论文部分内容阅读
【摘 要】 目的：探讨刺五加注射液对人乳腺癌细胞MCF-7的体外增殖的影响。方法：采用MTT法测定了不同剂量的刺五加注射液对MCF-7细胞的体外增殖的抑制作用，并通过倒置显微镜观察其细胞形态的变化。结果：刺五加注射液可以抑制MCF-7细胞的增殖，量效关系良好；形态学观察到细胞凋亡。结论：刺五加注射液对MCF-7细胞增殖具有较强的抑制作用。
【关键词】 刺五加注射液；人乳腺癌细胞；MCF-7；增殖作用；抑制作用
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）11-0014-02
刺五加又名五加参，为五加科植物刺五加的根和茎。现代医学研究表明刺五加具有抗肿瘤、抗氧化、抗血栓、提高免疫力等多方面的的作用[1-2]。据报道，刺五加及其提取物对肺癌、胃癌、艾氏腹水癌及白血病等多种肿瘤均有较强抑制作用，还可改善肿瘤化疗患者的免疫状况，提高机体的抗肿瘤功效[3-4]。本试验测定不同剂量的刺五加注射液对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用，为刺五加抗肿瘤作用的研究及今后的临床应用提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料 刺五加注射液（批号：2007111411，黑龙江省完达山制药厂）；顺铂（批号：04080212，齐鲁制药有限公司）；MCF-7细胞（由河北大学生命科学学院提供）；四甲基偶氮唑盐（MTT）、RPMI 1640培养液（美国 Sigma 公司）；0. 25% 胰蛋白酶消化液（美国HyClone公司）。二甲亚砜（DMSO，上海紫一试剂厂）；胎牛血清（中国医学科学院生物工程研究所）。
1.2方法
1.2.1 细胞的培养 MCF-7细胞复苏后，贴壁生长于含10% 胎牛血清，青霉素和链霉素各100U/ml 的RPMI 1640完全培养液中，并置于37℃，5%CO2的培养箱中培养。
1.2.2 刺五加注射液对细胞增殖抑制率的影响 采用MTT法，将MCF-7细胞按照5×104 个/ml的密度接种到96孔培养板中，试验分为以下几组：刺五加注射液组（10、20、40μl） ，阴性对照组加相同剂量的生理盐水，阳性对照组加50μg/ml 的 顺铂，终体积为200 μl/孔。培养24 h后加入5μg/μl 的MTT液，继续培养4h，弃上清液，加入DMSO后磁力震荡15min，用酶标仪测定各孔吸光度A值，测定波长λ=570nm，参考波长λ=630nm，计算细胞增殖的抑制率：抑制率（%）=（对照组A值-实验组A值）/对照组A值×100%
1.2.3 细胞形态学观察 取生长状态良好的MCF-7细胞接种于48孔细胞培养板内，培养24h，实验组加入40μl/孔的刺五加注射液，对照组加入生理盐水，培养24h后在倒置显微镜下观察细胞的形态。
1.2.4 统计学分析 数据采用The SAS system 6.12统计软件进行分析。计量数据以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示有统计学意义。
2 结果
2.1 对MCF-7细胞增殖的抑制作用 由表1可知，MCF-7细胞经不同剂量的刺五加注射液作用24h后，细胞增殖抑制率显著增加，显示较明显的细胞毒性反应，且随着药物剂量的增加，抑制率逐渐增强，显示良好的量效关系。与阴性对照组比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。
2.2 细胞形态学变化 刺五加注射液作用MCF-7细胞后，形态学发生了显著变化（见图1）。阴性对照组MCF-7细胞贴壁良好，呈不规则长梭形或多角形，排列无方向性，细胞边缘清晰。实验组细胞经刺五加注射液作用后，细胞多数呈圆形， 胞膜起皱，培养基内悬浮着较多的细胞和碎片。
3 讨论
刺五加注射液为经水醇法提取制成的灭菌制剂，含黄酮、刺五加多糖和刺五加苷等多种有效成分，已广泛应于临床多种疾病的治疗[5]。有研究显示，刺五加注射液对体外培养HeLa细胞、A549细胞的增殖均有较强的抑制作用，并能促进细胞凋亡[6、7]。本试验研究表明，刺五加注射液对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖有较强的抑制作用，10μl/孔、20μl/孔、40μl/孔的刺五加注射液作用细胞24h后，细胞抑制率分别48.18%、60.23%和84.67%，呈现良好的剂量效应关系。说明刺五加注射液对MCF-7细胞的抑制作用在此范围内与其剂量呈正相关，即随着药物剂量的增加，抑制作用明显增强。而刺五加注射液对MCF-7细胞的抑制作用及详细机制还有待于今后深入研究。
参考文献
[1] 董梅，李廷利.刺五加化学成分及药理作用研究进展[J].中医药学报，2011，39（3）：98-100.
[2] 许妍姬.刺五加对痴呆模型小鼠记忆障碍及 MDA 含量、SOD 和乙酰胆碱脂酶活性的影响[J].中国老年学杂志，2010， 9（30）：1238-1240.
[3] 丰俊东，林代华，刘希琴，等.刺五加皂苷对人肝癌细胞株血管内皮生长因子表达的抑制作用[J].中药新药与临床药理，2007，18（5）：339-341.
[4] Yoon TJ，Yoo YC，Lee SW，et al.Anti-metastatic activity of acanthopanax senticosus extract and its possible immunological mechanism of action[J].J Ethnopharmacol，2004，93（2）：247.
[5] 杜秀芳，刘伟娜，詹文红.刺五加注射液的临床应用进展[J].现代中西医结合杂志，2007，16（24）：3603-3604.
[6] 王倩，赵刚.刺五加注射液诱导宫颈癌 HeLa细胞凋亡机理的研究[J].公共卫生与预防医学，2013，24（2）：13-17.
[7] 靳祎，王恩军，朱宝成.刺五加注射液对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用[J].军医进修学院学报，2009，30（5）：729-730.
【关键词】 刺五加注射液；人乳腺癌细胞；MCF-7；增殖作用；抑制作用
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）11-0014-02
刺五加又名五加参，为五加科植物刺五加的根和茎。现代医学研究表明刺五加具有抗肿瘤、抗氧化、抗血栓、提高免疫力等多方面的的作用[1-2]。据报道，刺五加及其提取物对肺癌、胃癌、艾氏腹水癌及白血病等多种肿瘤均有较强抑制作用，还可改善肿瘤化疗患者的免疫状况，提高机体的抗肿瘤功效[3-4]。本试验测定不同剂量的刺五加注射液对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用，为刺五加抗肿瘤作用的研究及今后的临床应用提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料 刺五加注射液（批号：2007111411，黑龙江省完达山制药厂）；顺铂（批号：04080212，齐鲁制药有限公司）；MCF-7细胞（由河北大学生命科学学院提供）；四甲基偶氮唑盐（MTT）、RPMI 1640培养液（美国 Sigma 公司）；0. 25% 胰蛋白酶消化液（美国HyClone公司）。二甲亚砜（DMSO，上海紫一试剂厂）；胎牛血清（中国医学科学院生物工程研究所）。
1.2方法
1.2.1 细胞的培养 MCF-7细胞复苏后，贴壁生长于含10% 胎牛血清，青霉素和链霉素各100U/ml 的RPMI 1640完全培养液中，并置于37℃，5%CO2的培养箱中培养。
1.2.2 刺五加注射液对细胞增殖抑制率的影响 采用MTT法，将MCF-7细胞按照5×104 个/ml的密度接种到96孔培养板中，试验分为以下几组：刺五加注射液组（10、20、40μl） ，阴性对照组加相同剂量的生理盐水，阳性对照组加50μg/ml 的 顺铂，终体积为200 μl/孔。培养24 h后加入5μg/μl 的MTT液，继续培养4h，弃上清液，加入DMSO后磁力震荡15min，用酶标仪测定各孔吸光度A值，测定波长λ=570nm，参考波长λ=630nm，计算细胞增殖的抑制率：抑制率（%）=（对照组A值-实验组A值）/对照组A值×100%
1.2.3 细胞形态学观察 取生长状态良好的MCF-7细胞接种于48孔细胞培养板内，培养24h，实验组加入40μl/孔的刺五加注射液，对照组加入生理盐水，培养24h后在倒置显微镜下观察细胞的形态。
1.2.4 统计学分析 数据采用The SAS system 6.12统计软件进行分析。计量数据以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示有统计学意义。
2 结果
2.1 对MCF-7细胞增殖的抑制作用 由表1可知，MCF-7细胞经不同剂量的刺五加注射液作用24h后，细胞增殖抑制率显著增加，显示较明显的细胞毒性反应，且随着药物剂量的增加，抑制率逐渐增强，显示良好的量效关系。与阴性对照组比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。
2.2 细胞形态学变化 刺五加注射液作用MCF-7细胞后，形态学发生了显著变化（见图1）。阴性对照组MCF-7细胞贴壁良好，呈不规则长梭形或多角形，排列无方向性，细胞边缘清晰。实验组细胞经刺五加注射液作用后，细胞多数呈圆形， 胞膜起皱，培养基内悬浮着较多的细胞和碎片。
3 讨论
刺五加注射液为经水醇法提取制成的灭菌制剂，含黄酮、刺五加多糖和刺五加苷等多种有效成分，已广泛应于临床多种疾病的治疗[5]。有研究显示，刺五加注射液对体外培养HeLa细胞、A549细胞的增殖均有较强的抑制作用，并能促进细胞凋亡[6、7]。本试验研究表明，刺五加注射液对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖有较强的抑制作用，10μl/孔、20μl/孔、40μl/孔的刺五加注射液作用细胞24h后，细胞抑制率分别48.18%、60.23%和84.67%，呈现良好的剂量效应关系。说明刺五加注射液对MCF-7细胞的抑制作用在此范围内与其剂量呈正相关，即随着药物剂量的增加，抑制作用明显增强。而刺五加注射液对MCF-7细胞的抑制作用及详细机制还有待于今后深入研究。
参考文献
[1] 董梅，李廷利.刺五加化学成分及药理作用研究进展[J].中医药学报，2011，39（3）：98-100.
[2] 许妍姬.刺五加对痴呆模型小鼠记忆障碍及 MDA 含量、SOD 和乙酰胆碱脂酶活性的影响[J].中国老年学杂志，2010， 9（30）：1238-1240.
[3] 丰俊东，林代华，刘希琴，等.刺五加皂苷对人肝癌细胞株血管内皮生长因子表达的抑制作用[J].中药新药与临床药理，2007，18（5）：339-341.
[4] Yoon TJ，Yoo YC，Lee SW，et al.Anti-metastatic activity of acanthopanax senticosus extract and its possible immunological mechanism of action[J].J Ethnopharmacol，2004，93（2）：247.
[5] 杜秀芳，刘伟娜，詹文红.刺五加注射液的临床应用进展[J].现代中西医结合杂志，2007，16（24）：3603-3604.
[6] 王倩，赵刚.刺五加注射液诱导宫颈癌 HeLa细胞凋亡机理的研究[J].公共卫生与预防医学，2013，24（2）：13-17.
[7] 靳祎，王恩军，朱宝成.刺五加注射液对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用[J].军医进修学院学报，2009，30（5）：729-730.