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[摘 要]本文采用气相色谱法测定阿莫西林克拉维酸钾片中乙醇的残留量，详细介绍了试验过程和分析方法。结果表明采用气相色谱法进行测定，重现性好，准确度高，操作简单，应用前景广阔。
[关键词]阿莫西林克拉维酸钾片 气相色谱法 乙醇残留量 测定
中图分类号：R181.3 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）34-0394-01
一、阿莫西林克拉维酸钾片功能
阿莫西林克拉维酸钾片是阿莫西林和克拉维酸钾为成分的复方制剂，属于抗感染药物，对治疗由敏感菌引起的各种感染，如下呼吸道感染、下呼吸道感染、泌尿系统感染、皮肤和软组织感染等均有良好效果，具有使用剂量小、毒性低、副作用小等优势，其在生产过程中，药品外部的包衣使用的乙醇成分，乙醇属于三类有机溶剂，对其用量必须严格控制，保证用药安全。
二、气相色谱法相关介绍
1、气相色谱法简介
气相色谱法是色谱法的一种，是利用气体作为移动相的色谱法。其应用原理是将已知量的气体或液体注入到柱的进样口处，在载气的带动下分析物会迅速通过色谱柱，在这过程中，分子会被柱壁或填料所吸附，降低通过的速度，所以说，分析物通过的速度取决于柱壁或填料的吸附强度，被吸附的程度是由分析物本身的分子种类和固定相的类型所决定的，分子的类型不同，所被吸附的程度也不同，通常，我们根据分析物流出柱的顺序和时间来确定分析物质。
2、气相色谱法优点
①分离效率高，分析速度快，例如可将汽油样品在两小时内分离出200多个色谱峰，一般的样品分析可在20分种内完成。
②样品用量少和检测灵敏度高，例如气体样品用量为 1毫升，液体样品用量为0.1微升固体样品用量为几微克。用适当的检测器能检测出含量在百万分之十几至十亿分之几的杂质。
③选择性好，可分离、分析恒沸混合物，沸点相近的物质，某些同位素，顺式与反式异构体邻、间、对位异构体，旋光异构体等。
④应用范围广，虽然主要用于分析各种气体和易挥发的有机物质，但在一定的条件下，也可以分析高沸点物质和固体样品。应用的主要领域有石油工业、环境保护、临床化学、药物学、食品工业等。
3、缺点：
在对组分直接进行定性分析时，必须用已知物或已知数据与相应的色谱峰进行对比，或与其他方法（如质谱、光谱）联用，才能获得直接肯定的结果。在定量分析时，常需要用已知物纯样品对检测后输出的信号进行校正。
4、气相色谱法对仪器的要求
所用的仪器为气相色谱仪。除另有规定外，载气为氮气；色谱柱为填充柱或毛细管柱，填充柱的材质为不锈钢或玻璃，载体用直径0.25～0.18mm、0.18～0.15mm或0.15～0.125mm经酸洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球；常用玻璃或弹性石英毛细管柱的内径为0.20或0.32mm。进样口温度应高于柱温30～50℃；进样量一般不超过数微升；柱径越细进样量应越少。检测器为氢火焰离子化检测器，检测温度一般高于柱温，并不得低于100℃，以免水气凝结，通常为250～350℃。
正文中各品种项下规定的条件，除检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱柱材料不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并符合系统适用性试验的要求。一般色谱图约于30分钟内记录完毕。
三、试验过程
1、试验前准备
试验前，备齐以下仪器与药品：气相色谱仪（岛津，GC-17A，FID检测器）；精密电子天平；阿莫西林克拉维酸钾片（生产批号：120515）；；乙醇（生产批号：130106-201202）；实验室制备的高度纯净水。
2、试验方法
2.1 色譜条件
色谱柱：二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球为固定相的填充柱；载气为氮气；进样口温度：190℃；柱温：120℃；检测器温度：220℃；检测器：FID；进样量：1μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
取50mL量瓶，将准确量取的适量无水乙醇倒入，加水稀释成浓度为1.58μg/mL的乙醇对照品溶液，备用。
2.2.2 供试品溶液的制备
取10mL量瓶，将阿莫西林克拉维酸钾片磨成粉末状，称取2.5g，置入瓶中，加水稀释至刻度后过滤，将滤液保存备用。
2.3 精密度试验
2.3.1 重复性试验
取6份供试品溶液和乙醇对照品溶液各1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，取其峰面积，以外标法计算测定结果，并计算相对标准偏差（RSD）。RSD为3.35 %，表明该法重现性良好。
2.3.2 中间精密度试验
取同一批阿莫西林克拉维酸钾片，变动因素为不同分析人员、不同时间、不同设备，测定结果与第一次结果比较。该方法的中间精密度良好。
2.4 线性与范围试验
精密量取乙醇200μL，置入50mL 量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液，分别精密移取1，2.5，5，6，7.5mL置入10 mL量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，得各浓度对照品溶液，共5份，分别精密量取1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对对应浓度进行线性回归处理，线性方程为y=4×106x-209 452，相关系数R2=0.998。结果表明：乙醇在0.316-2.37g/mL浓度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 定量限与检测限试验
取乙醇对照品溶液（1.58μg/mL），加水稀释至一定浓度，分别进样，记录色谱图，使用信噪比软件计算，以信噪比为3：1时相应的浓度为检测限；信噪比为10：1时相应的浓度为定量限。乙醇的定量限为0.0079μg/mL，检出限为0.0024μg/mL。
2.6 加样回收试验
取9个10mL量瓶，取适量阿莫西林克拉维酸钾片，将其研磨成粉末状，分成9份，每份称取2.5g，分别置入准备好的量瓶中，再分别加入不同量的对照品溶液，加水稀释至刻度后，经过过滤，将滤液留用，作为供试品溶液，将经过过滤的供试品溶液各取1μL，注入气象色谱仪，进行测定，依法测定，结果平均回收率为92.63%，RSD为3.07%。
2.7 专属性试验
为了考察样品与杂质的分离情况，分别取空白对照、对照品溶液、供试品溶液、供试品和对照品（1：1）混合溶液各1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，比较测定结果。残留溶剂乙醇在9min左右出峰，与相邻峰的分离度均大于1.5，不干扰乙醇的测定，专属性良好。
2.8 稳定性试验
取10mL量瓶，将适量的阿莫西林克拉维酸钾片研磨成粉末状，精密称取2.5g，放入量瓶中，加入5mL的乙醇对照品溶液，加水稀释至刻度后，经过过滤，将滤液留用，常温放置0、4、6、8小时后，取出1μL溶液注入气象色谱仪内，依法测定其峰面积RSD为2.4%。测定结果表明，供试品溶液在8小时内稳定效果良好，本方法适用于此药品分析。
四、结果与讨论
有关阿莫西林克拉维酸钾片乙醇残留量的测定方法，目前文献报道较少。本文参考残留溶剂测定法的相关文献，采用二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球为固定相的填充柱，以水为溶剂和直接进样方式，该方法设备简单、操作方便。通过验证阿莫西林克拉维酸钾片乙醇残留分析方法，各项验证结果均符合可接受标准。此法能满足药品分析的要求，可作为生产过程中的质量监控，也可用于上市产品的质量检测。
参考文献：
[1] 李亚玲，刘艳，杨传怀.2种不同规格的阿莫西林克拉维酸钾片溶出度比较.中南药学，2012（10）.
[2] 国家药典委员会编.中国药典（二部）[S].中国医药科技出版社，2010，附录V.
[3] 国家药典委员会编.中国药典（二部）附录[S].中国医药科技出版社，2010.
[关键词]阿莫西林克拉维酸钾片 气相色谱法 乙醇残留量 测定
中图分类号：R181.3 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）34-0394-01
一、阿莫西林克拉维酸钾片功能
阿莫西林克拉维酸钾片是阿莫西林和克拉维酸钾为成分的复方制剂，属于抗感染药物，对治疗由敏感菌引起的各种感染，如下呼吸道感染、下呼吸道感染、泌尿系统感染、皮肤和软组织感染等均有良好效果，具有使用剂量小、毒性低、副作用小等优势，其在生产过程中，药品外部的包衣使用的乙醇成分，乙醇属于三类有机溶剂，对其用量必须严格控制，保证用药安全。
二、气相色谱法相关介绍
1、气相色谱法简介
气相色谱法是色谱法的一种，是利用气体作为移动相的色谱法。其应用原理是将已知量的气体或液体注入到柱的进样口处，在载气的带动下分析物会迅速通过色谱柱，在这过程中，分子会被柱壁或填料所吸附，降低通过的速度，所以说，分析物通过的速度取决于柱壁或填料的吸附强度，被吸附的程度是由分析物本身的分子种类和固定相的类型所决定的，分子的类型不同，所被吸附的程度也不同，通常，我们根据分析物流出柱的顺序和时间来确定分析物质。
2、气相色谱法优点
①分离效率高，分析速度快，例如可将汽油样品在两小时内分离出200多个色谱峰，一般的样品分析可在20分种内完成。
②样品用量少和检测灵敏度高，例如气体样品用量为 1毫升，液体样品用量为0.1微升固体样品用量为几微克。用适当的检测器能检测出含量在百万分之十几至十亿分之几的杂质。
③选择性好，可分离、分析恒沸混合物，沸点相近的物质，某些同位素，顺式与反式异构体邻、间、对位异构体，旋光异构体等。
④应用范围广，虽然主要用于分析各种气体和易挥发的有机物质，但在一定的条件下，也可以分析高沸点物质和固体样品。应用的主要领域有石油工业、环境保护、临床化学、药物学、食品工业等。
3、缺点：
在对组分直接进行定性分析时，必须用已知物或已知数据与相应的色谱峰进行对比，或与其他方法（如质谱、光谱）联用，才能获得直接肯定的结果。在定量分析时，常需要用已知物纯样品对检测后输出的信号进行校正。
4、气相色谱法对仪器的要求
所用的仪器为气相色谱仪。除另有规定外，载气为氮气；色谱柱为填充柱或毛细管柱，填充柱的材质为不锈钢或玻璃，载体用直径0.25～0.18mm、0.18～0.15mm或0.15～0.125mm经酸洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球；常用玻璃或弹性石英毛细管柱的内径为0.20或0.32mm。进样口温度应高于柱温30～50℃；进样量一般不超过数微升；柱径越细进样量应越少。检测器为氢火焰离子化检测器，检测温度一般高于柱温，并不得低于100℃，以免水气凝结，通常为250～350℃。
正文中各品种项下规定的条件，除检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱柱材料不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并符合系统适用性试验的要求。一般色谱图约于30分钟内记录完毕。
三、试验过程
1、试验前准备
试验前，备齐以下仪器与药品：气相色谱仪（岛津，GC-17A，FID检测器）；精密电子天平；阿莫西林克拉维酸钾片（生产批号：120515）；；乙醇（生产批号：130106-201202）；实验室制备的高度纯净水。
2、试验方法
2.1 色譜条件
色谱柱：二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球为固定相的填充柱；载气为氮气；进样口温度：190℃；柱温：120℃；检测器温度：220℃；检测器：FID；进样量：1μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
取50mL量瓶，将准确量取的适量无水乙醇倒入，加水稀释成浓度为1.58μg/mL的乙醇对照品溶液，备用。
2.2.2 供试品溶液的制备
取10mL量瓶，将阿莫西林克拉维酸钾片磨成粉末状，称取2.5g，置入瓶中，加水稀释至刻度后过滤，将滤液保存备用。
2.3 精密度试验
2.3.1 重复性试验
取6份供试品溶液和乙醇对照品溶液各1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，取其峰面积，以外标法计算测定结果，并计算相对标准偏差（RSD）。RSD为3.35 %，表明该法重现性良好。
2.3.2 中间精密度试验
取同一批阿莫西林克拉维酸钾片，变动因素为不同分析人员、不同时间、不同设备，测定结果与第一次结果比较。该方法的中间精密度良好。
2.4 线性与范围试验
精密量取乙醇200μL，置入50mL 量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液，分别精密移取1，2.5，5，6，7.5mL置入10 mL量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，得各浓度对照品溶液，共5份，分别精密量取1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对对应浓度进行线性回归处理，线性方程为y=4×106x-209 452，相关系数R2=0.998。结果表明：乙醇在0.316-2.37g/mL浓度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 定量限与检测限试验
取乙醇对照品溶液（1.58μg/mL），加水稀释至一定浓度，分别进样，记录色谱图，使用信噪比软件计算，以信噪比为3：1时相应的浓度为检测限；信噪比为10：1时相应的浓度为定量限。乙醇的定量限为0.0079μg/mL，检出限为0.0024μg/mL。
2.6 加样回收试验
取9个10mL量瓶，取适量阿莫西林克拉维酸钾片，将其研磨成粉末状，分成9份，每份称取2.5g，分别置入准备好的量瓶中，再分别加入不同量的对照品溶液，加水稀释至刻度后，经过过滤，将滤液留用，作为供试品溶液，将经过过滤的供试品溶液各取1μL，注入气象色谱仪，进行测定，依法测定，结果平均回收率为92.63%，RSD为3.07%。
2.7 专属性试验
为了考察样品与杂质的分离情况，分别取空白对照、对照品溶液、供试品溶液、供试品和对照品（1：1）混合溶液各1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，比较测定结果。残留溶剂乙醇在9min左右出峰，与相邻峰的分离度均大于1.5，不干扰乙醇的测定，专属性良好。
2.8 稳定性试验
取10mL量瓶，将适量的阿莫西林克拉维酸钾片研磨成粉末状，精密称取2.5g，放入量瓶中，加入5mL的乙醇对照品溶液，加水稀释至刻度后，经过过滤，将滤液留用，常温放置0、4、6、8小时后，取出1μL溶液注入气象色谱仪内，依法测定其峰面积RSD为2.4%。测定结果表明，供试品溶液在8小时内稳定效果良好，本方法适用于此药品分析。
四、结果与讨论
有关阿莫西林克拉维酸钾片乙醇残留量的测定方法，目前文献报道较少。本文参考残留溶剂测定法的相关文献，采用二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球为固定相的填充柱，以水为溶剂和直接进样方式，该方法设备简单、操作方便。通过验证阿莫西林克拉维酸钾片乙醇残留分析方法，各项验证结果均符合可接受标准。此法能满足药品分析的要求，可作为生产过程中的质量监控，也可用于上市产品的质量检测。
参考文献：
[1] 李亚玲，刘艳，杨传怀.2种不同规格的阿莫西林克拉维酸钾片溶出度比较.中南药学，2012（10）.
[2] 国家药典委员会编.中国药典（二部）[S].中国医药科技出版社，2010，附录V.
[3] 国家药典委员会编.中国药典（二部）附录[S].中国医药科技出版社，2010.