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【摘要】目的：研究骨伤方Ⅰ号对骨折的治疗作用，并对其治疗的机理作初步探讨。方法：消肿和镇痛实验中，按随机数字表法等分4组，空白组、自拟骨伤方Ⅰ号高、中、低剂量组,灌胃给药。采用二甲苯诱发小鼠耳廓肿胀法研究其抗炎作用;采用热板法致小鼠舔后足研究其镇痛作用。在成骨实验中：制作大兔骨折模型，术后次日灌胃给予骨伤方Ⅰ号，分别于给药后14，28d，测定骨折处骨矿物密度，同时测定血小板。结果：骨伤方Ⅰ号组显著降低二甲苯致小鼠耳肿胀的肿胀率,增加小鼠的痛阈值。给药14d、28d后，骨伤方Ⅰ号高、中剂量组的骨密度增加，与空白组比较有显著性差异（P<0.05）；给药14d、28d后可降低血小板聚集率。结论：自拟骨伤方Ⅰ号具有显著的消肿及镇痛作用，能加快骨矿沉积速率，提高骨密度，改善血液流变学。
【关键词】自拟骨伤方Ⅰ号；消肿；镇痛；骨折；骨密度
Experimental study of traumatology&orthopedicsI in the treatment of detumescence analgesia and promoting fracture healing efficacy
Chen Jinzhao Cai Dongling Liu Chunlan Chen Xiaofeng
Panyu TCM Hospital,Guangzhou,511400
【Abstract】Objective:To investigate the therapeutic effect of traumatology&orthopedicsI on fracture and explore its mechanism.Methods:detumescence and analgesia experiment:The experimental animals which respectively intragastrac administration were divided into normal group, high dose group, middle dose group and low dose group. The methods included hot-plate procedure and the ear swelling induced with xylene.Besides, The bone mineral density (BMD) and the parameters of hemorheology in the fractured radius were also observed in 14 and 28 days after treatment. Results:The traumatology&orthopedicsI can reduce engorgement and increase the pain threshold. The high and middle dose group can increase the BMD and reduce platelet aggregation, which had obvious variance compared with the control group（P<0.05）. Conclusion: The traumatology&orthopedicsI have the effect ofdetumescence and analgesia,can improve and accelerate fracture healing in the catagmatic rabbits by increasing BMD and improving blood rheology.
【Keyword】Traumatology&orthopedicsI; detumescence; analgesia; facture; Bone mineral density
骨折愈合是個复杂的过程,影响因素很多。自从1959年刘润田[1]首次报道中药促进骨折愈合的动物研究以来,人们通过从不同的角度进行了深入的研究,并得出较为可靠的结论,显示中医药促进骨折愈合的生命力。广州市番禺区中医院研制的骨伤方I号是骨折治疗后结合辩证分期的内服中药, 为进一步探讨其消肿、镇痛及促进骨折愈合的作用机理,本实验通过动物实验为该药的临床应用提供药理学依据,现将其结果总结报告如下：
1材料与仪器
1.1实验动物昆明小鼠,雌雄兼用,体质量18~22g, 大耳白家兔，雄性，体重2~2.5kg，均购自广东省医学实验动物中心,合格证号:粤监证字2008A015。
1.2药物与试剂供试品: 自拟骨伤方I号,由广州市番禺区中医院提供,由金银花、连翘、田七、甘草、防风、蝉蜕、赤芍、羚羊角、薏苡仁等组成,并配制成高、低剂量(0.12、0.03g/mL);试剂:二甲苯(天津市科密欧化学试剂有限公司生产,批号: 20070523); 3.5%水合氯醛(天津市科密欧化学试剂有限公司生产,批号:20070528)。
1.3主要仪器智能热板仪RB-200(成都泰盟科技有限公司);电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司); 骨密度测定仪，美国General Electronic Lunar公司。LG-R-80血液黏度测试仪、PAPER-1型血小板集聚及血凝测定仪，北京世帝科学仪器公司，直径8mm打孔器。
2方法与结果
2.1自拟骨伤方I号对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响[2]
2.1.1实验动物随机分组：取昆明小鼠40只，体质量18~22 g，雌雄兼用，随机分为空白组，正骨方高、低剂量组,每组10只。
2.1.2给药及试验：以上各组分别灌胃给予蒸馏水，0.12、0.06、0.03 g/ml自拟骨伤方I号，0.041 g/mL。给药3d,末次给药30min后用二甲苯0.1mL涂抹小鼠右耳的两侧致炎，左耳不涂做对照,涂药后20 min将小鼠处死，剪下两耳，用直径为8 mm的打孔器切下两耳圆形耳片,立即称量质量，计算耳肿胀抑制率。肿胀度=致炎后右耳重量-左耳重量；肿胀率=肿胀度/左耳重量×100%；肿胀抑制率(%)=(空白组肿胀率-治疗组肿胀率)/空白组肿胀率×100%[3]
2.1.3实验结果: 自拟骨伤方Ⅰ号各剂量组与空白组比较肿胀率均有下降,说明对二甲苯所致小鼠耳肿胀有一定的抑制作用，其中，高剂量骨伤方的肿胀抑制率最高，并与空白组相比较有显著差异(P<0.01)，具体结果见表1。
表1自拟骨伤方I号对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
( ±s,n=12)
组别 剂量/(g/kg) 肿胀度/mg 肿胀抑制率/%
空白组 - 3.82±2.21 -
骨伤方I号高剂量组 3.6 1.42±1.57** 30.12**
骨伤方I号中剂量组 1.8 1.79±1.43* 27.12*
骨伤方I号低剂量组 0.9 1.94±1.68 25.12
注：与空白组比较，*表示与空白组有显著性差异，P<0.05。**表示与空白组有极显著差异，P<0.01。
2.2热板法实验[4]
2.2.1镇痛实验筛选合格小鼠：接通电源热板测痛仪,温度调节至55℃。取雌性小鼠若干,将小鼠依次放入仪器内，小鼠从放在热板上至出现舔后足所需时间作为该鼠的痛阈值。凡舔后足时间少于5 s或多于30 s或跳跃者弃之不用，筛选合格小鼠共60只。
2.2.2实验动物随机分组:将随机筛选合格的雌性小鼠分为空白对照组,正骨方高、中、低剂量组,每组10只。
2.2.3给药及测试:以上各组分别依次给予蒸馏水，0.12、0.06、0.03 g/ml自拟骨伤方I号,灌胃给药,剂量20 mL/kg。给药3 d，末次给药后30 min开始测各小鼠痛阈值，如给药后痛阈值超过60 s,则停止测试按60 s。将各组给药后的痛阈值与空白组进行比较。痛阈提高百分率=（用药后痛反应时间-用药前痛反应时间用药前痛反应时间）×100%。
2.2.4实验结果: 自拟骨伤方I号各剂量组小鼠痛阈值与空白组比较均有所延长,其中自拟骨伤方I号高剂量的作用最强(P<0.01)，结果见表2。
表2自拟骨伤方I号对热板法小鼠痛阈值的影响( ±s,n=12)
组别 剂量/(g/kg) 给药后痛阈值/s
空白组 - 13.53±7.8
骨伤方I号高剂量组 3.6 25.62±4.5**
骨伤方I号中剂量组 1.8 21.78±5.8*
骨伤方I号低剂量组 0.9 18.92±8.5
注：与空白组比较，*表示与空白组有显著性差异，P<0.05。**表示与空白组有极显著差异，P<0.01。
2.3自拟骨伤方I号对家兔实验性骨折模型的成骨作用分析[5]
2.3.1骨折模型空白的建立及给药取家兔40只，适应性饲养1周后，随机分为4组，每组10只，分别为空白组（等体积蒸馏水），0.12、0.06、0.03 g/ml自拟骨伤方I号, 剂量20 mL/kg,各组家兔均用3.5%水合氯醛麻醉，两侧前肢剪毛，消毒，无菌条件下用牙科钻在两侧桡骨中段交界处横形钻成宽约为3mm，深入骨髓腔造成骨损伤，缝合皮肤，术后次日开始灌胃给药，连续28d。
2.3.2方法观测指标分别于给药后第14，28d取各组家兔10只，截取两侧桡骨，包括骨损伤部位及其上、下正常骨质，在X光下测定骨矿物密度，观察骨折处愈合情况。颈动脉采血，测血小板聚集率。
2.3.3 结果：自拟骨伤方I号各剂量组的骨密度增加与空白组比较均有所延长，其中自拟骨伤方I号高剂量的作用最强(P<0.05)，表明自拟骨伤方有加快骨矿沉积速率，提高骨密度，促进家兔骨损伤部位愈合的作用，结果见表3。
表3自拟骨伤方I号对家兔骨折模型骨密度的影响
（ ±s,g•cm-3,n=7）
组别 剂量/(g/kg) 骨密度（14d） 骨密度（28d）
空白组 - 0.177±0.038 0.267±0.042
骨伤方I号高剂量组 3.6 0.261±0.043* 0.364±0.061**
骨伤方I号中剂量组 1.8 0.225±0.058* 0.291±0.024
骨伤方I号低剂量组 0.9 0.205±0.027 0.275±0.056
注：与空白组比较，*表示与空白组有显著性差异，P<0.05。**表示与空白组有极显著差异，P<0.01。
自拟骨伤方I号对家兔骨折模型血液流变学的影响给药14d时，自拟骨伤方I号中、高剂量组能抑制血小板聚集，与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。给药28d后，与模型组比较，自拟骨伤方I号低、高剂量组也有显著性差异(P<0.05)。具体结果见表4。
表4自拟骨伤方I号对家兔骨折模型血小板聚集率的影响
（ ±s,%,n=7）
组别 剂量/(g/kg) 血小板聚集率（14d） 血小板聚集率（28d）
空白组 - 78.52±12.62 90.54±8.22
骨伤方I号高剂量组 3.6 50.63±17.55* 72.62±9.62*
骨伤方I号中剂量组 1.8 60.56±11.82* 80.52±12.21
骨傷方I号低剂量组 0.9 72.23±11.10 82.51±7.54
注：与空白组比较，*表示与空白组有显著性差异，P<0.05。
3讨论
祖国医学认为,骨折后血离筋脉,瘀积不散,使经络受阻,影响骨折愈合, 愈合的过程就是瘀去、新生、骨合的过程。治宜活血化瘀、续筋接骨、补骨健肌[6]。
我们自拟骨伤方中，金银花、连翘清热解毒，田七活血化瘀、消肿止痛，羚羊骨、赤芍清热凉血，薏苡仁渗湿利水，防风解表止痛，蝉蜕疏风热，熄风解痉。合方共奏清热解毒、活血化瘀、利水消肿之效。现代药理学证明，以清热解毒类药物为主的复方，具有一定程度的抗菌抗病毒功效，对内毒素具有解毒、灭活的作用，还能有效降低创伤后应激反应中的炎性介质。
现代医学表明影响骨折愈合最根本的因素是局部的血液供应。加快血液循环有利于离子交换与小梁骨改建和再吸收，把更多的钙动员出来。一切影响血液供应的因素，都会直接影响骨折愈合过程。
通过动物试验研究,我们发现自拟骨伤方I号具有显著的消肿及镇痛作用，能加快骨矿沉积速率，提高骨密度，骨伤方高剂量组较空白组比较有统计学意义，并具有显著性差异（P<0.05）。在对家兔骨折模型血小板聚集率的影响实验中，骨伤方高剂量组的血小板聚集率较空白组的大大降低，从而加快血液循环。总之，研究证明自拟骨伤方I号具有散瘀血,强筋骨,长骨痂的作用,大大地缩短了骨折愈合时间,值得在临床上进一步推广应用。
参考文献
[1] 刘润田.中药接骨丹对骨折愈合作用的研究[J].天津医药,1962;4(8):457.
[2] 钱之玉.药理学实验与指导[M].北京:中国医药科技出版社, 2003: 31.
[3] 徐淑云.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,1991:71.
[4] 刘映红,林斌,何贵锋.正骨方抗炎镇痛活血作用的实验研究[J].中药材,2010;33（8）：1315-1316.
[5] 李磷,陆茵,陈文星.骨生康胶囊对家兔实验性骨折模型的治疗作用[J].中药新药与临床药理,2007; 18(5): 373-374.
[6] 翟献斌,王宗辉.泰山接骨膏治疗骨折的临床研究[J].中医正骨,2007;19(4):11-12.
【关键词】自拟骨伤方Ⅰ号；消肿；镇痛；骨折；骨密度
Experimental study of traumatology&orthopedicsI in the treatment of detumescence analgesia and promoting fracture healing efficacy
Chen Jinzhao Cai Dongling Liu Chunlan Chen Xiaofeng
Panyu TCM Hospital,Guangzhou,511400
【Abstract】Objective:To investigate the therapeutic effect of traumatology&orthopedicsI on fracture and explore its mechanism.Methods:detumescence and analgesia experiment:The experimental animals which respectively intragastrac administration were divided into normal group, high dose group, middle dose group and low dose group. The methods included hot-plate procedure and the ear swelling induced with xylene.Besides, The bone mineral density (BMD) and the parameters of hemorheology in the fractured radius were also observed in 14 and 28 days after treatment. Results:The traumatology&orthopedicsI can reduce engorgement and increase the pain threshold. The high and middle dose group can increase the BMD and reduce platelet aggregation, which had obvious variance compared with the control group（P<0.05）. Conclusion: The traumatology&orthopedicsI have the effect ofdetumescence and analgesia,can improve and accelerate fracture healing in the catagmatic rabbits by increasing BMD and improving blood rheology.
【Keyword】Traumatology&orthopedicsI; detumescence; analgesia; facture; Bone mineral density
骨折愈合是個复杂的过程,影响因素很多。自从1959年刘润田[1]首次报道中药促进骨折愈合的动物研究以来,人们通过从不同的角度进行了深入的研究,并得出较为可靠的结论,显示中医药促进骨折愈合的生命力。广州市番禺区中医院研制的骨伤方I号是骨折治疗后结合辩证分期的内服中药, 为进一步探讨其消肿、镇痛及促进骨折愈合的作用机理,本实验通过动物实验为该药的临床应用提供药理学依据,现将其结果总结报告如下：
1材料与仪器
1.1实验动物昆明小鼠,雌雄兼用,体质量18~22g, 大耳白家兔，雄性，体重2~2.5kg，均购自广东省医学实验动物中心,合格证号:粤监证字2008A015。
1.2药物与试剂供试品: 自拟骨伤方I号,由广州市番禺区中医院提供,由金银花、连翘、田七、甘草、防风、蝉蜕、赤芍、羚羊角、薏苡仁等组成,并配制成高、低剂量(0.12、0.03g/mL);试剂:二甲苯(天津市科密欧化学试剂有限公司生产,批号: 20070523); 3.5%水合氯醛(天津市科密欧化学试剂有限公司生产,批号:20070528)。
1.3主要仪器智能热板仪RB-200(成都泰盟科技有限公司);电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司); 骨密度测定仪，美国General Electronic Lunar公司。LG-R-80血液黏度测试仪、PAPER-1型血小板集聚及血凝测定仪，北京世帝科学仪器公司，直径8mm打孔器。
2方法与结果
2.1自拟骨伤方I号对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响[2]
2.1.1实验动物随机分组：取昆明小鼠40只，体质量18~22 g，雌雄兼用，随机分为空白组，正骨方高、低剂量组,每组10只。
2.1.2给药及试验：以上各组分别灌胃给予蒸馏水，0.12、0.06、0.03 g/ml自拟骨伤方I号，0.041 g/mL。给药3d,末次给药30min后用二甲苯0.1mL涂抹小鼠右耳的两侧致炎，左耳不涂做对照,涂药后20 min将小鼠处死，剪下两耳，用直径为8 mm的打孔器切下两耳圆形耳片,立即称量质量，计算耳肿胀抑制率。肿胀度=致炎后右耳重量-左耳重量；肿胀率=肿胀度/左耳重量×100%；肿胀抑制率(%)=(空白组肿胀率-治疗组肿胀率)/空白组肿胀率×100%[3]
2.1.3实验结果: 自拟骨伤方Ⅰ号各剂量组与空白组比较肿胀率均有下降,说明对二甲苯所致小鼠耳肿胀有一定的抑制作用，其中，高剂量骨伤方的肿胀抑制率最高，并与空白组相比较有显著差异(P<0.01)，具体结果见表1。
表1自拟骨伤方I号对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
( ±s,n=12)
组别 剂量/(g/kg) 肿胀度/mg 肿胀抑制率/%
空白组 - 3.82±2.21 -
骨伤方I号高剂量组 3.6 1.42±1.57** 30.12**
骨伤方I号中剂量组 1.8 1.79±1.43* 27.12*
骨伤方I号低剂量组 0.9 1.94±1.68 25.12
注：与空白组比较，*表示与空白组有显著性差异，P<0.05。**表示与空白组有极显著差异，P<0.01。
2.2热板法实验[4]
2.2.1镇痛实验筛选合格小鼠：接通电源热板测痛仪,温度调节至55℃。取雌性小鼠若干,将小鼠依次放入仪器内，小鼠从放在热板上至出现舔后足所需时间作为该鼠的痛阈值。凡舔后足时间少于5 s或多于30 s或跳跃者弃之不用，筛选合格小鼠共60只。
2.2.2实验动物随机分组:将随机筛选合格的雌性小鼠分为空白对照组,正骨方高、中、低剂量组,每组10只。
2.2.3给药及测试:以上各组分别依次给予蒸馏水，0.12、0.06、0.03 g/ml自拟骨伤方I号,灌胃给药,剂量20 mL/kg。给药3 d，末次给药后30 min开始测各小鼠痛阈值，如给药后痛阈值超过60 s,则停止测试按60 s。将各组给药后的痛阈值与空白组进行比较。痛阈提高百分率=（用药后痛反应时间-用药前痛反应时间用药前痛反应时间）×100%。
2.2.4实验结果: 自拟骨伤方I号各剂量组小鼠痛阈值与空白组比较均有所延长,其中自拟骨伤方I号高剂量的作用最强(P<0.01)，结果见表2。
表2自拟骨伤方I号对热板法小鼠痛阈值的影响( ±s,n=12)
组别 剂量/(g/kg) 给药后痛阈值/s
空白组 - 13.53±7.8
骨伤方I号高剂量组 3.6 25.62±4.5**
骨伤方I号中剂量组 1.8 21.78±5.8*
骨伤方I号低剂量组 0.9 18.92±8.5
注：与空白组比较，*表示与空白组有显著性差异，P<0.05。**表示与空白组有极显著差异，P<0.01。
2.3自拟骨伤方I号对家兔实验性骨折模型的成骨作用分析[5]
2.3.1骨折模型空白的建立及给药取家兔40只，适应性饲养1周后，随机分为4组，每组10只，分别为空白组（等体积蒸馏水），0.12、0.06、0.03 g/ml自拟骨伤方I号, 剂量20 mL/kg,各组家兔均用3.5%水合氯醛麻醉，两侧前肢剪毛，消毒，无菌条件下用牙科钻在两侧桡骨中段交界处横形钻成宽约为3mm，深入骨髓腔造成骨损伤，缝合皮肤，术后次日开始灌胃给药，连续28d。
2.3.2方法观测指标分别于给药后第14，28d取各组家兔10只，截取两侧桡骨，包括骨损伤部位及其上、下正常骨质，在X光下测定骨矿物密度，观察骨折处愈合情况。颈动脉采血，测血小板聚集率。
2.3.3 结果：自拟骨伤方I号各剂量组的骨密度增加与空白组比较均有所延长，其中自拟骨伤方I号高剂量的作用最强(P<0.05)，表明自拟骨伤方有加快骨矿沉积速率，提高骨密度，促进家兔骨损伤部位愈合的作用，结果见表3。
表3自拟骨伤方I号对家兔骨折模型骨密度的影响
（ ±s,g•cm-3,n=7）
组别 剂量/(g/kg) 骨密度（14d） 骨密度（28d）
空白组 - 0.177±0.038 0.267±0.042
骨伤方I号高剂量组 3.6 0.261±0.043* 0.364±0.061**
骨伤方I号中剂量组 1.8 0.225±0.058* 0.291±0.024
骨伤方I号低剂量组 0.9 0.205±0.027 0.275±0.056
注：与空白组比较，*表示与空白组有显著性差异，P<0.05。**表示与空白组有极显著差异，P<0.01。
自拟骨伤方I号对家兔骨折模型血液流变学的影响给药14d时，自拟骨伤方I号中、高剂量组能抑制血小板聚集，与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。给药28d后，与模型组比较，自拟骨伤方I号低、高剂量组也有显著性差异(P<0.05)。具体结果见表4。
表4自拟骨伤方I号对家兔骨折模型血小板聚集率的影响
（ ±s,%,n=7）
组别 剂量/(g/kg) 血小板聚集率（14d） 血小板聚集率（28d）
空白组 - 78.52±12.62 90.54±8.22
骨伤方I号高剂量组 3.6 50.63±17.55* 72.62±9.62*
骨伤方I号中剂量组 1.8 60.56±11.82* 80.52±12.21
骨傷方I号低剂量组 0.9 72.23±11.10 82.51±7.54
注：与空白组比较，*表示与空白组有显著性差异，P<0.05。
3讨论
祖国医学认为,骨折后血离筋脉,瘀积不散,使经络受阻,影响骨折愈合, 愈合的过程就是瘀去、新生、骨合的过程。治宜活血化瘀、续筋接骨、补骨健肌[6]。
我们自拟骨伤方中，金银花、连翘清热解毒，田七活血化瘀、消肿止痛，羚羊骨、赤芍清热凉血，薏苡仁渗湿利水，防风解表止痛，蝉蜕疏风热，熄风解痉。合方共奏清热解毒、活血化瘀、利水消肿之效。现代药理学证明，以清热解毒类药物为主的复方，具有一定程度的抗菌抗病毒功效，对内毒素具有解毒、灭活的作用，还能有效降低创伤后应激反应中的炎性介质。
现代医学表明影响骨折愈合最根本的因素是局部的血液供应。加快血液循环有利于离子交换与小梁骨改建和再吸收，把更多的钙动员出来。一切影响血液供应的因素，都会直接影响骨折愈合过程。
通过动物试验研究,我们发现自拟骨伤方I号具有显著的消肿及镇痛作用，能加快骨矿沉积速率，提高骨密度，骨伤方高剂量组较空白组比较有统计学意义，并具有显著性差异（P<0.05）。在对家兔骨折模型血小板聚集率的影响实验中，骨伤方高剂量组的血小板聚集率较空白组的大大降低，从而加快血液循环。总之，研究证明自拟骨伤方I号具有散瘀血,强筋骨,长骨痂的作用,大大地缩短了骨折愈合时间,值得在临床上进一步推广应用。
参考文献
[1] 刘润田.中药接骨丹对骨折愈合作用的研究[J].天津医药,1962;4(8):457.
[2] 钱之玉.药理学实验与指导[M].北京:中国医药科技出版社, 2003: 31.
[3] 徐淑云.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,1991:71.
[4] 刘映红,林斌,何贵锋.正骨方抗炎镇痛活血作用的实验研究[J].中药材,2010;33（8）：1315-1316.
[5] 李磷,陆茵,陈文星.骨生康胶囊对家兔实验性骨折模型的治疗作用[J].中药新药与临床药理,2007; 18(5): 373-374.
[6] 翟献斌,王宗辉.泰山接骨膏治疗骨折的临床研究[J].中医正骨,2007;19(4):11-12.