五加芪粉对鸡免疫新支流三联灭活疫苗免疫效果的影响

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  摘要[目的]研究五加芪粉对鸡免疫新支流三联灭活疫苗免疫效果的影响。[方法]将五加芪粉与新支流三联灭活疫苗配合使用,探讨五加芪粉对鸡新城疫抗体和禽流感抗体水平以及外周血淋巴细胞增殖情况的影响。[结果]35日龄、42日龄各组鸡体内抗体水平逐渐上升,其中五加芪粉中、高剂量组与疫苗对照组差异达显著或极显著水平;28、35、42日龄,中、高剂量五加芪粉显著或极显著地促进淋巴细胞增殖。[结论]五加芪粉与鸡新支流三联灭活苗联用具有提高鸡非特异性免疫机能及疫苗免疫效果的作用。
  关键词五加芪粉;新支流三联灭活疫苗;免疫效果
  中图分类号S858.31文献标识码A文章编号0517-6611(2016)04-154-03
  Effect of Wujiaqi Powder on Immune Efficacy of Inactivated Vaccine by NDIBAIV in Chicken
  PAN Guizhen, GAO Yanyan, LI Zhaobin et al(Luoyang Huizhong Animal Medicine Co., Ltd, National Research Center for Veterinary Medicine, Luoyang, Henan 471003)
  Abstract[Objective] To explore the effect of Wujiaqi powder on immune efficacy of inactivated vaccine by NDIBAIV in chicken. [Method] By the combination use of Wujiaqi powder and new tributary inactivated vaccine, effects of Wujiaqi powder on newcastle disease antibody and avian influenza antibody level were studied, as well as peripheral blood lymphocyte proliferation. [Result] On 35 and 42 days, the groups which applied low and medium dosage Wujiaqi Powder could significantly improve the immune efficacy of newcastle disease and avian influenza. On 28, 35 ,42 days, the results showed that Wujiaqi Powder was able to stimulate proliferation of peripheral splenic lymphocytes. [Conclusion] Combination of Wujiaqi powder and new tributary inactivated vaccine could signicantly improve the immune efficacy of vaccine.
  Key wordsWujiaqi powder; NDIBAI tributary inactivated vaccine; Immune effect
  养鸡在我国畜禽养殖业中占很大比例,而禽病始终制约着我国养殖业的发展。新城疫和禽流感以其发病急、死亡率高而成为我国养鸡业危害最大、经济损失最重的禽病之一,并被国际兽疫局(OIE)列为A类疫病[1]。我国目前主要采取预防接种来减少该病的发病率,但在实际生产中经常由于气温、环境应激、药物和病原等多种因素的干扰,造成免疫状态低下,致使机体对外源性刺激应答不力,导致疫苗免疫效果不理想[2-3]。黄芪和刺五加具有很好的免疫调节作用,常被用于解除动物免疫抑制状态。杨一清等[4]报道黄芪刺五加合剂对免疫抑制小鼠免疫功能具有上调作用,而刺五加和黄芪具有一定的协同作用。张翠[5]报道黄芪和刺五加配伍组方后配合新城疫疫苗使用可以提高鸡新城疫病毒抗体水平,促进雏鸡淋巴细胞增殖,在一定程度上降低鸡发病率和死亡率。五加芪粉是洛阳惠中兽药有限公司、普莱柯生物工程股份有限公和河南新正好生物工程有限公司共同研制开发的中药免疫增强剂,由黄芪和刺五加经提取、浓缩、喷雾干燥制成。笔者将五加芪粉与新支流三联灭活疫苗配合应用,以探讨五加芪粉对鸡免疫新支流三联灭活疫苗免疫效果的影响。
  1材料与方法
  1.1材料
  1.1.1试验动物 。1日龄健康海兰褐公雏250只,购自洛阳现代禽业有限公司。
  1.1.2药品。五加芪粉(每50 g相当于165 g原生药),批号20120203,由洛阳惠中兽药有限公司生产;紫锥菊末(每100 g相当于100 g原生药),批号1210002,由齐鲁动物保健品有限公司生产;鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗(LaSota株+M41株+H9亚型HL株),批号120901,由普莱柯生物工程股份有限公司生产。
  1.1.3主要试剂。新城疫病毒血凝抑制试验抗原,批号201206,购自中国兽医药品监察所;鸡新城疫病毒血凝抑制试验(HI)阳性血清,批号201201,购自中国兽医药品监察所;禽流感H9亚型血凝抑制试验抗原,批号201101,购自哈尔滨维科生物技术开发公司;禽流感H9亞型阳性血清,批号201101,购自哈尔滨维科生物技术开发公司;鸡外周血淋巴细胞分离液,批号20121019,购自天津市灏阳生物制品科技有限公司;四甲基偶氮唑盐(MTT),批号MKBH7489V,购自Sigma公司;胎牛血清,批号NSF0051,购自海克隆生物化学制品(北京)有限公司;伴刀豆球蛋白A(ConA),批号SLBB8237V,购自Sigma公司;青霉素,160万IU/瓶,批号X1105414,购自华北制药股份有限公司;链霉素,100万IU/瓶,批号1106106,购自华北制药股份有限公司。   1.1.4仪器与设备。YXQLS100A型全自动立式电热压力蒸汽灭菌器,为上海博迅实业有限公司医疗设备厂产品;CO2培养箱,为美国Thermo公司产品;37XB型生物显微镜,为上海光学仪器六厂产品;TGL16G型台式高速离心机,为江苏金坛市科兴仪器厂产品;Sunrise型酶标仪,为瑞士Teacan公司产品;Nu425400S型生物安全柜,为美国Nuaire公司产品;一次性96孔细胞培养板,为德国Nunclon公司产品。
  1.2方法
  1.2.1试验设计与分组。雏鸡饲养至14日龄,测定雏鸡的新城疫抗体效价为(2.8±0.87)log2,从中选择体重相近的180只,随机分为6个组,每组30只,分别为五加芪粉低剂量组、五加芪粉中剂量组、五加芪粉高剂量组、紫锥菊末对照组、疫苗对照组和空白对照组。除空白对照组外,其他组于21日龄用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+H9亚型HL株)颈背部皮下注射进行免疫,剂量0.3 mL/羽。各试验组的给药剂量及处理方法见表1。
  1.2.2测定项目与方法。
  1.2.2.1新城疫、禽流感(H9)抗体水平的测定。分别于21、28、35、42、49日龄,各组随机选取10只鸡,每只鸡采血1 mL,分离血清,参照GB/T165502008中的血凝抑制法测定新城疫抗体效价和GB/T189362003中的血凝抑制法测定禽流感(H9)抗体效价,监测抗体水平的动态变化。
  1.2.2.2外周血淋巴细胞增殖功能的测定。分别于21、28、35、42、49日龄,各组随机选取10只鸡,用加有肝素钠溶液的注射器颈静脉采血1.0 mL,采用MTT法[6]测定外周血淋巴细胞增殖功能。
  1.3数据处理试验数据使用SPSS 11.5统计软件进行统计与分析,结果均以平均值()±标准差(SD)表示。P<0.05表示差异显著,P<0.01表示差异极显著。
  2结果与分析
  2.1五加芪粉对鸡新城疫抗体水平的影响由表2可知,21日龄和28日龄(免疫后1周)新城疫抗体水平均较低;35日龄(免疫后2周)、42日龄(免疫后3周)各组抗体水平逐渐上升,其中35日龄五加芪粉高、中剂量组极显著高于疫苗对照组(P≤0.01),中剂量组显著高于紫锥菊末对照组(0.01  疫苗对照组相比抗体产生速度快。
  2.2五加芪粉对禽流感(H9)抗体水平的影响由表3可知,各组鸡群在21日龄与28日龄(免疫后1周),试验各组禽流感(H9)抗体(母源抗体)均处于一个较低的水平。35日龄(免疫后2周)、42日龄(免疫后3周),各组抗体水平逐渐上升,其中五加芪粉中剂量组与疫苗对照组相比差异显著(P<0.05),高剂量组差异极显著(P<0.01);紫锥菊末对照组在35日龄(免疫后2周)抗体水平显著高于疫苗对照组(P<0.05),但在42日齡(免疫后3周)差异不显著;在49日龄(免疫后4周),五加芪粉各剂量组和紫锥菊末对照组抗体水平趋于稳定,疫苗对照组抗体水平持续升高,达到峰值,此时各给药组之间无明显差异。总体来看,五加芪粉各剂量组在免疫后3周达到峰值,而疫苗对照组在免疫后4周才能达到峰值。这表明五加芪粉中、高剂量组及紫锥菊末对照组与疫苗联用后,可以促进禽流感(H9)抗体的产生,使鸡群抗体水平提前达到峰值。
  2.3外周血淋巴细胞的增殖功能由表4可知,21日龄各组鸡群的淋巴细胞的吸光度值基本相当,各组之间无显著差异;在28、35、42日龄,各用药组鸡群淋巴细胞的吸光度值与疫苗对照组和空白对照组相比,均有明显提高;五加芪粉低剂量组在28日龄鸡群淋巴细胞的吸光度值显著高于空白对照组(P<0.05),42日龄显著高于疫苗对照组和空白对照组(P<0.05),但在49日龄与疫苗对照组和空白对照组无显著差异;五加芪粉高、中剂量组均极显著高于疫苗对照组和空白对照组(P<0.01),尤其是五加芪粉高剂量组在用药后第4周(49日龄)与五加芪粉相比显著提高(P<0.05),而五加芪粉中剂量组在49日龄与疫苗对照组和空白对照组相比无显著差异(P>0.05);紫锥菊末对照组用药后,在28、35、42日龄,鸡群淋巴细胞的吸光度值与疫苗对照组和空白对照组相比均有显著提高(P<0.05),而与五加芪粉各剂量组相比在整个试验期内均无明显差异(P>0.05)。这表明高、中剂量的五加芪粉与紫锥菊末可以提高鸡群外周血淋巴细胞增殖能力,具有增强细胞免疫功能的作用。
  3讨论与结论
  抗体水平反映了鸡免疫疫苗后特异性体液免疫反应的程度[7]。在免疫后6~10 d血液中产生抗体,因此选择免疫后7 d开始进行检测。该试验中五加芪粉与新支流三联灭活苗联用,鸡群新城疫和禽流感(H9)抗体产生速度较快,与空白对照组相比能提前达到峰值,说明五加芪粉具有促进疫苗提早产生抗体的功能。五加芪粉的主要成分为多糖。胡庭俊等[8]报道黄芪多糖可以显著升高鸡新城疫疫苗免疫后血清特异性抗体水平。张翠[5]报道内服芪五加可溶性粉有较好的增强免疫功能作用,可以提高鸡新城疫病毒抗体水平,促进雏鸡淋巴细胞增殖,与该试验结果相一致。
  安徽农业科学2016年淋巴细胞增殖是反映机体细胞免疫功能特性的重要指标[9]。通常情况下,当淋巴细胞受到相应抗原物质的刺激后能发生分裂增殖,并产生相应的免疫应答,产生针对相关抗原的抗体或淋巴因子。因此,淋巴细胞是动物机体最重要的免疫效应细胞。管远红等[10]研究表明黄芪多糖经脂多糖协同作用对脾脏B淋巴细胞的增殖作用显著增强,并且协同作用在低浓度下也表现得比较明显。该试验在鸡日粮中添加五加芪粉后4周内鸡群淋巴细胞的增殖功能显著提高,说明五加芪粉具有刺激机体细胞免疫功能的作用。   机体的免疫状态可以由体液免疫和细胞免疫的状态来反映。综上所述,五加芪粉与鸡新支流三联灭活苗联用,剂量0.2~0.4 g/L,连续使用7 d,具有提高鸡非特异性免疫机能及疫苗免疫效果的作用。
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