【摘 要】
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目的 对云南省1株从手足口病病例中分离得到的新型肠道病毒EV-A89进行分子生物学鉴定，并对其基因特征进行分析。方法 对2022年1―12月云南省手足口病实验室监测网络收集的1 448份手足口病病例粪便标本进行病毒分离，将经处理的便悬液接种于人横纹肌肉瘤（human rhabdomyosarcoma,RD）细胞和人喉表皮样癌（human epidermoid carcinoma, Hep-2）细胞
【基金项目】
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国家科技重大专项（2017ZX10103010）；
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目的 对云南省1株从手足口病病例中分离得到的新型肠道病毒EV-A89进行分子生物学鉴定，并对其基因特征进行分析。方法 对2022年1―12月云南省手足口病实验室监测网络收集的1 448份手足口病病例粪便标本进行病毒分离，将经处理的便悬液接种于人横纹肌肉瘤（human rhabdomyosarcoma,RD）细胞和人喉表皮样癌（human epidermoid carcinoma, Hep-2）细胞，在出现典型的细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）后，采用反转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）对阳性分离物进行VP4/VP2结合区序列和VP1区基因扩增，对扩增产物进行基因测序（Sanger法）。用Sequencher5.4. 5软件对测序图谱进行拼接和编辑，分别得到病毒VP4/VP2结合区序列和VP1区序列。对病毒株VP4/VP2结合区序列和VP1区序列进行序列鉴定，得到1株EV-A89（标本编号：B36）。用Mega 5.2软件的邻位相接法（neighbor jorning method）和Kimura 2参数法（Kimura 2 parameter）构建B36株病毒的基因进化树。结果 1 448份手足口病病例粪便标本中，共分离得到126株病毒。对病毒株VP4/VP2结合区和VP1区序列鉴定，得到1株EV-A89。VP4/VP2结合区的序列同源性分析表明，该病毒最接近分离自新疆的1株EV-A89病毒（KSYPH-TRMH22F-XJ-CHN-2011, KT277550，以下简称KSYPH-TRMH22F），二者的核苷酸（nucleotide,nt）相似性为100.00%，氨基酸（amino acid,aa）同源性为100.00%；该病毒与EV-A89原型株BAN00-10359-BAN-2000 （基因库编号：AY697459）的核苷酸相似性为93.82%，氨基酸同源性为99.38%；在VP1区，该病毒也最接近分离自新疆的EV-A89病毒KSYPH-TRMH22F；该病毒与KSYPHTRMH22F的核苷酸相似性为99.66%，氨基酸同源性为98.99%；该病毒与EV-A89原型株BAN00-10359的核苷酸相似性为97.90%，氨基酸同源性为98.31%。结论 在云南省2022年手足口病病例中检测到1株EV-A89病毒，该病毒为肠道病毒A组的一种新型病毒。
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