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摘要：目的 探讨妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况及意义。方法 选择2011年8月至2012年5月在河北省沧州市中心医院产科分娩的妊娠期高血压疾病患者共88例（妊娠高血压疾病组），其中妊娠期高血压孕妇30例（妊娠期高血压组），轻度子痫前期孕妇28例（轻度子痫前期组），重度子痫前期孕妇30例（重度子痫前期组），以同期正常晚期妊娠孕妇32例为对照组。采用免疫组化法检测各组孕妇胎盘组织中VEGF表达水平。结果 妊娠期高血压疾病组与对照组比较胎盘组织中VEGF的表达明显降低，差异有显著性（P<0.01），妊娠期高血压组、轻、重度子痫前期组间VEGF 表达逐渐减弱，差异有显著性（P<0.05）。结论 VEGF在妊娠期高血压疾病患者尤其是在重度子痫前期胎盘中的表达降低可能与妊娠期高血压疾病的发生发展密切相关。
关键词：子痫前期；VEGF；胎盘
妊娠期高血压疾病是妊娠期特有的疾病，我国的发病率为9.4%，国外发病率有报道为7%～12%[1]，是产科常见的严重危害着母儿健康妊娠并发症之一。目前病因未明，发病机制即血管内皮损伤导致缩血管因子和舒血管因子平衡失调，出现全身普遍性的小动脉痉挛。近年来在众多病因学说中，尤为受到关注的是胎盘或滋养细胞缺血学说。有研究发现，胎盘或滋养细胞缺血是因为血管内皮细胞浸润能力下降导致的。血管内皮细胞浸润行为受到母胎界面的粘附分子、生长因子水平等的调控。本研究通过检测子痫前期患者与健康孕妇VEGF在胎盘部位的表达，比较它们的差别，目的在于探讨其与子痫前期发生的关系，从而为探索子痫前期生理性血管重铸障碍等病理病变的产生原因和新的防治措施提供理论依据。
1材料与方法
1.1 资料来源 选取2011年8月至2012年5月在河北省沧州市中心医院产科住院分娩的妊娠期高血压疾病患者88例（妊娠期高血压疾病组），平均年龄（28.54± 3.11岁）。其中妊娠期高血压30例，轻度子痫前期28例，重度子痫前期30例。妊娠期高血压疾病的诊断标准参照乐杰主编的《妇产科学》第七版。选取同期正常晚期妊娠妇女32例为对照组，平均年龄（28.46±3.64）岁，平均孕龄（262.29±14.30）天。两组孕妇均为单胎，孕前无原发性高血压、糖尿病、慢性肾炎、甲状腺功能亢进症、肝炎及结核等急慢性病史，无烟酒不良嗜好。两组孕妇年龄、孕龄、孕次及分娩方式之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2 方法
1.2.1标本的采集和处理 胎盘娩出后，立即在胎盘脐带的对侧，剪取胎盘组织约300mg，包括胎盘全层，不含羊膜层。标本剪成约1cm×1cm×1cm大小，注意避开出血、梗死及钙化区，生理盐水冲洗后，吸干水分，将所取胎盘组织用10%甲醛溶液固定48 小时以上。常规石蜡包埋，连续切片，厚5μm。
1.2.2 胎盘组织中VEGF表达的检测 用免疫组化方法SP法对胎盘组织中VEGF的表达进行检测，一抗及免疫组化试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司，抗体稀释浓度1∶100，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。
1.2.3 结果判定 VEGF阳性表达以细胞浆被染呈棕黄色或棕褐色为阳性细胞，无着色或与背景颜色一致的为阴性细胞，染色强度评分标准：不着色0 分，着色淡1 分，着色适中2分，着色深3分。每张切片随机观察5个高倍视野，计数细胞总数和阳性细胞数。阳性细胞百分率评分标准：阳性细胞数<5%为0分，-25%为1分，-49% 为2 分，>50%为3分。两项评分相加，0-1分为（-），2.0 分为（+），3-4分为（+ +），5-6 分为（+ + +）。
1.2.4 统计方法 应用SPSS 17.0统计软件进行统计分析，组间比较采用Kruskal -WallisH 秩和检验。
2 結果
2.1 各组孕妇胎盘组织中VEGF的表达部位 各胎盘组织中均可见VEGF的表达，主要为细胞滋养细胞及合体滋养细胞，分布于细胞浆内。
图1 VEGF在正常胎盘组织中的表达 图2 VEGF在重度子痫前期胎盘组织中的表达
2.2 各组胎盘组织中VEGF表达强度的比较 妊娠期高血压疾病组与对照组比较胎盘组织中VEGF的表达降低，差异有显著性（P<0.01），妊娠期高血压组、轻、重度子痫前期组间VEGF表达逐渐减弱，差异有显著性（P<0.05，表1）。
表1 各组胎盘组织VEGF的表达强度
VEGF
组别 例数 - +- ++ +++ 阳性率%
对照组 32 2 2 10 18 93.75
妊娠期高血压疾病 88 30 30 12 16 65.91*
妊娠期高血压 30 4 6 6 14 86.67
轻度子痫前期 28 6 16 4 2 78.57**
重度子痫前期 30 20 8 2 0 66.67***
注：*与对照组比较P<0.01；**与妊娠期高血压组比较P<0.05；***与轻度子痫前期组比较P<0.05
3 讨论
妊娠期高血压疾病（HDCP）是妊娠期特有的疾病，妊娠终止后多数病理变化可以逆转，说明胎盘这一器官可能在HDCP发病中起到重要的作用。人类胎盘的形成，是滋养细胞黏附于蜕膜化的子宫内膜，与子宫螺旋小动脉接触，继而侵入血管腔，沿着血管内皮细胞逆行转移，向蜕膜及子宫肌层的浅1/3 ～1/2 侵润，分化并替换血管内皮细胞，促成血管低阻高流量的形态变化，从而使供向胎儿的血流大幅增加，保证胎儿营养物质的需要，这就是所谓的螺旋小动脉生理重铸过程。滋养细胞对螺旋动脉侵入的调节是滋养细胞侵袭能力与母体防御机制间精细平衡的过程，近年来越来越多的研究表明，滋养层细胞侵蚀过浅，即胎盘浅着床可能是导致妊娠期高血压疾病发生的重要机制之一。认为滋养层细胞对子宫螺旋动脉侵蚀不足，使胎盘植入过浅，导致胎盘血流灌注不足即胎盘缺陷，最终引发母体系统性血管内皮损伤，出现HDCP的临床症状。 VEGF是一種具有高度保守性的糖蛋白，由两个相同亚基以二硫键交联结合而成。VEGF是作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子。VEGF通过与血管内皮细胞表面特异性受体结合发挥生物学效应。其主要的生物学功能是促进新生血管形成和增加血管通透性[2]。Shiraishi[3]采用免疫组化法对胎盘的VEGF进行定位研究，发现合体滋养细胞和浸润性绒毛膜滋养细胞在整个孕期都有VEGF的表达，绒毛基质和蜕膜组织也有VEGF的表达。妊娠时，VEGF与其特异性受体结合并发挥相应的生物学功能，对受精、着床、胎盘血管形成及胎儿生长发育等有重要作用。Lyall 等[4]采用酶联免疫吸附法研究发现，子痫前期患者外周血和脐静脉血中VEGF水平低于正常孕妇水平。经免疫组化分析，子痫前期患者胎盘合体滋养细胞VEGF显色强度显著低于正常妊娠，提示子痫前期患者胎盘蜕膜局部VEGF表达下调。Cooper等[5]从基因转录水平上发现，子痫前期患者胎盘蜕膜局部VEGF mRNA 表达较正常妊娠者显著下降，而且，VEGF mRNA表达水平随妊娠的进展显著下降。本研究发现，子痫前期患者胎盘部位VEGF的表达明显低于正常孕妇的水平，两者之间比较差异有显著性。
VEGF下降影响了滋养细胞的分化与增殖，限制了滋养细胞的浸润能力，细胞与细胞、细胞与间质的相互作用减弱，造成滋养细胞侵入缺陷，螺旋小动脉生理性变化仅限于蜕膜层内部分血管，子宫肌层和蜕膜其他部分血管不发生此种生理性变化，使胎盘浅表着床和血管重铸障碍，胎盘绒毛缺血缺氧。同时VEGF受抑还可影响内皮细胞和滋养细胞损伤的修复过程，胎盘灌注进一步减少，加剧了病情的恶化。所
以推测：胎盘组织VEGF合成和释放减少，影响滋养细胞的分化、浸润及血管形成可能是子痫前期发生及发展的相关因素之一。
参考文献：
[1]U ehara Y，M oriC，Noda T et al Rescue of embryonic lethality in hepatocytegrowth factor/scatter factor knockout mice J Genesis，2010，27（3）：99.
[2]Murohara T，Horowitz JR，et al. Vascular endosthelial growth factor /vascular permeability factor enhances vascular permeability via nitric oxide and prostacyclin[J].Circulation，2008，97∶99-107.
[3]Shiraish i S，N akagaw a K，K inukaw a N et al Immunohistochemical localization of vascular endothelial growth factor in the human placenta JPlacenta，2009，17（2～ 3）：111.
[4]Lyall F，Young A，Boswell F，et al.Placental expression of vascular endothelial growth factor in placenta from regnancies complicated by pre-eclampsia and intrauterine growth restriction does not support placental hypoxia at delivery[J].Placenta，1997，18∶269-276.
[5]Cooper JC，Sharkey AM，Jones DSC，et al. VEGF mRNA levels in placenta from pregnancies complicated by pre-eclampsia[J].Br J Obstet Gynaecol，2011，103∶1191-1196.
关键词：子痫前期；VEGF；胎盘
妊娠期高血压疾病是妊娠期特有的疾病，我国的发病率为9.4%，国外发病率有报道为7%～12%[1]，是产科常见的严重危害着母儿健康妊娠并发症之一。目前病因未明，发病机制即血管内皮损伤导致缩血管因子和舒血管因子平衡失调，出现全身普遍性的小动脉痉挛。近年来在众多病因学说中，尤为受到关注的是胎盘或滋养细胞缺血学说。有研究发现，胎盘或滋养细胞缺血是因为血管内皮细胞浸润能力下降导致的。血管内皮细胞浸润行为受到母胎界面的粘附分子、生长因子水平等的调控。本研究通过检测子痫前期患者与健康孕妇VEGF在胎盘部位的表达，比较它们的差别，目的在于探讨其与子痫前期发生的关系，从而为探索子痫前期生理性血管重铸障碍等病理病变的产生原因和新的防治措施提供理论依据。
1材料与方法
1.1 资料来源 选取2011年8月至2012年5月在河北省沧州市中心医院产科住院分娩的妊娠期高血压疾病患者88例（妊娠期高血压疾病组），平均年龄（28.54± 3.11岁）。其中妊娠期高血压30例，轻度子痫前期28例，重度子痫前期30例。妊娠期高血压疾病的诊断标准参照乐杰主编的《妇产科学》第七版。选取同期正常晚期妊娠妇女32例为对照组，平均年龄（28.46±3.64）岁，平均孕龄（262.29±14.30）天。两组孕妇均为单胎，孕前无原发性高血压、糖尿病、慢性肾炎、甲状腺功能亢进症、肝炎及结核等急慢性病史，无烟酒不良嗜好。两组孕妇年龄、孕龄、孕次及分娩方式之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2 方法
1.2.1标本的采集和处理 胎盘娩出后，立即在胎盘脐带的对侧，剪取胎盘组织约300mg，包括胎盘全层，不含羊膜层。标本剪成约1cm×1cm×1cm大小，注意避开出血、梗死及钙化区，生理盐水冲洗后，吸干水分，将所取胎盘组织用10%甲醛溶液固定48 小时以上。常规石蜡包埋，连续切片，厚5μm。
1.2.2 胎盘组织中VEGF表达的检测 用免疫组化方法SP法对胎盘组织中VEGF的表达进行检测，一抗及免疫组化试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司，抗体稀释浓度1∶100，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。
1.2.3 结果判定 VEGF阳性表达以细胞浆被染呈棕黄色或棕褐色为阳性细胞，无着色或与背景颜色一致的为阴性细胞，染色强度评分标准：不着色0 分，着色淡1 分，着色适中2分，着色深3分。每张切片随机观察5个高倍视野，计数细胞总数和阳性细胞数。阳性细胞百分率评分标准：阳性细胞数<5%为0分，-25%为1分，-49% 为2 分，>50%为3分。两项评分相加，0-1分为（-），2.0 分为（+），3-4分为（+ +），5-6 分为（+ + +）。
1.2.4 统计方法 应用SPSS 17.0统计软件进行统计分析，组间比较采用Kruskal -WallisH 秩和检验。
2 結果
2.1 各组孕妇胎盘组织中VEGF的表达部位 各胎盘组织中均可见VEGF的表达，主要为细胞滋养细胞及合体滋养细胞，分布于细胞浆内。
图1 VEGF在正常胎盘组织中的表达 图2 VEGF在重度子痫前期胎盘组织中的表达
2.2 各组胎盘组织中VEGF表达强度的比较 妊娠期高血压疾病组与对照组比较胎盘组织中VEGF的表达降低，差异有显著性（P<0.01），妊娠期高血压组、轻、重度子痫前期组间VEGF表达逐渐减弱，差异有显著性（P<0.05，表1）。
表1 各组胎盘组织VEGF的表达强度
VEGF
组别 例数 - +- ++ +++ 阳性率%
对照组 32 2 2 10 18 93.75
妊娠期高血压疾病 88 30 30 12 16 65.91*
妊娠期高血压 30 4 6 6 14 86.67
轻度子痫前期 28 6 16 4 2 78.57**
重度子痫前期 30 20 8 2 0 66.67***
注：*与对照组比较P<0.01；**与妊娠期高血压组比较P<0.05；***与轻度子痫前期组比较P<0.05
3 讨论
妊娠期高血压疾病（HDCP）是妊娠期特有的疾病，妊娠终止后多数病理变化可以逆转，说明胎盘这一器官可能在HDCP发病中起到重要的作用。人类胎盘的形成，是滋养细胞黏附于蜕膜化的子宫内膜，与子宫螺旋小动脉接触，继而侵入血管腔，沿着血管内皮细胞逆行转移，向蜕膜及子宫肌层的浅1/3 ～1/2 侵润，分化并替换血管内皮细胞，促成血管低阻高流量的形态变化，从而使供向胎儿的血流大幅增加，保证胎儿营养物质的需要，这就是所谓的螺旋小动脉生理重铸过程。滋养细胞对螺旋动脉侵入的调节是滋养细胞侵袭能力与母体防御机制间精细平衡的过程，近年来越来越多的研究表明，滋养层细胞侵蚀过浅，即胎盘浅着床可能是导致妊娠期高血压疾病发生的重要机制之一。认为滋养层细胞对子宫螺旋动脉侵蚀不足，使胎盘植入过浅，导致胎盘血流灌注不足即胎盘缺陷，最终引发母体系统性血管内皮损伤，出现HDCP的临床症状。 VEGF是一種具有高度保守性的糖蛋白，由两个相同亚基以二硫键交联结合而成。VEGF是作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子。VEGF通过与血管内皮细胞表面特异性受体结合发挥生物学效应。其主要的生物学功能是促进新生血管形成和增加血管通透性[2]。Shiraishi[3]采用免疫组化法对胎盘的VEGF进行定位研究，发现合体滋养细胞和浸润性绒毛膜滋养细胞在整个孕期都有VEGF的表达，绒毛基质和蜕膜组织也有VEGF的表达。妊娠时，VEGF与其特异性受体结合并发挥相应的生物学功能，对受精、着床、胎盘血管形成及胎儿生长发育等有重要作用。Lyall 等[4]采用酶联免疫吸附法研究发现，子痫前期患者外周血和脐静脉血中VEGF水平低于正常孕妇水平。经免疫组化分析，子痫前期患者胎盘合体滋养细胞VEGF显色强度显著低于正常妊娠，提示子痫前期患者胎盘蜕膜局部VEGF表达下调。Cooper等[5]从基因转录水平上发现，子痫前期患者胎盘蜕膜局部VEGF mRNA 表达较正常妊娠者显著下降，而且，VEGF mRNA表达水平随妊娠的进展显著下降。本研究发现，子痫前期患者胎盘部位VEGF的表达明显低于正常孕妇的水平，两者之间比较差异有显著性。
VEGF下降影响了滋养细胞的分化与增殖，限制了滋养细胞的浸润能力，细胞与细胞、细胞与间质的相互作用减弱，造成滋养细胞侵入缺陷，螺旋小动脉生理性变化仅限于蜕膜层内部分血管，子宫肌层和蜕膜其他部分血管不发生此种生理性变化，使胎盘浅表着床和血管重铸障碍，胎盘绒毛缺血缺氧。同时VEGF受抑还可影响内皮细胞和滋养细胞损伤的修复过程，胎盘灌注进一步减少，加剧了病情的恶化。所
以推测：胎盘组织VEGF合成和释放减少，影响滋养细胞的分化、浸润及血管形成可能是子痫前期发生及发展的相关因素之一。
参考文献：
[1]U ehara Y，M oriC，Noda T et al Rescue of embryonic lethality in hepatocytegrowth factor/scatter factor knockout mice J Genesis，2010，27（3）：99.
[2]Murohara T，Horowitz JR，et al. Vascular endosthelial growth factor /vascular permeability factor enhances vascular permeability via nitric oxide and prostacyclin[J].Circulation，2008，97∶99-107.
[3]Shiraish i S，N akagaw a K，K inukaw a N et al Immunohistochemical localization of vascular endothelial growth factor in the human placenta JPlacenta，2009，17（2～ 3）：111.
[4]Lyall F，Young A，Boswell F，et al.Placental expression of vascular endothelial growth factor in placenta from regnancies complicated by pre-eclampsia and intrauterine growth restriction does not support placental hypoxia at delivery[J].Placenta，1997，18∶269-276.
[5]Cooper JC，Sharkey AM，Jones DSC，et al. VEGF mRNA levels in placenta from pregnancies complicated by pre-eclampsia[J].Br J Obstet Gynaecol，2011，103∶1191-1196.