【摘 要】
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目的 :在酵母系统中实现A型肉毒毒素 (BoNTa)Hc基因的可溶性分泌表达。方法 :将Hc基因克隆入表达载体pPIC9K ,用SacⅠ将重组质粒线性化 ,电转化巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris
【机 构】
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军事医学科学院微生物流行病研究所,军事医学科学院微生物流行病研究所 北京100071,北京100071
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目的 :在酵母系统中实现A型肉毒毒素 (BoNTa)Hc基因的可溶性分泌表达。方法 :将Hc基因克隆入表达载体pPIC9K ,用SacⅠ将重组质粒线性化 ,电转化巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115细胞 ,筛选G4 18抗性阳性整合子 ,进行Mut+ 表型株甲醇快速利用诱导。结果 :经过体外高拷贝整合子的筛选和诱导表达条件的优化 ,毒素Hc在pH 6 .5培养基BMMY中实现稳定的分泌表达 ,最终筛选到蛋白表达量占上清蛋白 10 %的分泌高表达株。免疫印迹和酶联免疫检测结果显示 ,重组BoNTaHc可以识别特异抗肉毒马血清并具良好的特异结合活性 ,可以诱导小鼠产生特异性抗体。结论 :酵母系统来源的具有良好免疫原性的重组BoNTa保护性抗原可以作为有效的候选重组疫苗分子。
OBJECTIVE: To achieve soluble secretory expression of Hc gene of botulinum toxin type A (BoNTa) in yeast system. Methods: Hc gene was cloned into expression vector pPIC9K. The recombinant plasmids were linearized with SacⅠ and transformed into Pichia pastoris GS115 cells electroporated. G4 18 positive integron was screened for the rapid methanol utilization of Mut + phenotype . Results: Through screening of high-copy in vitro integrons and optimization of induced expression conditions, toxin Hc was stably secreted in pH6.5 medium BMMY, and the final protein level was 10% of the supernatant Strain. Immunoblotting and enzyme-linked immunosorbent assay showed that recombinant BoNTaHc can recognize specific anti-botulinum horse serum with good specific binding activity and can induce specific antibodies in mice. Conclusion: Recombinant BoNTa protective antigen with good immunogenicity derived from yeast system can be used as an effective candidate recombinant vaccine molecule.
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