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摘要：目的 观察菲宁胶囊对人肺癌A549裸小鼠移植瘤生长的影响。方法 取处于生长旺盛期的人肺癌A549瘤组织，剪切成约1.5 mm3大小的组织块，无菌条件下接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。分4组：① 阴性对照组；② 阳性对照组；③ 联合给药组；④ 中药组。结果 1.阴性对照组的肿瘤处于持续生长状态；2.阳性对照组的肿瘤相对增殖率为50.04%，动物体重在实验过程中出现明显的减轻，取材时脾脏明显与阴性对照组有很大差异；3.联合给药组肿瘤相对增殖率为50.09%，但是脾脏指数明显高于阳性对照组的脾脏指数；4.中药组的肿瘤相对增殖率为70.6%。结论 中药菲宁胶囊可考虑成为一种与肿瘤化疗药环磷酰胺联用长期给药从而达到增高抑瘤效果和提高生存质量的药物。
关键词：菲宁胶囊；肺癌A549裸小鼠；实验研究
中图分类号：R285 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2014）12-0066-02
1 材料与方法
1.1 受试物与配制
1.1.1 环磷酰胺粉针剂（CTX） 200mg/支，山西普德药业股份有限公司 。生产批号：04130202。 给药前用生理盐水稀释至所需浓度。
1.1.2 菲宁胶囊药液： “菲宁胶囊”中药复方：人参15 g，沙参20 g，白术20 g，茯苓15 g，生苡仁30 g，虎杖15 g，石见穿15 g等16味。药材由云南省中医院中药房提供。给药前用生理盐水配制成所需浓度。
1.2 动物 BALB/c-nu裸小鼠，SPF级，4～5w龄，雌性。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2012-0001。
1.3 瘤种 A549，引自中科院上海药物研究所。
1.4 实验方案
1.4.1 分组
1.4.1.1 阴性对照组 与受试组同步给予N.S.；
1.4.1.2 阳性对照组 环磷酰胺（CTX），119.57 mg/kg（据成人每日用药量：600 mg/m2）；
1.4.1.3 联合给药组 环磷酰胺+中药菲宁胶囊药液；
1.4.1.4 中药组 中药菲宁胶囊药液，每味药1袋/80 mL（据成人每日用药量：每味药2 袋/200 mL）。
1.4.2 给药体积及给药途径 每周连续给药5天后停药2天，共3周。生理盐水和中药菲宁胶囊药液按0.2 mL/10 g的给药体积灌胃给药（ig）；环磷酰胺按0.1 mL/10 g的给药体积腹腔注射给药（ip）。
1.4.3 实验方法[1] 取处于生长旺盛期的人肺癌A549瘤组织，剪切成约1.5 mm3大小的组织块，无菌条件下接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。在接种后8天，去除移植瘤未生长或生长过缓、过速的裸小鼠，选择已形成100～300 mm3大小体积瘤组织的裸小鼠，按上述实验方案随机分组及给药。实验期间每周测量瘤径和体重3次，3周后取材、测量瘤径和称量体重。每次测量后按以下公式计算肿瘤体积（TV）、相对肿瘤体积（RTV）和相对肿瘤增殖率（T/C %）：① TV（tumor volume）= 1/2×a×b2，其中a、b分别表示肿瘤的长和宽；② RTV（relative tumor volume）= Vt/V0，其中V0为分组给药时（即d0）所测得的肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积；③ T/C（%）= TRTV/ CRTV×100%，其中TRTV为治疗组的RTV，CRTV为阴性对照组的RTV。
1.4.4 统计学方法 采用SPSS11.0软件包数据以（x±s）表示、组内均数用配对t检验，多组间均数比较采用单因素方差分析；组间均数两两比较采用q检验。
国内评价参考标准：T/C（%）>60%为无效，T/C（%）60%，并经统计学分析P<0.05可判为有效。
2 结果
中药菲宁胶囊对人肺癌A549裸小鼠移植瘤生长的影响见表1。由表1可知：实验过程中阴性对照组的肿瘤处于持续生长状态。阳性对照组，环磷酰胺在119.57mg/kg给药剂量下，肿瘤相对增殖率（T/C %）为50.04%，有一定的抑瘤作用；与实验开始时相比，动物体重在实验过程中出现明显的减轻，取材时脾脏明显与阴性对照组有很大差异（P<0.01）。联合给药组（腹腔注射环磷酰胺+口服菲宁胶囊中药液），肿瘤相对增殖率（T/C %）为50.09%，与阳性对照基本无差异；给药过程中，联合组体重减轻程度与阳性组基本一致，但是脾脏指数明显高于阳性对照组的脾脏指数（P<0.01）。中药组，肿瘤相对增殖率（T/C %）为70.6%，未达到参考标准的抑瘤效果；但是其脾脏指数与阴性对照差异最小（P<0.01）。
由以上表可知：实验过程中阴性对照组的肿瘤处于持续生长状态。阳性对照组，环磷酰胺在119.57mg/kg给药剂量下，肿瘤相对增殖率（T/C%）为50.04%，有一定的抑瘤作用；与实验开始时相比，动物体重在实验过程中出现明显的减轻，取材时脾脏明显与阴性对照组有很大差异（P<0.01）。联合给药组（腹腔注射环磷酰胺+口服菲宁胶囊中药液），肿瘤相对增殖率（T/C%）为50.09%，与阳性对照基本无差异；给药过程中，联合组体重减轻程度与阳性组基本一致，但是脾脏指数明显高于阳性对照组的脾脏指数（P<0.01）。中药组，肿瘤相对增殖率（T/C%）为70.6%，未达到参考标准的抑瘤效果；但是其脾脏指数与阴性对照差异最小（P<0.01）。
3 急性毒性实验研究
菲宁胶囊方中药水煎浓缩液一次灌胃测不出LD50，故测其灌胃给药的最大给药量为387.2 g生药/kg，相当于临床成人（体重按60kg计）拟用量的108倍，观察14天，未见动物行为表现、饮食、活动等有明显异常，未见死亡。结果显示本品短期服用比较安全。
课题组对中药的水煎浓缩液（3.14 g生药/g浸膏）进行了小鼠急性毒性试验，小鼠未见死亡，但未测出LD50值，故试验用3.14 g生药/g水煎浓缩液.配制为4.30 g生药/mL试品，结果表明小鼠的最大给药量量为387.2 g生药/kg，相当于临床成人（体重按60 kg计）拟用量的108倍。表明本品在387.2g生药/kg浓度以下时，对小鼠的急性毒性作用较低。
4 讨论
菲宁胶囊是云南省名中医李斯文教授治疗肺癌三十余年丰富的临床经验积累的结晶，在临床应用中取得了良好的疗效。该方主要由以益气、养阴、健脾等扶正中药为主，佐以清热解毒、软坚散结中药为辅而成。设立人参、沙参、白术、茯苓等16味中药为治疗肺癌的基本方。方中人参、白术、茯苓、生苡仁、砂仁具有益气健脾之功效，南北沙参具有滋阴生津之作用，浙贝、虎杖、石见穿则有清热解毒，抗癌抑瘤作用；该方将攻补融为一体，使补而不助邪，攻而不伤正。全方共奏益气健脾、消肿散结之功；主治中晚期肺癌（气阴两虚型）。
中医药治疗肺癌的研究大多是临床疗效观察，其获效依据及其作用机理，以及如何增强用药目的性与安全性等内容尚不能阐明。而实验研究大多以单味药研究为主，复方的很少。本课题探讨菲宁胶囊对人肺癌A549荷瘤裸小鼠移植瘤生长的影响，验证其在临床应用中的有效性，为进一步开发利用提供可靠的数据。
本实验证实中药菲宁胶囊服用比较安全，菲宁胶囊有抑制肿瘤生长的作用，可考虑成为一种与肿瘤化療药环磷酰胺联用长期给药从而达到增高抑瘤效果和提高生存质量的药物，进一步证实中医药联合西药有减毒增效的作用。
参考文献：
[1]孙均田.现代药理实验方法[M].北京：北京医科大学.中国协和医科大学联合出版社，2008.
关键词：菲宁胶囊；肺癌A549裸小鼠；实验研究
中图分类号：R285 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2014）12-0066-02
1 材料与方法
1.1 受试物与配制
1.1.1 环磷酰胺粉针剂（CTX） 200mg/支，山西普德药业股份有限公司 。生产批号：04130202。 给药前用生理盐水稀释至所需浓度。
1.1.2 菲宁胶囊药液： “菲宁胶囊”中药复方：人参15 g，沙参20 g，白术20 g，茯苓15 g，生苡仁30 g，虎杖15 g，石见穿15 g等16味。药材由云南省中医院中药房提供。给药前用生理盐水配制成所需浓度。
1.2 动物 BALB/c-nu裸小鼠，SPF级，4～5w龄，雌性。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2012-0001。
1.3 瘤种 A549，引自中科院上海药物研究所。
1.4 实验方案
1.4.1 分组
1.4.1.1 阴性对照组 与受试组同步给予N.S.；
1.4.1.2 阳性对照组 环磷酰胺（CTX），119.57 mg/kg（据成人每日用药量：600 mg/m2）；
1.4.1.3 联合给药组 环磷酰胺+中药菲宁胶囊药液；
1.4.1.4 中药组 中药菲宁胶囊药液，每味药1袋/80 mL（据成人每日用药量：每味药2 袋/200 mL）。
1.4.2 给药体积及给药途径 每周连续给药5天后停药2天，共3周。生理盐水和中药菲宁胶囊药液按0.2 mL/10 g的给药体积灌胃给药（ig）；环磷酰胺按0.1 mL/10 g的给药体积腹腔注射给药（ip）。
1.4.3 实验方法[1] 取处于生长旺盛期的人肺癌A549瘤组织，剪切成约1.5 mm3大小的组织块，无菌条件下接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。在接种后8天，去除移植瘤未生长或生长过缓、过速的裸小鼠，选择已形成100～300 mm3大小体积瘤组织的裸小鼠，按上述实验方案随机分组及给药。实验期间每周测量瘤径和体重3次，3周后取材、测量瘤径和称量体重。每次测量后按以下公式计算肿瘤体积（TV）、相对肿瘤体积（RTV）和相对肿瘤增殖率（T/C %）：① TV（tumor volume）= 1/2×a×b2，其中a、b分别表示肿瘤的长和宽；② RTV（relative tumor volume）= Vt/V0，其中V0为分组给药时（即d0）所测得的肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积；③ T/C（%）= TRTV/ CRTV×100%，其中TRTV为治疗组的RTV，CRTV为阴性对照组的RTV。
1.4.4 统计学方法 采用SPSS11.0软件包数据以（x±s）表示、组内均数用配对t检验，多组间均数比较采用单因素方差分析；组间均数两两比较采用q检验。
国内评价参考标准：T/C（%）>60%为无效，T/C（%）60%，并经统计学分析P<0.05可判为有效。
2 结果
中药菲宁胶囊对人肺癌A549裸小鼠移植瘤生长的影响见表1。由表1可知：实验过程中阴性对照组的肿瘤处于持续生长状态。阳性对照组，环磷酰胺在119.57mg/kg给药剂量下，肿瘤相对增殖率（T/C %）为50.04%，有一定的抑瘤作用；与实验开始时相比，动物体重在实验过程中出现明显的减轻，取材时脾脏明显与阴性对照组有很大差异（P<0.01）。联合给药组（腹腔注射环磷酰胺+口服菲宁胶囊中药液），肿瘤相对增殖率（T/C %）为50.09%，与阳性对照基本无差异；给药过程中，联合组体重减轻程度与阳性组基本一致，但是脾脏指数明显高于阳性对照组的脾脏指数（P<0.01）。中药组，肿瘤相对增殖率（T/C %）为70.6%，未达到参考标准的抑瘤效果；但是其脾脏指数与阴性对照差异最小（P<0.01）。
由以上表可知：实验过程中阴性对照组的肿瘤处于持续生长状态。阳性对照组，环磷酰胺在119.57mg/kg给药剂量下，肿瘤相对增殖率（T/C%）为50.04%，有一定的抑瘤作用；与实验开始时相比，动物体重在实验过程中出现明显的减轻，取材时脾脏明显与阴性对照组有很大差异（P<0.01）。联合给药组（腹腔注射环磷酰胺+口服菲宁胶囊中药液），肿瘤相对增殖率（T/C%）为50.09%，与阳性对照基本无差异；给药过程中，联合组体重减轻程度与阳性组基本一致，但是脾脏指数明显高于阳性对照组的脾脏指数（P<0.01）。中药组，肿瘤相对增殖率（T/C%）为70.6%，未达到参考标准的抑瘤效果；但是其脾脏指数与阴性对照差异最小（P<0.01）。
3 急性毒性实验研究
菲宁胶囊方中药水煎浓缩液一次灌胃测不出LD50，故测其灌胃给药的最大给药量为387.2 g生药/kg，相当于临床成人（体重按60kg计）拟用量的108倍，观察14天，未见动物行为表现、饮食、活动等有明显异常，未见死亡。结果显示本品短期服用比较安全。
课题组对中药的水煎浓缩液（3.14 g生药/g浸膏）进行了小鼠急性毒性试验，小鼠未见死亡，但未测出LD50值，故试验用3.14 g生药/g水煎浓缩液.配制为4.30 g生药/mL试品，结果表明小鼠的最大给药量量为387.2 g生药/kg，相当于临床成人（体重按60 kg计）拟用量的108倍。表明本品在387.2g生药/kg浓度以下时，对小鼠的急性毒性作用较低。
4 讨论
菲宁胶囊是云南省名中医李斯文教授治疗肺癌三十余年丰富的临床经验积累的结晶，在临床应用中取得了良好的疗效。该方主要由以益气、养阴、健脾等扶正中药为主，佐以清热解毒、软坚散结中药为辅而成。设立人参、沙参、白术、茯苓等16味中药为治疗肺癌的基本方。方中人参、白术、茯苓、生苡仁、砂仁具有益气健脾之功效，南北沙参具有滋阴生津之作用，浙贝、虎杖、石见穿则有清热解毒，抗癌抑瘤作用；该方将攻补融为一体，使补而不助邪，攻而不伤正。全方共奏益气健脾、消肿散结之功；主治中晚期肺癌（气阴两虚型）。
中医药治疗肺癌的研究大多是临床疗效观察，其获效依据及其作用机理，以及如何增强用药目的性与安全性等内容尚不能阐明。而实验研究大多以单味药研究为主，复方的很少。本课题探讨菲宁胶囊对人肺癌A549荷瘤裸小鼠移植瘤生长的影响，验证其在临床应用中的有效性，为进一步开发利用提供可靠的数据。
本实验证实中药菲宁胶囊服用比较安全，菲宁胶囊有抑制肿瘤生长的作用，可考虑成为一种与肿瘤化療药环磷酰胺联用长期给药从而达到增高抑瘤效果和提高生存质量的药物，进一步证实中医药联合西药有减毒增效的作用。
参考文献：
[1]孙均田.现代药理实验方法[M].北京：北京医科大学.中国协和医科大学联合出版社，2008.