论文部分内容阅读
【摘要】通过对提取液、净化方式的优化，色谱柱的选择建立饲料中三聚氰胺的高效液相色谱质谱联用法，针对相应的提取液用正交试验筛选最佳的提取方案。样品经乙腈水溶液（70:30，V/V）超声提取，离心后取上清液与等体积乙腈混匀，冷冻离心后直接过滤膜即可上机测定。经Waters Atlantis HILIC Silica（150mm×2.1mm，5μm）分离，选择反应监测（SRM）正离子模式测定。结果表明：该方法在三聚氰胺含量为5.0~50.0ng/mL范围内线性关系良好，线性方程为Y=8958.7X-3327.8，R2=0.9996以三倍信噪比计算方法最低检出限为0.01mg/kg，平均加标回收率为：91.7%～98.5%，RSD＜5.0%。方法前处理快速简便，净化效果好，准确度和精密度高，可用于饲料中三聚氰胺的测定。
【关键词】高效液相色谱质谱联用法;饲料;三聚氰胺
0.引言
三聚氰胺常用的检测方法有：HPLC法[1,5,6]，LC-MS/MS法，GC-MS/MS法[7]。关于饲料中三聚氰胺残留方法，目前只有农业行业标准，还没有国家标准。农业行业标准NY/T1372-2007规定了HPLC法和GC-MS法[1]。其中HPLC法检出限为2.0mg/kg；而GC-MS法需衍生化，前处理较繁琐。水产养殖过程得投入大量饲料，水产品动物长期摄入含三聚氰胺的饲料会在体内蓄积，可能通过食物链影响人类健康。本研究通过比较不同的提取液提取效果，净化方式的优化，色谱柱的选择。针对提取液，采用正交试验筛选最佳的提取方案,旨在建立饲料中三聚氰胺的HPLC-MS法，以便有效地从源头控制饲料及水产品的安全。
1.材料与方法
1.1材料、仪器与试剂
饲料：购买于湛江市批发市场。
三聚氰胺标准品(纯度≥99%，aldrich公司)，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
三聚氰胺标准储备液：准确称取0.1g±0.0001g的三聚氰胺标准品于100mL容量瓶中，用乙腈超声溶解冷却定容至刻度线，配成浓度为1.0mg/mL的标准储备液，于4℃保存备用。
三聚氰胺标准使用液：准确吸取1.0mg/mL的三聚氰胺的标准储备液，用等体积的乙腈和5mmol/L乙酸铵（内含0.1%甲酸溶液）逐级稀释配成5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL的标准使用液。
乙腈水提液：取乙腈700mL，用水定容至1000mL，混匀。
5mmol/L乙酸胺缓冲液：准确称取0.386g乙酸胺溶解与少量水中，加入1mL甲酸，用超纯水定容至1000mL。
1.2检测条件
1.2.1色谱条件
色谱柱：Waters Atlantis HILIC Silica（150mmx2.1mm，5μm），进样体积：10μL，柱温：30℃，流动相：乙腈：5mmol/L乙酸铵（内含0.1%甲酸溶液，V/V=1:1），流速：250μL/min。
1.2.2质谱条件
1.3样品提取
2.结果与讨论
2.1提取及净化条件的优化
2.1.1提取液的选择
图1 不同比例的提取液的提取效果
2.1.2色谱柱的选择
2.2.2回收率和精密度实验
表3 饲料中三聚氰胺的加标回收率
3.结论
【参考文献】
［１］全国饲料工业标准化技术委员会. NY/T1372-2007 饲料中三聚氰胺的测定[S].北京:中国标准出版社.
［２］冯建民,秸俊红.中国三聚氰胺生产应用现状及产业技术分析[J].化工科技市场, 2006,29(5):111.
［３］林祥梅,王建峰,贾广乐,等.三聚氰胺的毒性研究[J].毒理学杂志,2008,22(3):216-218.
［４］中国国家标准化管理委员会.GB/T22400-2008.原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法[S].北京:中国标准出版社,2008.
［５］杨云霞,刘彤,周桂英,等.小麦谷盶粉中三聚氰胺的高效液相色谱法测定[J].分析测试学报,2008,27(3):322-324.
［６］蔡勤仁,欧阳颖瑜,钱振杰,等.超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定饲料残留中的三聚氰胺[J].色谱,2008,26(3):339-342.
【关键词】高效液相色谱质谱联用法;饲料;三聚氰胺
0.引言
三聚氰胺常用的检测方法有：HPLC法[1,5,6]，LC-MS/MS法，GC-MS/MS法[7]。关于饲料中三聚氰胺残留方法，目前只有农业行业标准，还没有国家标准。农业行业标准NY/T1372-2007规定了HPLC法和GC-MS法[1]。其中HPLC法检出限为2.0mg/kg；而GC-MS法需衍生化，前处理较繁琐。水产养殖过程得投入大量饲料，水产品动物长期摄入含三聚氰胺的饲料会在体内蓄积，可能通过食物链影响人类健康。本研究通过比较不同的提取液提取效果，净化方式的优化，色谱柱的选择。针对提取液，采用正交试验筛选最佳的提取方案,旨在建立饲料中三聚氰胺的HPLC-MS法，以便有效地从源头控制饲料及水产品的安全。
1.材料与方法
1.1材料、仪器与试剂
饲料：购买于湛江市批发市场。
三聚氰胺标准品(纯度≥99%，aldrich公司)，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
三聚氰胺标准储备液：准确称取0.1g±0.0001g的三聚氰胺标准品于100mL容量瓶中，用乙腈超声溶解冷却定容至刻度线，配成浓度为1.0mg/mL的标准储备液，于4℃保存备用。
三聚氰胺标准使用液：准确吸取1.0mg/mL的三聚氰胺的标准储备液，用等体积的乙腈和5mmol/L乙酸铵（内含0.1%甲酸溶液）逐级稀释配成5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL的标准使用液。
乙腈水提液：取乙腈700mL，用水定容至1000mL，混匀。
5mmol/L乙酸胺缓冲液：准确称取0.386g乙酸胺溶解与少量水中，加入1mL甲酸，用超纯水定容至1000mL。
1.2检测条件
1.2.1色谱条件
色谱柱：Waters Atlantis HILIC Silica（150mmx2.1mm，5μm），进样体积：10μL，柱温：30℃，流动相：乙腈：5mmol/L乙酸铵（内含0.1%甲酸溶液，V/V=1:1），流速：250μL/min。
1.2.2质谱条件
1.3样品提取
2.结果与讨论
2.1提取及净化条件的优化
2.1.1提取液的选择
图1 不同比例的提取液的提取效果
2.1.2色谱柱的选择
2.2.2回收率和精密度实验
表3 饲料中三聚氰胺的加标回收率
3.结论
【参考文献】
［１］全国饲料工业标准化技术委员会. NY/T1372-2007 饲料中三聚氰胺的测定[S].北京:中国标准出版社.
［２］冯建民,秸俊红.中国三聚氰胺生产应用现状及产业技术分析[J].化工科技市场, 2006,29(5):111.
［３］林祥梅,王建峰,贾广乐,等.三聚氰胺的毒性研究[J].毒理学杂志,2008,22(3):216-218.
［４］中国国家标准化管理委员会.GB/T22400-2008.原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法[S].北京:中国标准出版社,2008.
［５］杨云霞,刘彤,周桂英,等.小麦谷盶粉中三聚氰胺的高效液相色谱法测定[J].分析测试学报,2008,27(3):322-324.
［６］蔡勤仁,欧阳颖瑜,钱振杰,等.超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定饲料残留中的三聚氰胺[J].色谱,2008,26(3):339-342.