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【摘 要】目的：建立肉及肉制品中高效液相色谱测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠的一种简单可行前处理方法。方法：采用两种不同沉淀剂除去肉及肉制品中的脂肪及蛋白质后，用高效液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠。结果：1、采用金属盐作沉淀剂时，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的相对标准偏差分别为0.91%，1.14%，0.64%，方法回收率分别为98.1%～99.1%，98.5%～100.6%，98.9%～99.8%；2、采用生物碱试剂作沉淀剂时，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的相对标准偏差分别为1.00%，1.48%，0.31%，方法回收率分别为88.2%～91.4%，88.7%～93.8%，89.1%～94.6%。结论：方法1是一种简单及结果准确的前处理方法。
【关键词】苯甲酸；山梨酸；糖精钠；高效液相色谱
【中图分类号】R155 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）10—0105—01
肉及肉制品中的脂肪和蛋 质对苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定极为不 利，如果样品前处理不好，会污染色谱柱，严重时会造成色谱柱阻塞，使色谱柱彻底不能使用。这类样品处理的关键在于找到一种沉淀剂既能除出脂肪和蛋白质，又能得到准确的测量结果。GB/T5009.28-2003《食品中糖精钠的测定》第一法高效液相色谱法，仅规定了汽水、果汁类和配制酒类样品的前处理方法，而对肉及肉制品样品没有前处理方法。为测定肉及肉制品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量，我们分别采用金属盐和生物碱试剂来沉淀样品中的脂肪和蛋白质，测定结果满意，寻找出一种简单可行的前处理方法。
1 材料与方法
1.1仪器和试剂
日本岛津SPD-20A（紫外检测器，自动进样器）；色谱柱DIKMA C18（4.6mm×250mm 5um）；苯甲酸标准溶液（1.00mg/mL，GBW（E）100006，中国计量科学研究院）；山梨酸标准溶液（1.00mg/mL，GBW（E）100007， 中国计量科学研究院）；糖精钠标准溶液（1.00mg/mL，GBW（E）100008，中国计量科学研究院）；0.02mol/L乙酸
铵溶液（经0.45um滤膜过滤，成都金山化学试剂有限公司），甲醇（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司），乙酸锌溶液（称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸，加水溶解至100mL，重庆北碚化学试剂厂）亚铁氰化钾溶液（称10.6g加水至100mL，成都市化学试剂厂）；10%硫酸；10%钨酸钠溶液（广东省台山化工厂），超纯水（没注明的试剂均为AR）。
1.2色谱条件
流动相：甲醇︰0.02mol/L乙酸铵（3︰97）；流量：1.0mL/min；检测波长230nm；柱温35℃；进样量20uL。
1.3样品处理
1.3.1 称取5.0g左右粉碎均匀的样品，放入50mL离心管中，加30mL水，旋涡振荡摇匀，超声提取30min，于8000r/min离心5min，上清液转入另一50mL离心管中，加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2mL，振荡摇匀后，定容至50mL，再于8000r/min离心5min，取上清液经0.45um微孔滤膜过滤后上机检测。
1.3.2称取5.0g左右粉碎均匀的样品，放入50mL离心管中，加30mL水，旋涡振荡摇匀，超声提取30min，于8000r/min离心5min，上清液转入另一50mL离心管中，加入10%硫酸溶液，10%钨酸钠溶液各1mL，振荡摇匀后，定容至50mL，再于8000r/min离心5min，取上清液经0.45um微孔滤膜过滤后上机检测。
1.4 标准曲线的制备
配制苯甲酸、山梨酸、糖精钠混合物标准溶液50ug/mL，自动进样体积4，8，12，16，20uL，
以不同浓度及相应峰面积绘制标准曲线。
2 结果
2.1 标准曲线线性范围及方法的最低检出浓度
在本实验的条件下，对苯甲酸、山梨酸、糖精钠混合物标准溶液进行测定，在10～50ug/mL时有很好的线性关系，回归方程：苯甲酸：Y=60252.5X+（﹣895.866），r=0.99997；
山梨酸：Y=40556.6X+4839.48，r=0.99998；糖精钠：Y=102762X+（﹣6897.13），r=0.99997。称取5.0g样品处理后，定容至50mL，苯甲酸、山梨酸、糖精钠最低检出浓度均为1.0mg/kg。
2.2 精密度试验
取30ug/mL标样10.0mL分别用以上两种方法处理，测定6次，结果见表1。
2.3 准确度试验
2.3.1 回收率测定 取不含苯甲酸、山梨酸、糖精钠的肉，粉碎后分别加入0.1，0.5，2.0mg标准物，再分别用以上两种方法处理，测定其回收率，结果见表2。
2.3.2测定结果的比较 取不含苯甲酸、山梨酸、糖精钠的肉，粉碎后取5.0g分别加入1.0mg标准，分别用以上两种方法处理样品，测定6次，与理论标准值0.02mg/mL比较，结果见表3，以t0.05（5）=2.57表示。
3 討论
肉及肉制品样品的处理既要完全除去脂肪和蛋白质，又要不影响检测结果，关键在于找到一种较为理想的沉淀剂。我们分别采用金属盐及生物碱试剂沉淀样品中的脂肪和蛋白质，从实验的结果来看，标准曲线的线性关系良好，相关系数均为0.9999以上。最低检出浓度苯甲酸、山梨酸、糖精钠均为1.0mg/kg。在同样色谱条件下，用方法1金属盐沉淀蛋白质精密度结果，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的相对标准偏差分别为0.91%，1.14%，0.64%，方法回收率分别为98.1%～99.1%，98.5%～100.6%，98.9%～99.8%。用方法2生物碱沉淀蛋白质精密度结果，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的相对标准偏差分别为1.00%，1.48%，0.31%，方法回收率分别为88.2%～91.4%，88.7%～93.8%，89.1%～94.6%。2种方法的精密度均符合测定要求，与理论标准值0.020mg/mL的t检验比较（信度95%），方法1的苯甲酸、山梨酸、糖精钠结果tt0.05（5）=2.57，与理论值存在显著性差异，即采用方法2后，引起显著的系统误差。由以上验证结果可见，方法1满足检测要求，样品处理简单、快速及结果准确，适用于肉及肉制品样品前处理。
综上所述，在HPLC测定肉及肉制品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，使用金属盐沉淀蛋白质，即亚铁氰化钾和乙酸锌溶液较为理想。
参考文献：
[1] GB/T5009.28—2003 食品卫生检验方法（理化部分）
[2] 王竹天 杨大进 食品中化学污染物及有害因素监测技术手册 202—204
作者简介：
李冀斌，女，1968.12 贵州 职称：高级工程师 学历：本科 研究方向：理化检验 工作单位：黔南州疾病预防控制中心。
【关键词】苯甲酸；山梨酸；糖精钠；高效液相色谱
【中图分类号】R155 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）10—0105—01
肉及肉制品中的脂肪和蛋 质对苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定极为不 利，如果样品前处理不好，会污染色谱柱，严重时会造成色谱柱阻塞，使色谱柱彻底不能使用。这类样品处理的关键在于找到一种沉淀剂既能除出脂肪和蛋白质，又能得到准确的测量结果。GB/T5009.28-2003《食品中糖精钠的测定》第一法高效液相色谱法，仅规定了汽水、果汁类和配制酒类样品的前处理方法，而对肉及肉制品样品没有前处理方法。为测定肉及肉制品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量，我们分别采用金属盐和生物碱试剂来沉淀样品中的脂肪和蛋白质，测定结果满意，寻找出一种简单可行的前处理方法。
1 材料与方法
1.1仪器和试剂
日本岛津SPD-20A（紫外检测器，自动进样器）；色谱柱DIKMA C18（4.6mm×250mm 5um）；苯甲酸标准溶液（1.00mg/mL，GBW（E）100006，中国计量科学研究院）；山梨酸标准溶液（1.00mg/mL，GBW（E）100007， 中国计量科学研究院）；糖精钠标准溶液（1.00mg/mL，GBW（E）100008，中国计量科学研究院）；0.02mol/L乙酸
铵溶液（经0.45um滤膜过滤，成都金山化学试剂有限公司），甲醇（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司），乙酸锌溶液（称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸，加水溶解至100mL，重庆北碚化学试剂厂）亚铁氰化钾溶液（称10.6g加水至100mL，成都市化学试剂厂）；10%硫酸；10%钨酸钠溶液（广东省台山化工厂），超纯水（没注明的试剂均为AR）。
1.2色谱条件
流动相：甲醇︰0.02mol/L乙酸铵（3︰97）；流量：1.0mL/min；检测波长230nm；柱温35℃；进样量20uL。
1.3样品处理
1.3.1 称取5.0g左右粉碎均匀的样品，放入50mL离心管中，加30mL水，旋涡振荡摇匀，超声提取30min，于8000r/min离心5min，上清液转入另一50mL离心管中，加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2mL，振荡摇匀后，定容至50mL，再于8000r/min离心5min，取上清液经0.45um微孔滤膜过滤后上机检测。
1.3.2称取5.0g左右粉碎均匀的样品，放入50mL离心管中，加30mL水，旋涡振荡摇匀，超声提取30min，于8000r/min离心5min，上清液转入另一50mL离心管中，加入10%硫酸溶液，10%钨酸钠溶液各1mL，振荡摇匀后，定容至50mL，再于8000r/min离心5min，取上清液经0.45um微孔滤膜过滤后上机检测。
1.4 标准曲线的制备
配制苯甲酸、山梨酸、糖精钠混合物标准溶液50ug/mL，自动进样体积4，8，12，16，20uL，
以不同浓度及相应峰面积绘制标准曲线。
2 结果
2.1 标准曲线线性范围及方法的最低检出浓度
在本实验的条件下，对苯甲酸、山梨酸、糖精钠混合物标准溶液进行测定，在10～50ug/mL时有很好的线性关系，回归方程：苯甲酸：Y=60252.5X+（﹣895.866），r=0.99997；
山梨酸：Y=40556.6X+4839.48，r=0.99998；糖精钠：Y=102762X+（﹣6897.13），r=0.99997。称取5.0g样品处理后，定容至50mL，苯甲酸、山梨酸、糖精钠最低检出浓度均为1.0mg/kg。
2.2 精密度试验
取30ug/mL标样10.0mL分别用以上两种方法处理，测定6次，结果见表1。
2.3 准确度试验
2.3.1 回收率测定 取不含苯甲酸、山梨酸、糖精钠的肉，粉碎后分别加入0.1，0.5，2.0mg标准物，再分别用以上两种方法处理，测定其回收率，结果见表2。
2.3.2测定结果的比较 取不含苯甲酸、山梨酸、糖精钠的肉，粉碎后取5.0g分别加入1.0mg标准，分别用以上两种方法处理样品，测定6次，与理论标准值0.02mg/mL比较，结果见表3，以t0.05（5）=2.57表示。
3 討论
肉及肉制品样品的处理既要完全除去脂肪和蛋白质，又要不影响检测结果，关键在于找到一种较为理想的沉淀剂。我们分别采用金属盐及生物碱试剂沉淀样品中的脂肪和蛋白质，从实验的结果来看，标准曲线的线性关系良好，相关系数均为0.9999以上。最低检出浓度苯甲酸、山梨酸、糖精钠均为1.0mg/kg。在同样色谱条件下，用方法1金属盐沉淀蛋白质精密度结果，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的相对标准偏差分别为0.91%，1.14%，0.64%，方法回收率分别为98.1%～99.1%，98.5%～100.6%，98.9%～99.8%。用方法2生物碱沉淀蛋白质精密度结果，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的相对标准偏差分别为1.00%，1.48%，0.31%，方法回收率分别为88.2%～91.4%，88.7%～93.8%，89.1%～94.6%。2种方法的精密度均符合测定要求，与理论标准值0.020mg/mL的t检验比较（信度95%），方法1的苯甲酸、山梨酸、糖精钠结果t
综上所述，在HPLC测定肉及肉制品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，使用金属盐沉淀蛋白质，即亚铁氰化钾和乙酸锌溶液较为理想。
参考文献：
[1] GB/T5009.28—2003 食品卫生检验方法（理化部分）
[2] 王竹天 杨大进 食品中化学污染物及有害因素监测技术手册 202—204
作者简介：
李冀斌，女，1968.12 贵州 职称：高级工程师 学历：本科 研究方向：理化检验 工作单位：黔南州疾病预防控制中心。