶剂的优选
为了保证制剂澄清，选吐温-80作助溶剂，对其用量进行筛选。结果表明：吐温-80用量在1.0%～2.0%时，药液均澄清。优化用量为1.0%。见表6（略）。
表6 不同吐温-80用量的比较试验结果
注：“-”表示药液澄清，“+”表示药液浑浊
2.4 瘟必清口服液制备工艺
加10倍大黄药材的100℃水，温浸3次，每次20 min，合并温浸液。将方中其他药材用10倍量水浸泡1 h，与大黄温浸后的药渣混合，加水煎煮2次，每次1.5 h，合并滤液并浓缩至相对密度为1.08，加适量95%的乙醇至浓度为60%，然后放置24 h，滤取上清液，水浴回收乙醇至无醇味。将上述大黄温浸液与其他药材醇沉回收液混合，浓缩至2 g生药/mL，加1.0%的吐温-80，再加0.2%的苯甲酸钠，灌封，灭菌。
3 讨论
大黄在高温、长时间提取时结合蒽醌易分解，致泻作用下降，故采用温浸提取大黄。茵陈为方中君药，其中绿原酸为其代表性成分，茵陈的主要有效成分为绿原酸，它具有抗病毒、保肝利胆、抗菌、清除自由基、抗氧化、抗内毒素等多种药理作用，故工艺研究以其为指标成分。试验中HPLC法的流动相是在查阅文献等的基础上，经多次实验而得，研究表明该流动相可使绿原酸与其他成分基线分离，峰形良好，保留时间合适。
参考文献
[1] 司存武.禽流感病毒的研究与进展[J].哈尔滨医药，2013，3（1）：6
[2] 李霞.禽流感流行特点及其防治综述[J].农业技术，2012，5（8）：13