HPLC测定复方赤芍颗粒中芍药苷含量

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  摘要:目的 建立测定复方赤芍颗粒中芍药苷含量的高效液相色谱方法。方法 采用Waters Symmetry Shield-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-水(30∶70)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长230 nm,柱温为室温。结果 芍药苷在0.266~5.32 μg范围内线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为98.00%,RSD=2.22%。结论 该方法操作简便,快速易行,重复性好,结果准确可靠,可用于测定复方赤芍颗粒中芍药苷含量,以控制该制剂的质量。
  关键词:复方赤芍颗粒;芍药苷;高效液相色谱法
  中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2014)04-0078-03
  复方赤芍颗粒是由赤芍、三七等10余味中药组成的复方制剂,具有活血化瘀、止痛祛瘀功效。该方来源于甘肃省老中医经验方,为方便临床应用,将其研制成颗粒剂使用。赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根,性微寒、味苦,具有清热凉血、散瘀止痛之功效[1],芍药苷是其中含量最高的活性成分[2]。目前赤芍中芍药苷的测定方法较多[3-6],笔者建立高效液相色谱法(HPLC)测定该制剂中芍药苷含量的方法。
  1 仪器与试药
  高效液相色谱仪(美国Waters公司1525型),717自动进样器,2487双通道紫外检测器,Empower数据处理系统。METTLER AE240型万分之一电子分析天平(德国Sartorius赛多利斯),十万分之一分析天平。HS6150型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
  芍药苷对照品(批号110736-200629,中国食品药品检定研究院);甲醇(山东禹王集团化工分公司,色谱纯);甲醇(天津市博迪化工有限公司,分析纯),水为自制超纯水;复方赤芍颗粒及阴性样品为自制。
  2 方法与结果
  2.1 色谱条件
  色谱柱:Waters Symmetry Shield-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(30∶70);流速:1.0 mL/min;检测波长:230 nm;柱温:室温;进样量:20 μL。在该色谱条件下,样品中被测成分能够达到基线分离,相邻色谱峰的分离度大于1.5。理论塔板数均高于3000。色谱图见图1。
  2.2 对照品溶液的制备
  精密称取干燥至恒重芍药苷5.32 mg,置5 mL量瓶中,用甲醇配制成每1 mL含芍药苷1.064 mg的储备液,备用。
  2.3 样品溶液的制备
  取本品颗粒精密称定2.0 g,置25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,称定质量,超声处理(300 W,25 kHz)30 min,放冷,称定,补足减失的质量,用0.45 μm微孔滤膜过滤,备用。
  2.4 阴性对照溶液的制备
  取缺赤芍样品的阴性样品,精密称定2.0 g,按供试品溶液制备方法制备,备用。
  2.5 线性关系考察
  精密吸取已配制好的对照品溶液适量,加甲醇制成每1 mL含芍药苷13.3、26.6、66.5、133、266 mg的溶液,进样20 μL,每浓度进样3次,按“2.1”项下色谱条件测定,以峰面积为纵坐标,芍药苷含量为横坐标,绘制标准曲线,回归方程为A=2000000X+30079,r=0.9999。表明芍药苷在0.266~5.32 μg范围内呈良好的线性关系。
  2.6 稳定性考察
  取同一批样品,按供试品溶液制备方法制备,分别在0、3、6、9、12、24 h,进样20 μL,记录峰面积, RSD=0.85%,表明芍药苷在24 h内稳定。
  2.7 精密度试验
  精密吸取一定浓度的芍药苷对照品溶液20 μL,连续进样6次,记录峰面积,芍药苷RSD=1.04%,表明精密度良好。
  2.8 重复性试验
  取同一批颗粒供试品6份,按“2.3”项下方法制备,精密吸取20 μL,进样,记录峰面积。芍药苷RSD=1.89%,表明重复性良好。
  2.9 加样回收率试验
  精密称取已知含量的复方赤芍颗粒5份,每份约1.0 g(含芍药苷1.003 1 mg/g),分别加入1.064 mg/mL对照品储备液适量,按所建立的方法进行处理和测定,计算芍药苷的回收率。结果见表1。
  2.10 样品含量测定
  称取自制3批样品,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,注入色谱仪中,按“2.1”项下色谱条件测定,每个样品重复测定3次,记录峰面积,计算样品含量,结果见表2。
  3 讨论
  本试验所测定的芍药苷极性较大,在水及含水甲醇、甲醇中均可溶解,文献报道以50%甲醇作为提取溶剂时提取率较高[6]。但考虑到复方赤芍颗粒的辅料为糊精与糖粉,选用甲醇、50%含水甲醇为提取溶剂考察二者提取率,在含水甲醇作为提取溶剂时溶解了一定量的辅料,造成了基线噪音较大,不利于芍药苷的测定,因此本试验选择甲醇作为提取溶剂。对不同超声时间进行比较,超声时间为30 min时提取效果较好。最终选择以甲醇为溶剂、超声30 min作为提取条件。
  在色谱条件考察中,对芍药苷进行全波长扫描, 230 nm为其最大吸收波长,故选择该波长进行测定。流动相考察时,选择甲醇-水、甲醇-盐系统进行比较,在甲醇-水条件下芍药苷的峰尖锐,分离度好,相对于2010年版《中华人民共和国药典》所用的甲醇-盐系统洗脱法[2],对色谱柱的损害较小,且方法简便。最终选择甲醇-水系统作为流动相,在230 nm处进行测定。
  本试验采取甲醇-水系统作为流动相,对复方赤芍颗粒中芍药苷的含量进行了测定。该法简便、准确,精密度、重复性好,可用于该制剂的质量控制,为制剂的进一步开发提供了方法学基础。
  参考文献:
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  [3] 侯林中,裴玉书,张熙洁,等.HPLC法测定宽心口服液中芍药苷的含量[J].中国药房,2011,22(31):2933-2934.
  [4] 李捷玮,金柔男,李翔,等.多种中成药中芍药苷的含量测定[J].药物分析杂志,2009,29(9):1440-1443.
  [5] 王晓飞,文明,于玲.高效液相色谱法测定开元颗粒中芍药苷的含量[J].中国药师,2008,11(4):431.
  [6] 张士勇.芪丹芍龙合剂中芍药苷含量测定方法的研究[J].中医药临床杂志,2012,24(1):71-72.
  (收稿日期:2013-09-16,编辑:陈静)
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