【摘 要】
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目的 观察尿酸对人肾小管上皮细胞线粒体氧化损伤及相关凋亡途径的影响,探讨其可能作用机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),分别加入不同浓度的尿酸(480μmol/L、720 μmol/L)进行干预,于0h、24h、48 h收集细胞;应用MitoSOX染色检测活细胞线粒体中ROS的产生;JC-1染色检测线粒体膜电位的变化;Western印迹和免疫荧光化学法对凋亡诱导因子(AIF)和抗增殖因
【机 构】
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目的 观察尿酸对人肾小管上皮细胞线粒体氧化损伤及相关凋亡途径的影响,探讨其可能作用机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),分别加入不同浓度的尿酸(480μmol/L、720 μmol/L)进行干预,于0h、24h、48 h收集细胞;应用MitoSOX染色检测活细胞线粒体中ROS的产生;JC-1染色检测线粒体膜电位的变化;Western印迹和免疫荧光化学法对凋亡诱导因子(AIF)和抗增殖因子(prohibitin)蛋白表达进行细胞亚定位及半定量分析;Annexin V-FITC及PI双染法检测细胞凋亡.结果 480 μmol/L尿酸刺激细胞24 h,线粒体ROS产量较正常对照组升高(P＜0.05),且随尿酸刺激浓度升高和时间延长逐渐上调,线粒体膜电位则逐渐降低.480 μmol/L尿酸刺激细胞24h,细胞凋亡率和AIF蛋白表达均较正常对照组无明显变化(P＞0.05),而刺激48 h时两者升高且其差异有统计学意义(P＜ 0.05);720μmol/L尿酸干预24h时,AIF蛋白表达和细胞凋亡率已较正常对照组升高(P＜0.05),干预48 h时升高更为显著.480μmol/L尿酸刺激细胞24h,prohibitin蛋白表达较正常对照组下降(P＜0.05),720 μmol/L尿酸干预48 h,降低最为明显.结论 尿酸可诱导HK-2细胞线粒体ROS合成增多,膜电位下降,线粒体相关蛋白prohibitin表达下调,激活线粒体途径导致细胞凋亡。
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