pcDNA3.1/hIL-18真核表达载体的构建及表达

来源 :细胞与分子免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:thomas012
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目的 :构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/IL 18,并在哺乳动物细胞COS 7和Rlc310中进行瞬时和稳定性表达。方法 :从含hIL 18基因的中介载体 pGEM TEasy( pGEM T/hIL 18)中 ,以限制性内切酶酶切方法获得目的片段 ,克隆入真核表达质粒 pcDNA3.1( + )中。以脂质体法转染COS 7和Rlc310细胞 ,用RT PCR检测IL 18mRNA的水平 ,免疫组化染色法检测蛋白表达。结果 :构建了hIL 18基因的重组真核表达质粒pcDNA3.1/IL 18,并可在哺乳动物细胞中瞬时、稳定表达 ,获得了可稳定表达hIL 18基因的Rlc310细胞株。结论 :pcDNA3.1/IL 18的构建及表达 ,为IL 18抗肿瘤作用的研究奠定了基础 OBJECTIVE: To construct recombinant eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1 / IL18 and express it transiently and stably in mammalian cells COS7 and Rlc310. METHODS: The target fragment was obtained by restriction endonuclease digestion from pGEM TEasy (pGEM T / hIL 18) containing the hIL 18 gene and cloned into the eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1 (+). The liposome method was used to transfect COS 7 and Rlc310 cells. The level of IL 18 mRNA was detected by RT-PCR and the protein expression was detected by immunohistochemical staining. Results: Recombinant eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1 / IL18 of hIL 18 gene was constructed and transiently and stably expressed in mammalian cells. The Rlc310 cell line stably expressing hIL 18 gene was obtained. Conclusion: The construction and expression of pcDNA3.1 / IL 18 laid the foundation for the anti-tumor effect of IL-18
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