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摘 要：
体外培养基抑菌试验表明：人工饲料专用消毒剂对灵菌、白僵菌、绿僵菌和曲霉菌的最低杀灭质量浓度为0.5%；生物试验表明：含量为1.0%的消毒剂对家蚕的生长发育无不良影响。
关键词：家蚕；人工饲料；消毒剂；消毒效果
中图分类号：S884.1+1 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2014）04-0097-03
人工饲料养蚕是适应专业化、规模化蚕茧生产技术，提高养蚕工效、节省饲育设施的一条重要途径[1，2]。家蚕人工饲料的主要组成成分是桑叶粉和大豆粉，其含水率高，营养丰富，又需在高温多湿的环境条件下用于养蚕，因此极易腐败变质，滋生细菌和真菌，诱发家蚕的细菌性败血病和僵病，严重影响养蚕效果[3，4]。为防止人工饲料变质并保持其品质稳定性，国内外广泛采用在人工饲料中添加防腐剂。防腐剂是一类能抑制微生物活动、防止微生物造成饲料腐败变质，从而延长保质期的食品添加剂[5]。在高温高湿特别是农村比较简陋的养蚕条件下进行人工饲料养蚕，仅靠添加防腐剂很难达到消毒及龄期末除湿干燥的要求，饲料极易霉变，诱发蚕病，影响家蚕就眠。因此，研制一种既能消毒杀菌又能在龄期末起到除湿止桑的多用途消毒剂，是人工饲育技术必须解决的问题。
氯溴异氰脲酸（C3HO3N3ClBr）是一种高效、广谱的内吸性杀菌剂，其水溶液呈酸性。将氯溴异氰脲酸药液喷施在作物表面能缓慢地释放次溴酸（HOBr）和次氯酸（HOCl），次溴酸的活性是次氯酸的4倍，对细菌和真菌有强烈的杀灭作用[6]。
膨润土是一种无机高活性火山灰粘土材料，具有强吸水性及离子吸附能力，其主要成分为蒙脱石[7，8]。鉴于氯溴异氰脲酸的杀菌效果和膨润土的强吸水性，本课题组以氯溴异氰脲酸和膨润土为原料配制成人工饲料专用消毒剂，对家蚕病原体进行了消毒试验。
1 材料与方法
1.1 材料与药剂
供试家蚕品种：菁松×皓月，人工饲料饲育。
人工饲料：山东省蚕业研究所经济室配制。
供试病原：均由本所蚕病研究室保存。家蚕病原细菌为本所蚕病室保存的灵菌（Serratia marcescens Bizio），试验时取菌种一支，加水2～3 mL制成菌悬液，置冰箱中4℃保存备用。家蚕病原真菌——白僵菌（Beauveria bassiana）、绿僵菌（Nomuraea rileyi Farlow）、黄曲霉（Aspergillus flavus）用蚕蛹培养基繁殖继代获取，取分生孢子加适量吐温-80使其悬浮于灭菌蒸馏水中，经2层纱布过滤，白僵菌稀释至2.0×107 个/mL，绿僵菌和黄曲霉稀释至5.0×107个/mL，置冰箱中4℃保存备用，保存时间不超过30 d。
供试培养基：营养琼脂培养基：蛋白胨10 g，牛肉膏5 g，氯化钠5 g，琼脂15 g，蒸馏水1 000 mL。加热溶解后调pH值至 7.2～7.4，分装，于121℃ 压力蒸汽灭菌 20 min备用。沙堡琼脂培养基：葡萄糖40 g，蛋白胨10 g，琼脂20 g，蒸馏水1 000 mL。将上述成分混合后，加热至完全溶解，调pH值至5.6±0.2，于115℃压力蒸汽灭菌 30 min备用。
供试药剂：50%氯溴异氰脲酸，由鲁西爱农化工有限公司提供；膨润土：由潍坊市坊子区兴隆膨润土厂提供。
1.2 对病原细菌的消毒试验
向直径90 mm的无菌平皿中注入20 mL熔化的营养琼脂培养基，凝固，冷却至室温。将配制好的灵菌菌液在每皿培养基上均匀涂抹3个直径为20 mm的菌圈，然后把质量浓度为0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%的消毒剂按60 g/m2均匀撒在培养基上，密封培养皿，37℃ 培养箱中培养72 h，观察菌落生长情况。以涂抹菌不做处理为毒对照，并以在培养基上涂抹无菌水作为空白对照。每处理重复3皿。
1.3 对病原真菌的消毒试验
向直径90 mm的无菌平皿中注入20 mL熔化的沙堡琼脂培养基，凝固，冷却至室温。将配制好的菌液在每皿培养基上均匀涂抹3个直径为20 mm的菌圈，然后把质量浓度为0.2%、0.5%、1.0%、2.0%的消毒剂按60 g/m2均匀撒在培养基上，密封培养皿，白僵菌、绿僵菌在25℃培养箱中培养72 h，黄曲霉在30℃培养箱中培养72 h，观察菌落生长情况。以涂抹菌不做处理为毒对照，并以在培养基上涂抹无菌水作为空白对照。每处理重复3皿。
1.4 对家蚕生理影响试验
二龄起蚕分区饲养2 d，剔除弱小蚕，定数，每区50头，90%见眠后按60 g/m2撒含量为1.0%的人工饲料消毒剂，同时设不撒消毒剂为空白对照，调查起蚕率和起蚕体重。
1.5 药物的稳定性试验
配制质量浓度为1.0%的消毒剂，置于密封的聚乙烯塑料袋内，在温度为40℃、湿度为80%的条件下保存，放置1、3、30 d后测其氯溴异氰脲酸的含量。
2 结果与分析
2.1 人工饲料消毒剂对病原细菌和真菌的杀灭效果
结果（表1、表2）可以看出，人工饲料消毒剂对灵菌、白僵菌、绿僵菌和曲霉菌杀灭的临界浓度均为0.5%。
2.2 人工饲料消毒剂对家蚕起蚕率和体重的影响
2.3 人工饲料消毒剂稳定性
配制质量浓度为1.0%的人工饲料消毒剂，置于密封的聚乙烯塑料袋内，在温度为40℃、湿度为80%的条件下保存，放置1、3、30 d后，有效氯分别下降了4.6%、13.0%、26.7%，表明氯溴异氰脲酸和膨润土混合在一起不太稳定，应当分别包装。
3 讨论
本试验研究了以氯溴异氰脲酸和膨润土为原料的人工饲料专用消毒剂对家蚕病原的消毒效果。体外培养基抑菌试验表明，该消毒剂对灵菌、白僵菌、绿僵菌和曲霉菌的最低杀灭质量浓度为0.5%，而且含量为1.0%的消毒剂对家蚕的起蚕率和体重无不良影响。稳定性研究表明，氯溴异氰脲酸和膨润土混合在一起不太稳定，应当分别包装，配制后应保存在密闭容器内，并在24 h内用完。综上所述，人工饲料消毒剂对家蚕病原细菌和真菌有较好的杀灭效果，可以在人工饲料养蚕中推广应用。
参 考 文 献：
[1]
张月华，徐安英.家蚕人工饲料研究进展[J].安徽农业科学，2006，34（17）：4326-4327.
[2] 李化秀，张亚平，娄齐年.家蚕原蚕稚蚕人工饲料育研究初报[J].山东农业科学，2005（3）：64-66.
[3] 顾寅钰，李化秀，施新琴，等.家蚕人工饲料中桑叶粉及大豆粉含量与质量对稚蚕、壮蚕及茧质的影响[J].山东农业科学，2013，45（5）：105-107.
[4] 崔为正，王彦文，张国基，等.家蚕人工饲料防腐剂和抗菌素的筛选研究[J].山东农业大学学报，1999，30（3）：219-225.
[5] 凌关庭.食品添加剂手册[M].北京：化学工业出版社，1997.
[6] 师红梅，毛红彦，刘雅，等.氯溴异氰脲酸防治几类主要病害药效研究[J].河南科技学院学报：自然科学版，2005，33（1）：63-65.
[7] 朱伟，林城，李磊，等.以膨润土为辅助添加剂固化/稳定化污泥的试验研究[J].环境科学，2007，28（5）：1020-1024.
[8] 宋吉英.化学添加剂对玉米吸收汞的抑制作用研究[J].山东农业科学，2009（8）：63-65.
体外培养基抑菌试验表明：人工饲料专用消毒剂对灵菌、白僵菌、绿僵菌和曲霉菌的最低杀灭质量浓度为0.5%；生物试验表明：含量为1.0%的消毒剂对家蚕的生长发育无不良影响。
关键词：家蚕；人工饲料；消毒剂；消毒效果
中图分类号：S884.1+1 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2014）04-0097-03
人工饲料养蚕是适应专业化、规模化蚕茧生产技术，提高养蚕工效、节省饲育设施的一条重要途径[1，2]。家蚕人工饲料的主要组成成分是桑叶粉和大豆粉，其含水率高，营养丰富，又需在高温多湿的环境条件下用于养蚕，因此极易腐败变质，滋生细菌和真菌，诱发家蚕的细菌性败血病和僵病，严重影响养蚕效果[3，4]。为防止人工饲料变质并保持其品质稳定性，国内外广泛采用在人工饲料中添加防腐剂。防腐剂是一类能抑制微生物活动、防止微生物造成饲料腐败变质，从而延长保质期的食品添加剂[5]。在高温高湿特别是农村比较简陋的养蚕条件下进行人工饲料养蚕，仅靠添加防腐剂很难达到消毒及龄期末除湿干燥的要求，饲料极易霉变，诱发蚕病，影响家蚕就眠。因此，研制一种既能消毒杀菌又能在龄期末起到除湿止桑的多用途消毒剂，是人工饲育技术必须解决的问题。
氯溴异氰脲酸（C3HO3N3ClBr）是一种高效、广谱的内吸性杀菌剂，其水溶液呈酸性。将氯溴异氰脲酸药液喷施在作物表面能缓慢地释放次溴酸（HOBr）和次氯酸（HOCl），次溴酸的活性是次氯酸的4倍，对细菌和真菌有强烈的杀灭作用[6]。
膨润土是一种无机高活性火山灰粘土材料，具有强吸水性及离子吸附能力，其主要成分为蒙脱石[7，8]。鉴于氯溴异氰脲酸的杀菌效果和膨润土的强吸水性，本课题组以氯溴异氰脲酸和膨润土为原料配制成人工饲料专用消毒剂，对家蚕病原体进行了消毒试验。
1 材料与方法
1.1 材料与药剂
供试家蚕品种：菁松×皓月，人工饲料饲育。
人工饲料：山东省蚕业研究所经济室配制。
供试病原：均由本所蚕病研究室保存。家蚕病原细菌为本所蚕病室保存的灵菌（Serratia marcescens Bizio），试验时取菌种一支，加水2～3 mL制成菌悬液，置冰箱中4℃保存备用。家蚕病原真菌——白僵菌（Beauveria bassiana）、绿僵菌（Nomuraea rileyi Farlow）、黄曲霉（Aspergillus flavus）用蚕蛹培养基繁殖继代获取，取分生孢子加适量吐温-80使其悬浮于灭菌蒸馏水中，经2层纱布过滤，白僵菌稀释至2.0×107 个/mL，绿僵菌和黄曲霉稀释至5.0×107个/mL，置冰箱中4℃保存备用，保存时间不超过30 d。
供试培养基：营养琼脂培养基：蛋白胨10 g，牛肉膏5 g，氯化钠5 g，琼脂15 g，蒸馏水1 000 mL。加热溶解后调pH值至 7.2～7.4，分装，于121℃ 压力蒸汽灭菌 20 min备用。沙堡琼脂培养基：葡萄糖40 g，蛋白胨10 g，琼脂20 g，蒸馏水1 000 mL。将上述成分混合后，加热至完全溶解，调pH值至5.6±0.2，于115℃压力蒸汽灭菌 30 min备用。
供试药剂：50%氯溴异氰脲酸，由鲁西爱农化工有限公司提供；膨润土：由潍坊市坊子区兴隆膨润土厂提供。
1.2 对病原细菌的消毒试验
向直径90 mm的无菌平皿中注入20 mL熔化的营养琼脂培养基，凝固，冷却至室温。将配制好的灵菌菌液在每皿培养基上均匀涂抹3个直径为20 mm的菌圈，然后把质量浓度为0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%的消毒剂按60 g/m2均匀撒在培养基上，密封培养皿，37℃ 培养箱中培养72 h，观察菌落生长情况。以涂抹菌不做处理为毒对照，并以在培养基上涂抹无菌水作为空白对照。每处理重复3皿。
1.3 对病原真菌的消毒试验
向直径90 mm的无菌平皿中注入20 mL熔化的沙堡琼脂培养基，凝固，冷却至室温。将配制好的菌液在每皿培养基上均匀涂抹3个直径为20 mm的菌圈，然后把质量浓度为0.2%、0.5%、1.0%、2.0%的消毒剂按60 g/m2均匀撒在培养基上，密封培养皿，白僵菌、绿僵菌在25℃培养箱中培养72 h，黄曲霉在30℃培养箱中培养72 h，观察菌落生长情况。以涂抹菌不做处理为毒对照，并以在培养基上涂抹无菌水作为空白对照。每处理重复3皿。
1.4 对家蚕生理影响试验
二龄起蚕分区饲养2 d，剔除弱小蚕，定数，每区50头，90%见眠后按60 g/m2撒含量为1.0%的人工饲料消毒剂，同时设不撒消毒剂为空白对照，调查起蚕率和起蚕体重。
1.5 药物的稳定性试验
配制质量浓度为1.0%的消毒剂，置于密封的聚乙烯塑料袋内，在温度为40℃、湿度为80%的条件下保存，放置1、3、30 d后测其氯溴异氰脲酸的含量。
2 结果与分析
2.1 人工饲料消毒剂对病原细菌和真菌的杀灭效果
结果（表1、表2）可以看出，人工饲料消毒剂对灵菌、白僵菌、绿僵菌和曲霉菌杀灭的临界浓度均为0.5%。
2.2 人工饲料消毒剂对家蚕起蚕率和体重的影响
2.3 人工饲料消毒剂稳定性
配制质量浓度为1.0%的人工饲料消毒剂，置于密封的聚乙烯塑料袋内，在温度为40℃、湿度为80%的条件下保存，放置1、3、30 d后，有效氯分别下降了4.6%、13.0%、26.7%，表明氯溴异氰脲酸和膨润土混合在一起不太稳定，应当分别包装。
3 讨论
本试验研究了以氯溴异氰脲酸和膨润土为原料的人工饲料专用消毒剂对家蚕病原的消毒效果。体外培养基抑菌试验表明，该消毒剂对灵菌、白僵菌、绿僵菌和曲霉菌的最低杀灭质量浓度为0.5%，而且含量为1.0%的消毒剂对家蚕的起蚕率和体重无不良影响。稳定性研究表明，氯溴异氰脲酸和膨润土混合在一起不太稳定，应当分别包装，配制后应保存在密闭容器内，并在24 h内用完。综上所述，人工饲料消毒剂对家蚕病原细菌和真菌有较好的杀灭效果，可以在人工饲料养蚕中推广应用。
参 考 文 献：
[1]
张月华，徐安英.家蚕人工饲料研究进展[J].安徽农业科学，2006，34（17）：4326-4327.
[2] 李化秀，张亚平，娄齐年.家蚕原蚕稚蚕人工饲料育研究初报[J].山东农业科学，2005（3）：64-66.
[3] 顾寅钰，李化秀，施新琴，等.家蚕人工饲料中桑叶粉及大豆粉含量与质量对稚蚕、壮蚕及茧质的影响[J].山东农业科学，2013，45（5）：105-107.
[4] 崔为正，王彦文，张国基，等.家蚕人工饲料防腐剂和抗菌素的筛选研究[J].山东农业大学学报，1999，30（3）：219-225.
[5] 凌关庭.食品添加剂手册[M].北京：化学工业出版社，1997.
[6] 师红梅，毛红彦，刘雅，等.氯溴异氰脲酸防治几类主要病害药效研究[J].河南科技学院学报：自然科学版，2005，33（1）：63-65.
[7] 朱伟，林城，李磊，等.以膨润土为辅助添加剂固化/稳定化污泥的试验研究[J].环境科学，2007，28（5）：1020-1024.
[8] 宋吉英.化学添加剂对玉米吸收汞的抑制作用研究[J].山东农业科学，2009（8）：63-65.