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【摘 要】目的：研究金黑子牌野生黑枸杞茶的抗氧化作用。方法：采用体外实验观察金黑子牌野生黑枸杞茶对H2O2诱导的红细胞氧化溶血和大鼠肝匀浆脂质过氧化的保护作用。结果：金黑子牌野生黑枸杞茶能够抑制H2O2诱导的红细胞氧化溶血和肝组织匀浆脂质过氧化反应。结论：金黑子牌野生黑枸杞茶具有显著的抗氧化活性
【中图分类号】R285 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）11—0192—02
黑枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）又称苏枸杞。为我国西部青海、西藏等高原沙漠地区一种地道的野生药用植物资源。维医、藏医很早就有用黑枸杞入药的记载[1]。黑枸杞味甘、性平，富含蛋白质、枸杞多糖、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等多种营养成分。尤其含有丰富的黑果色素—天然原花青素（Proantho Cyanidins，PC），是迄今为止，发现PC含量最高的天然野生植物[2，3]。黑枸杞茶是应用青海柴达木产黑枸杞制备的一种功能性食品，为了验证其功效，进一步促进的野生黑枸杞的开发和利用，本实验对黑枸杞茶的体外抗氧化活性进行了研究。
1 材料与方法
1.1材料与仪器
金黑子牌野生黑枸杞茶，由青海紫阳生物科技有限公司提供，批号：2013060501、2013061301，试验时用矿泉水浸泡5分钟后释放天然色素，呈紫兰色，经过滤离心取上清液用于实验。
大鼠10只，体重180～220g。浙江省实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（浙）2008-0033H202，南昌白云药业有限公司生产；生理盐水，南京小营药业集团有限公司生产；三氯乙酸，成都市科龙化工试剂厂生产；2- 硫代巴比妥酸，广东省化学试剂工程技术研究开发中心生产；康师傅矿泉水，南京顶津食品有限公司生产。
SpectraMax 190酶标仪，美国分子仪器公司产品。
1.2实验方法
1.2.1对H2O2诱导的红细胞氧化溶血的影响[4] 取大鼠，眼球取血，分离红细胞，生理盐水洗涤三次后制成体积分数0.5 %的红细胞悬液。取红细胞悬液1.0mL于试管中，加入不同浓度（0.0500g/ml、0.0250g/ml、0.0125g/ml）的金黑子牌野生黑枸杞茶（由于黑枸杞茶浸泡后有颜色，为排除样品本身颜色带来的误差，每个浓度都设立一个参照组，即：除将0.5 %的红细胞悬液改为等体积的生理盐水外，其他均相同），对照以蒸馏水代替，最后加100mmol/L双氧水0.1 mL，混匀后于37℃水浴60min，取出后用生理盐水将反应混合物稀释5倍，3000 r/min离心5min，上清液于415nm处比色，测出样品管的吸光度为A，对照管吸光度为A0。对红细胞氧化溶血的抑制率为：抑制率=[（A0- A0对照）-（A-A对照）]/ （A0- A0对照）*100%。
1.2.2对大鼠肝匀浆脂质过氧化的影响[5] 取大鼠，颈椎脱臼处死，迅速取出肝脏，用冷的生理盐水洗净血液，用生理盐水制成4%组织匀浆， 取质量分数为4%的大鼠肝匀浆悬浮液1 mL，加入不同浓度（0.050g/ml、0.0250g/ml、0.0125g/ml）的金黑子牌野生黑枸杞茶（由于黑枸杞茶浸泡后有颜色，为排除样品本身颜色带来的误差，每个浓度都设立一个参照组，即：除将4 %的大鼠肝匀浆悬浮液改为等体积的生理盐水外，其他均相同）溶液 0.2 mL，在 37 ℃溫育 1 h后，加入质量分数 15%的 TCA（三氯乙酸） 1 mL终止反应，再加入0.67%的 TBA（2- 硫代巴比妥酸）1 mL用沸水浴显色 15 min，冷却后于 3 000 r/min 下离心10 min，于波长 532 nm 处测定上清液吸光度，以吸光度表示 MDA 含量的多少，吸光度越大，表明MDA 的含量越多。抑制率计算如下：抑制率=[（A0- A0对照）-（A-A对照）]/ （A0- A0对照）*100%。
2 实验结果
2.1金黑子牌野生黑枸杞茶对H2O2诱导的红细胞氧化溶血的作用，见表1。结果表明， 金黑子牌野生黑枸杞茶能够抑制H2O2诱导的红细胞氧化溶血， 并且随着剂量的增加，抑制作用也增加，呈现了良好的量效关系。
3讨论
黑枸杞具有一定的医疗保健功能。藏医用于治疗心热病、心脏病、月经不调、停经等病症。维吾尔医生常用黑枸杞果实及根皮治疗尿道结石、月经不调、癣疥、齿龈出血等病症。民间用作滋补强壮、明目及降压。有关黑枸杞的开发早期多作为一种天然来源色素资源，现有的研究已经对其中所含有的营养成分进行了分析，并对其中原花青素、枸杞多糖等有效成分进行了提取、分离和有效成分生理功能的分析。多项研究证实黑枸杞提取成分、黑枸杞色素具有良好的抗氧化活性；黑枸杞多糖具有明显的抗疲劳作用[6、7]。这些结果为黑枸杞在保健、药用方面的开发利用提供了科学依据。但目前已经上市的黑枸杞相关产品极少。
现代研究表明，过氧化损伤是引起多种疾病和老化的重要因素，过多的自由基会攻击蛋白质、脂质、DNA 等生物大分子，破坏细胞结构，干扰人体的正常代谢活动，与许多疾病如肿瘤、炎症、衰老的发生有密切的关系，因此生物体内活性氧的生成与清除的平衡对生命过程的正常进行是十分重要。开发天然抗氧化产品一直是保健食品、药品研究 热点。
红细胞膜易受到氧化损伤而导致溶血现象的发生因此，红细胞膜常被用作分析和筛选天然抗氧化剂的实验体系。丙二醛（MDA）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此测定肝组织匀浆中MDA可以反应肝细胞膜过氧化损伤程度。本研究结果显示，金黑子牌野生黑枸杞茶不仅对过氧化所致红细胞溶血的抵抗作用，而且能明显抑制肝匀中MDA的生成，均表明其在细胞水平上具有较好的抗氧化活性，可以有效的减弱体外的脂质过氧化反应。研究报道显示，黑枸杞含有丰富的原花青素及其它黄酮类成分，原花青素是迄今为止人类所发现的最强、最有效的自由基清除剂之一，一种良好的氧游离基清除剂和脂质过氧化抑制剂，具有较强的自由基清除和抗氧化活性[3、8]，因此，金黑子牌野生黑枸杞茶的抗氧化活性与其富原花青素等有关。
参考文献：
[1] 甘青梅，骆桂法，李普衍等，卓玛东珠，陈岳蓉，左振常.藏药黑枸杞开发利用的研究[J].青海科技，1997，4（1）：17—19.
[2] 矫晓丽，迟晓峰，董 琦，肖远灿，胡凤祖. 柴达木野生黑枸杞营养成分分析[J]. 氨基酸和生物资源 2011，33（ 3） ： 60 ～62
[3] 陈晨，文怀秀，赵晓辉，邵斌贝，陶燕铎，梅丽娟. 黑枸杞色素中原花青素含量测定[J]. 光谱实验室.2011，28（4）：1167-1169
[4] 刘培勋，高小荣，徐文清，周则卫，沈秀.银耳碱提多糖抗氧化活性的研究[J].中药药理与床，2005，21（4）：35-37.
[5] 徐晓云，潘思轶，谢笔钧，曹少谦.沙棘籽原花青素体外抗氧化活性研究[J].食品科学，2005，26（2）：216-218.
[6] 汪建红， 陈晓琴， 张蔚佼. 黑枸杞果实多糖抗疲劳生物功效及其机制研究[J]. 食品科技，2009，34（2）：203-206
[7] 李进，瞿伟菁，张素军，吕海英. 黑枸杞色素的抗氧化活性研究[J]. 中国中药杂志，2006，31（14）1179-1183
[8] 孙传范. 原花青素的研究进展[J].食品与机械，2010，26（4）：146-148
【中图分类号】R285 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）11—0192—02
黑枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）又称苏枸杞。为我国西部青海、西藏等高原沙漠地区一种地道的野生药用植物资源。维医、藏医很早就有用黑枸杞入药的记载[1]。黑枸杞味甘、性平，富含蛋白质、枸杞多糖、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等多种营养成分。尤其含有丰富的黑果色素—天然原花青素（Proantho Cyanidins，PC），是迄今为止，发现PC含量最高的天然野生植物[2，3]。黑枸杞茶是应用青海柴达木产黑枸杞制备的一种功能性食品，为了验证其功效，进一步促进的野生黑枸杞的开发和利用，本实验对黑枸杞茶的体外抗氧化活性进行了研究。
1 材料与方法
1.1材料与仪器
金黑子牌野生黑枸杞茶，由青海紫阳生物科技有限公司提供，批号：2013060501、2013061301，试验时用矿泉水浸泡5分钟后释放天然色素，呈紫兰色，经过滤离心取上清液用于实验。
大鼠10只，体重180～220g。浙江省实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（浙）2008-0033H202，南昌白云药业有限公司生产；生理盐水，南京小营药业集团有限公司生产；三氯乙酸，成都市科龙化工试剂厂生产；2- 硫代巴比妥酸，广东省化学试剂工程技术研究开发中心生产；康师傅矿泉水，南京顶津食品有限公司生产。
SpectraMax 190酶标仪，美国分子仪器公司产品。
1.2实验方法
1.2.1对H2O2诱导的红细胞氧化溶血的影响[4] 取大鼠，眼球取血，分离红细胞，生理盐水洗涤三次后制成体积分数0.5 %的红细胞悬液。取红细胞悬液1.0mL于试管中，加入不同浓度（0.0500g/ml、0.0250g/ml、0.0125g/ml）的金黑子牌野生黑枸杞茶（由于黑枸杞茶浸泡后有颜色，为排除样品本身颜色带来的误差，每个浓度都设立一个参照组，即：除将0.5 %的红细胞悬液改为等体积的生理盐水外，其他均相同），对照以蒸馏水代替，最后加100mmol/L双氧水0.1 mL，混匀后于37℃水浴60min，取出后用生理盐水将反应混合物稀释5倍，3000 r/min离心5min，上清液于415nm处比色，测出样品管的吸光度为A，对照管吸光度为A0。对红细胞氧化溶血的抑制率为：抑制率=[（A0- A0对照）-（A-A对照）]/ （A0- A0对照）*100%。
1.2.2对大鼠肝匀浆脂质过氧化的影响[5] 取大鼠，颈椎脱臼处死，迅速取出肝脏，用冷的生理盐水洗净血液，用生理盐水制成4%组织匀浆， 取质量分数为4%的大鼠肝匀浆悬浮液1 mL，加入不同浓度（0.050g/ml、0.0250g/ml、0.0125g/ml）的金黑子牌野生黑枸杞茶（由于黑枸杞茶浸泡后有颜色，为排除样品本身颜色带来的误差，每个浓度都设立一个参照组，即：除将4 %的大鼠肝匀浆悬浮液改为等体积的生理盐水外，其他均相同）溶液 0.2 mL，在 37 ℃溫育 1 h后，加入质量分数 15%的 TCA（三氯乙酸） 1 mL终止反应，再加入0.67%的 TBA（2- 硫代巴比妥酸）1 mL用沸水浴显色 15 min，冷却后于 3 000 r/min 下离心10 min，于波长 532 nm 处测定上清液吸光度，以吸光度表示 MDA 含量的多少，吸光度越大，表明MDA 的含量越多。抑制率计算如下：抑制率=[（A0- A0对照）-（A-A对照）]/ （A0- A0对照）*100%。
2 实验结果
2.1金黑子牌野生黑枸杞茶对H2O2诱导的红细胞氧化溶血的作用，见表1。结果表明， 金黑子牌野生黑枸杞茶能够抑制H2O2诱导的红细胞氧化溶血， 并且随着剂量的增加，抑制作用也增加，呈现了良好的量效关系。
3讨论
黑枸杞具有一定的医疗保健功能。藏医用于治疗心热病、心脏病、月经不调、停经等病症。维吾尔医生常用黑枸杞果实及根皮治疗尿道结石、月经不调、癣疥、齿龈出血等病症。民间用作滋补强壮、明目及降压。有关黑枸杞的开发早期多作为一种天然来源色素资源，现有的研究已经对其中所含有的营养成分进行了分析，并对其中原花青素、枸杞多糖等有效成分进行了提取、分离和有效成分生理功能的分析。多项研究证实黑枸杞提取成分、黑枸杞色素具有良好的抗氧化活性；黑枸杞多糖具有明显的抗疲劳作用[6、7]。这些结果为黑枸杞在保健、药用方面的开发利用提供了科学依据。但目前已经上市的黑枸杞相关产品极少。
现代研究表明，过氧化损伤是引起多种疾病和老化的重要因素，过多的自由基会攻击蛋白质、脂质、DNA 等生物大分子，破坏细胞结构，干扰人体的正常代谢活动，与许多疾病如肿瘤、炎症、衰老的发生有密切的关系，因此生物体内活性氧的生成与清除的平衡对生命过程的正常进行是十分重要。开发天然抗氧化产品一直是保健食品、药品研究 热点。
红细胞膜易受到氧化损伤而导致溶血现象的发生因此，红细胞膜常被用作分析和筛选天然抗氧化剂的实验体系。丙二醛（MDA）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此测定肝组织匀浆中MDA可以反应肝细胞膜过氧化损伤程度。本研究结果显示，金黑子牌野生黑枸杞茶不仅对过氧化所致红细胞溶血的抵抗作用，而且能明显抑制肝匀中MDA的生成，均表明其在细胞水平上具有较好的抗氧化活性，可以有效的减弱体外的脂质过氧化反应。研究报道显示，黑枸杞含有丰富的原花青素及其它黄酮类成分，原花青素是迄今为止人类所发现的最强、最有效的自由基清除剂之一，一种良好的氧游离基清除剂和脂质过氧化抑制剂，具有较强的自由基清除和抗氧化活性[3、8]，因此，金黑子牌野生黑枸杞茶的抗氧化活性与其富原花青素等有关。
参考文献：
[1] 甘青梅，骆桂法，李普衍等，卓玛东珠，陈岳蓉，左振常.藏药黑枸杞开发利用的研究[J].青海科技，1997，4（1）：17—19.
[2] 矫晓丽，迟晓峰，董 琦，肖远灿，胡凤祖. 柴达木野生黑枸杞营养成分分析[J]. 氨基酸和生物资源 2011，33（ 3） ： 60 ～62
[3] 陈晨，文怀秀，赵晓辉，邵斌贝，陶燕铎，梅丽娟. 黑枸杞色素中原花青素含量测定[J]. 光谱实验室.2011，28（4）：1167-1169
[4] 刘培勋，高小荣，徐文清，周则卫，沈秀.银耳碱提多糖抗氧化活性的研究[J].中药药理与床，2005，21（4）：35-37.
[5] 徐晓云，潘思轶，谢笔钧，曹少谦.沙棘籽原花青素体外抗氧化活性研究[J].食品科学，2005，26（2）：216-218.
[6] 汪建红， 陈晓琴， 张蔚佼. 黑枸杞果实多糖抗疲劳生物功效及其机制研究[J]. 食品科技，2009，34（2）：203-206
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[8] 孙传范. 原花青素的研究进展[J].食品与机械，2010，26（4）：146-148