【摘 要】
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目的:探讨兔角膜基质细胞(CSCs)体外移植兔角膜后的存活时间.方法:体外培养原代兔CSCs,并行细胞免疫组化鉴定,利用慢病毒载体(LV)携带标记基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染
【机 构】
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昆明医科大学第四附属医院云南省第二人民医院云南省眼科研究所云南省眼科疾病研究重点实验室, 中国云南省昆明市,650021
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目的:探讨兔角膜基质细胞(CSCs)体外移植兔角膜后的存活时间.方法:体外培养原代兔CSCs,并行细胞免疫组化鉴定,利用慢病毒载体(LV)携带标记基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染兔CSCs,倒置荧光显微镜下观察转染后细胞生长状态及荧光强度,体外动物实验,随机分为2组,实验组行LV-EGFP标记的兔CSCs细胞悬液角膜基质注射,对照组等量生理盐水角膜基质注射,转染后1wk,1 mo取材冰冻切片观察移植的CSCs荧光,石蜡切片行苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态.结果:LV-EGFP转染兔CSCs在倒置荧光显微镜下24h后可见少量荧光,96h和110h荧光较强,转染后的CSCs与正常CSCs细胞形态无明显差异;转染后1wk,1 mo实验组中角膜基质层中可见绿色荧光,对照组中无绿色荧光;石蜡切片1wk实验组见明显上皮细胞增生及角膜轻微水肿,少量炎症细胞浸润,转染后1 mo实验组上皮细胞增生减弱,未见角膜层水肿;对照组1wk,1 mo均未见明显异常.结论:LV-EGFP标记的兔CSCs行体外角膜基质移植,可在角膜中至少存活1 mo,且与邻近组织相容性较好.
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