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摘要：目的 建立测定复方赤芍颗粒中芍药苷含量的高效液相色谱方法。方法 采用Waters Symmetry Shield-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-水（30∶70）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长230 nm，柱温为室温。结果 芍药苷在0.266～5.32 μg范围内线性关系良好，r=0.999 9，平均回收率为98.00%，RSD=2.22%。结论 该方法操作简便，快速易行，重复性好，结果准确可靠，可用于测定复方赤芍颗粒中芍药苷含量，以控制该制剂的质量。
关键词：复方赤芍颗粒；芍药苷；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）04-0078-03
复方赤芍颗粒是由赤芍、三七等10余味中药组成的复方制剂，具有活血化瘀、止痛祛瘀功效。该方来源于甘肃省老中医经验方，为方便临床应用，将其研制成颗粒剂使用。赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，性微寒、味苦，具有清热凉血、散瘀止痛之功效[1]，芍药苷是其中含量最高的活性成分[2]。目前赤芍中芍药苷的测定方法较多[3-6]，笔者建立高效液相色谱法（HPLC）测定该制剂中芍药苷含量的方法。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪（美国Waters公司1525型），717自动进样器，2487双通道紫外检测器，Empower数据处理系统。METTLER AE240型万分之一电子分析天平（德国Sartorius赛多利斯），十万分之一分析天平。HS6150型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
芍药苷对照品（批号110736-200629，中国食品药品检定研究院）；甲醇（山东禹王集团化工分公司，色谱纯）；甲醇（天津市博迪化工有限公司，分析纯），水为自制超纯水；复方赤芍颗粒及阴性样品为自制。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Waters Symmetry Shield-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（30∶70）；流速：1.0 mL/min；检测波长：230 nm；柱温：室温；进样量：20 μL。在该色谱条件下，样品中被测成分能够达到基线分离，相邻色谱峰的分离度大于1.5。理论塔板数均高于3000。色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重芍药苷5.32 mg，置5 mL量瓶中，用甲醇配制成每1 mL含芍药苷1.064 mg的储备液，备用。
2.3 样品溶液的制备
取本品颗粒精密称定2.0 g，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，称定质量，超声处理（300 W，25 kHz）30 min，放冷，称定，补足减失的质量，用0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。
2.4 阴性对照溶液的制备
取缺赤芍样品的阴性样品，精密称定2.0 g，按供试品溶液制备方法制备，备用。
2.5 线性关系考察
精密吸取已配制好的对照品溶液适量，加甲醇制成每1 mL含芍药苷13.3、26.6、66.5、133、266 mg的溶液，进样20 μL，每浓度进样3次，按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，芍药苷含量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为A=2000000X+30079，r=0.9999。表明芍药苷在0.266～5.32 μg范围内呈良好的线性关系。
2.6 稳定性考察
取同一批样品，按供试品溶液制备方法制备，分别在0、3、6、9、12、24 h，进样20 μL，记录峰面积， RSD=0.85%，表明芍药苷在24 h内稳定。
2.7 精密度试验
精密吸取一定浓度的芍药苷对照品溶液20 μL，连续进样6次，记录峰面积，芍药苷RSD=1.04%，表明精密度良好。
2.8 重复性试验
取同一批颗粒供试品6份，按“2.3”项下方法制备，精密吸取20 μL，进样，记录峰面积。芍药苷RSD=1.89%，表明重复性良好。
2.9 加样回收率试验
精密称取已知含量的复方赤芍颗粒5份，每份约1.0 g（含芍药苷1.003 1 mg/g），分别加入1.064 mg/mL对照品储备液适量，按所建立的方法进行处理和测定，计算芍药苷的回收率。结果见表1。
2.10 样品含量测定
称取自制3批样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，注入色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件测定，每个样品重复测定3次，记录峰面积，计算样品含量，结果见表2。
3 讨论
本试验所测定的芍药苷极性较大，在水及含水甲醇、甲醇中均可溶解，文献报道以50%甲醇作为提取溶剂时提取率较高[6]。但考虑到复方赤芍颗粒的辅料为糊精与糖粉，选用甲醇、50%含水甲醇为提取溶剂考察二者提取率，在含水甲醇作为提取溶剂时溶解了一定量的辅料，造成了基线噪音较大，不利于芍药苷的测定，因此本试验选择甲醇作为提取溶剂。对不同超声时间进行比较，超声时间为30 min时提取效果较好。最终选择以甲醇为溶剂、超声30 min作为提取条件。
在色谱条件考察中，对芍药苷进行全波长扫描， 230 nm为其最大吸收波长，故选择该波长进行测定。流动相考察时，选择甲醇-水、甲醇-盐系统进行比较，在甲醇-水条件下芍药苷的峰尖锐，分离度好，相对于2010年版《中华人民共和国药典》所用的甲醇-盐系统洗脱法[2]，对色谱柱的损害较小，且方法简便。最终选择甲醇-水系统作为流动相，在230 nm处进行测定。
本试验采取甲醇-水系统作为流动相，对复方赤芍颗粒中芍药苷的含量进行了测定。该法简便、准确，精密度、重复性好，可用于该制剂的质量控制，为制剂的进一步开发提供了方法学基础。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：147-148.
[2] 阮金兰，赵钟祥.赤芍化学成分和药理作用的研究进展[J].中国药理学通报，2003，19（9）：965-970.
[3] 侯林中，裴玉书，张熙洁，等.HPLC法测定宽心口服液中芍药苷的含量[J].中国药房，2011，22（31）：2933-2934.
[4] 李捷玮，金柔男，李翔，等.多种中成药中芍药苷的含量测定[J].药物分析杂志，2009，29（9）：1440-1443.
[5] 王晓飞，文明，于玲.高效液相色谱法测定开元颗粒中芍药苷的含量[J].中国药师，2008，11（4）：431.
[6] 张士勇.芪丹芍龙合剂中芍药苷含量测定方法的研究[J].中医药临床杂志，2012，24（1）：71-72.
（收稿日期：2013-09-16，编辑：陈静）
关键词：复方赤芍颗粒；芍药苷；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）04-0078-03
复方赤芍颗粒是由赤芍、三七等10余味中药组成的复方制剂，具有活血化瘀、止痛祛瘀功效。该方来源于甘肃省老中医经验方，为方便临床应用，将其研制成颗粒剂使用。赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，性微寒、味苦，具有清热凉血、散瘀止痛之功效[1]，芍药苷是其中含量最高的活性成分[2]。目前赤芍中芍药苷的测定方法较多[3-6]，笔者建立高效液相色谱法（HPLC）测定该制剂中芍药苷含量的方法。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪（美国Waters公司1525型），717自动进样器，2487双通道紫外检测器，Empower数据处理系统。METTLER AE240型万分之一电子分析天平（德国Sartorius赛多利斯），十万分之一分析天平。HS6150型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
芍药苷对照品（批号110736-200629，中国食品药品检定研究院）；甲醇（山东禹王集团化工分公司，色谱纯）；甲醇（天津市博迪化工有限公司，分析纯），水为自制超纯水；复方赤芍颗粒及阴性样品为自制。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Waters Symmetry Shield-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（30∶70）；流速：1.0 mL/min；检测波长：230 nm；柱温：室温；进样量：20 μL。在该色谱条件下，样品中被测成分能够达到基线分离，相邻色谱峰的分离度大于1.5。理论塔板数均高于3000。色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重芍药苷5.32 mg，置5 mL量瓶中，用甲醇配制成每1 mL含芍药苷1.064 mg的储备液，备用。
2.3 样品溶液的制备
取本品颗粒精密称定2.0 g，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，称定质量，超声处理（300 W，25 kHz）30 min，放冷，称定，补足减失的质量，用0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。
2.4 阴性对照溶液的制备
取缺赤芍样品的阴性样品，精密称定2.0 g，按供试品溶液制备方法制备，备用。
2.5 线性关系考察
精密吸取已配制好的对照品溶液适量，加甲醇制成每1 mL含芍药苷13.3、26.6、66.5、133、266 mg的溶液，进样20 μL，每浓度进样3次，按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，芍药苷含量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为A=2000000X+30079，r=0.9999。表明芍药苷在0.266～5.32 μg范围内呈良好的线性关系。
2.6 稳定性考察
取同一批样品，按供试品溶液制备方法制备，分别在0、3、6、9、12、24 h，进样20 μL，记录峰面积， RSD=0.85%，表明芍药苷在24 h内稳定。
2.7 精密度试验
精密吸取一定浓度的芍药苷对照品溶液20 μL，连续进样6次，记录峰面积，芍药苷RSD=1.04%，表明精密度良好。
2.8 重复性试验
取同一批颗粒供试品6份，按“2.3”项下方法制备，精密吸取20 μL，进样，记录峰面积。芍药苷RSD=1.89%，表明重复性良好。
2.9 加样回收率试验
精密称取已知含量的复方赤芍颗粒5份，每份约1.0 g（含芍药苷1.003 1 mg/g），分别加入1.064 mg/mL对照品储备液适量，按所建立的方法进行处理和测定，计算芍药苷的回收率。结果见表1。
2.10 样品含量测定
称取自制3批样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，注入色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件测定，每个样品重复测定3次，记录峰面积，计算样品含量，结果见表2。
3 讨论
本试验所测定的芍药苷极性较大，在水及含水甲醇、甲醇中均可溶解，文献报道以50%甲醇作为提取溶剂时提取率较高[6]。但考虑到复方赤芍颗粒的辅料为糊精与糖粉，选用甲醇、50%含水甲醇为提取溶剂考察二者提取率，在含水甲醇作为提取溶剂时溶解了一定量的辅料，造成了基线噪音较大，不利于芍药苷的测定，因此本试验选择甲醇作为提取溶剂。对不同超声时间进行比较，超声时间为30 min时提取效果较好。最终选择以甲醇为溶剂、超声30 min作为提取条件。
在色谱条件考察中，对芍药苷进行全波长扫描， 230 nm为其最大吸收波长，故选择该波长进行测定。流动相考察时，选择甲醇-水、甲醇-盐系统进行比较，在甲醇-水条件下芍药苷的峰尖锐，分离度好，相对于2010年版《中华人民共和国药典》所用的甲醇-盐系统洗脱法[2]，对色谱柱的损害较小，且方法简便。最终选择甲醇-水系统作为流动相，在230 nm处进行测定。
本试验采取甲醇-水系统作为流动相，对复方赤芍颗粒中芍药苷的含量进行了测定。该法简便、准确，精密度、重复性好，可用于该制剂的质量控制，为制剂的进一步开发提供了方法学基础。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：147-148.
[2] 阮金兰，赵钟祥.赤芍化学成分和药理作用的研究进展[J].中国药理学通报，2003，19（9）：965-970.
[3] 侯林中，裴玉书，张熙洁，等.HPLC法测定宽心口服液中芍药苷的含量[J].中国药房，2011，22（31）：2933-2934.
[4] 李捷玮，金柔男，李翔，等.多种中成药中芍药苷的含量测定[J].药物分析杂志，2009，29（9）：1440-1443.
[5] 王晓飞，文明，于玲.高效液相色谱法测定开元颗粒中芍药苷的含量[J].中国药师，2008，11（4）：431.
[6] 张士勇.芪丹芍龙合剂中芍药苷含量测定方法的研究[J].中医药临床杂志，2012，24（1）：71-72.
（收稿日期：2013-09-16，编辑：陈静）