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目的 观察钙依赖性蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)在胆管癌组织中表达情况,探讨其对胆管癌细胞HuCCT1血管生成的影响及机制.方法 20例胆管癌患者,取其手术切除的胆管癌组织和癌旁正常组织.胆管癌细胞株HuCCT1随机分为空白对照组(正常培养)、siRNA-NC组(转染阴性对照siRNA-NC)和siRNA-CaMKⅡ组(转染siRNA-CaMK Ⅱ).采用实时荧光定量PCR法检测2种组织和3组细胞CaMK Ⅱ mRNA相对表达量;采用免疫组织化学法检测2种组织CaMK Ⅱ蛋白阳性表达率;采用Western blot法检测3组细胞CaMKⅡ、磷酸化 MEK(phosphorylated MEK,p-MEK)、MEK、p-ERK 和 ERK 蛋白相对表达量,比较 p-MEK/MEK、p-ERK/ERK;采用CCK-8实验检测3组细胞增殖率;采用流式细胞术检测3组细胞周期分布情况;采用ELISA法检测3组细胞培养上清液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量;采用Matrigel胶管腔形成实验检测3组原代人脐静脉内皮细胞HUVECs成管情况.结果 胆管癌组织CaMKⅡ mRNA相对表达量(4.58±0.48)、CaMKⅡ蛋白阳性表达率(95％)高于癌旁正常组织(1.00±0.06、10％)(P＜0.05).siRN A-CaMK Ⅱ组细胞CaMK Ⅱ mRNA和蛋白相对表达量及p-MEK/MEK、p-ERK/ERK均低于空白对照组和siRNA-NC组(P＜0.05),空白对照组与siRNA-NC组比较差异无统计学意义(P＞0.05).转染48、72 h后,siRNA-CaMK Ⅱ组细胞增殖率[(78.63±8.06)％、(69.71±7.03)％]低于空白对照组(100％、100％)和 siRNA-NC 组[(99.19±9.58)％、(99.02±9.72)％](P＜0.05),空白对照组与siRNA-NC组比较差异无统计学意义(P＞0.05).转染48 h后,siRNA-CaMK Ⅱ组G0/G1期与S期细胞比率[(16.19±1.57)％、(17.39±1.83)％]低于空白对照组[(52.61±5.02)％、(20.31±2.15)％]和 siRNA-NC 组[(51.31±5.10)％、(25.23±2.61)％](P＜0.05),G2/M 期细胞比率[(66.41±6.72)％]高于空白对照组[(27.08±2.81)％]和siRNA-NC组[(23.46±2.30)％](P＜0.05),空白对照组与siRNA-NC组比较差异无统计学意义(P＞0.05).siRNA-CaMKⅡ组细胞培养上清液中VEGF含量[(652.81±45.77)ng/L]和HUVECs管腔形成数(8.83±0.91)均低于空白对照组[(771.94±52.35)ng/L、17.58±1.84]和 siRNA-NC 组[(768.46±46.09)ng/L、15.89±1.66](P＜0.05),空白对照组与siRNA-NC组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 胆管癌组织中CaMK Ⅱ呈高表达,下调HuCCT1细胞中CaMK Ⅱ表达可抑制细胞增殖,导致G2/M期阻滞,抑制血管生成,其机制可能与MEK/ERK信号通路有关.