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【摘 要】目的：探讨冠心病心力衰竭患者血清血管内皮生长因子（VEGF）和III型前胶原氨基末端肽（PⅢNP）浓度的变化及意义。方法：采用酶联免疫吸附法检测60例冠心病心力衰竭患者血清VEGF和PⅢNP水平，并与20例健康体检者对照。结果：冠心病心力衰竭患者血清VEGF和PⅢNP水平较健康对照组水平明显升高，有显著差异（P﹤0.01）；不同心功能亚组间VEGF和PⅢNP水平亦有统计学差异。结论：VEGF和PⅢNP水平是反映冠心病心衰患者心功能程度有价值的检测指标，VEGF和PⅢNP参与了冠心病心力衰竭的病理生理过程。
【关键词】血管内皮生长因子（VEGF） Ⅲ型前胶原氨基末端肽（PⅢNP） 酶联免疫吸附法 冠心病心力衰竭
【中图分类号】R541 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）03-01269-02
心力衰竭（心衰）是一种复杂的临床症状群，为各种心脏病的严重阶段，其发病率高。随着年龄增高，心衰的患病率显著上升。冠心病心肌缺血和（或）心肌梗死是引起心力衰竭的最常见的原因。血管内皮生长因子（VEGF）是近年发现的特异性促血管生成因子，具有促进内皮细胞增殖分裂、改善内皮细胞功能等作用。大量研究证实， VEGF可促进心肌侧枝循环的建立，增加心肌血供，改善心肌缺血。但VEGF和PⅢNP在冠心病心力衰竭中的相关性国内报道甚少。本研究通过检测充血性心力衰竭患者血清VEGF和PⅢNP的浓度，探讨它们在冠心病心力衰竭病程中的相关性及临床意义。
1 对象与方法
1.1 对象 2007年9月至2008年3月我院住院冠心病心力衰竭患者60例（男32例，女28例），年龄47-75岁，平均（56±8）岁，按NYHA心功能分级， II级12例，III级28例， IV级20例。对照组20 （男11，女9）例，年龄49～78岁，平均（63±7）岁，均为门诊查体健康人员。两组在年龄、性别构成上无显著性差异。经详细询问病史，所有对象均排除感染、肿瘤、结缔组织疾病、糖尿病、自身免疫病史及严重的肝肾疾病。
1.2 检测方法
患者于入院即日晨空腹采集静脉血5ml， 离心（3000r/min）15分钟，分离血清后，存于EP管密封后，置-20℃冰箱中储存备测。健康组于清晨空腹采血。VEGF与PⅢNP的检测采用酶联免疫吸附（ELISA）法进行测定，选用武汉博士德生物工程有限公司提供的试剂盒，同批测定，由专人严格按试剂盒说明操作流程进行测定。在450nm用X960酶标仪读取吸光度，通过绘制标准曲线求出标本中VEGF与PⅢNP的浓度。
1.3 数据处理
应用SPSS13.0统计软件包进行统计学处理， 数据以均数±标准差表示，两组间检验采用t检验，多组间比较用方差分析，以P﹤0.05为差别有统计学意义.
2 结果
各组血清VEGF、PⅢNP水平检测结果，见表1。冠心病心力衰竭组与对照组的VEGF、PⅢNP水平均有明显统计学差异（p<0.01）；不同心功能亚组间VEGF、PⅢNP水平亦有统计学差异，且数据表明随心功能不全的加重VEGF、PⅢNP水平有逐渐增高趋势。
表 1 各组血清VEGF、PⅢNP水平检测结果
组别 例数 VEGF（pg/ml） PⅢNP（ug/ml）
正常组
心功II级组
心功III级组
心功IV级组 20
12
28
20 29.02±4.07
61.08±7.55△
127.6±13.51△*
170.5±19.73△★ 25.10±3.03
50.72±6.56△
81.71±6.92△*
101.92±8.50△★
△p<0.01与对照组，*p<0.01与心功II级组， ★p<0.01与心功III级组.
3 讨论
VEGF是目前已知的作用最强的促血管生成因子之一，研究结果已表明VEGF可以促进损伤后心肌组织的修复和侧枝血管的形成[1]。PⅢNP是Ⅲ型前胶原在细胞外形成原胶原前被相关酶切下而进入血液循环的氨基酸尾肽，它与Ⅲ型前胶原成等分子比例，测定PⅢNP水平可以了解组织胶原合成状态[2]。
本研究结果表明心力衰竭患者血清VEGF，PⅢNP的浓度明显高于对照组，且随心衰程度的加重它们的浓度亦随之增加，各组间存在统计学差异。显示了VEGF、PⅢNP的表达似乎与心衰及其程度关系密切。
冠心病心力衰竭时VEGF、PⅢNP浓度增高且与心衰程度呈正相关，分析其原因可能为：（1）缺血缺氧诱导VEGF产生。刺激VEGF分泌的因素主要有缺血、缺氧、炎症细胞因子等，其中最主要的是缺血、缺氧[3]。随着缺氧时间延长，心肌产生的VEGF增加，缺血时间与VEGF产生量呈正比。动物实验也证实，心肌缺血、缺氧时， VEGF及其受体表达成倍增加。心力衰竭患者往往存在心肌供血不足，影响心肌本身能量代谢而影响心功能，组织的缺血、缺氧诱导VEGF生成增加。（2） 不少学者发现血小板在VEGF的产生及调节中起重要作用[4]，血小板的聚集是所有心血管疾病的基本特点，离体实验结果显示聚集的血小板可以分泌释放包括VEGF在内的多种血管活性物质。 由于心衰患者的血液处于高凝状态，血小板聚集，由此活化的血小板释放大量的VEGF参与心衰的病理生理变化过程。（3）VEGF可以增加金属蛋白酶和间质性胶原酶的表达，而金属蛋白酶能引起胶原降解，其负责降解Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原[5]。PⅢNP是Ⅲ型前胶原在细胞外形成膠原前被金属蛋白酶切下而进入血液循环的氨基端尾肽，提示VEGF可能通过金属蛋白酶所致的胶原降解参与其中过程，降解Ⅲ型胶原，使PⅢNP增高。它们相互作用参与心室的重构，从而导致心肌纤维化引起心功能改变，在心衰的发病机制中发挥着重要作用。 综合本研究结果认为，VEGF与PⅢNP参与了冠心病心力衰竭的病理生理过程。在心力衰竭时，由于其促进心室重构，最终使心力衰竭逐渐加重。但本研究仅仅提示了心力衰竭与VEGF、PⅢNP表达呈正相关性，以上也是分析的一种可能。它们在心脏、血管调节中的生理及病理生理機制还未被阐明，但随着研究的进一步深入，相信它们将会有助于揭示心力衰竭更全面的病理生理机制，并提供新的预防及治疗手段。
参考文献：
[1] Yoshida J，ohmori K，Takeuchi H，et al.Treatment of ischemic limbs based on local recruiment of vascular endothelial growth factor producing inflammatory cells with ultrasonic microbubble destruction [J]. J Am Coll Cardiol.2005，46（5）：899-905
[2] Li G， Yan QB， WeiLM， et al. Serum concentrations of hyaluronic acid， procollagen type Ⅲ NH2-terminal peptide， and laminin in patients with chronic congestive heart failure.Chin Med Sci J.2006，21（3）：175-8.
[3] Breen EC. VEGF in biological control[J]. J Cell Biochem. 2007，102（6）：1358-67.
[4] Gerrah R， Fogel M， Gilon D. Aspirin decreases vascular endothelial growth factor release during myocardial ischemia. Int J Cardiol.2004，94（1）：25-9
[5] Gallagher GL， Jackson CJ， Hunyor SN. Myocardial extracellular matrix remodeling in ischemic heart failure. Front Biosci. 2007，12：1410-9.
【关键词】血管内皮生长因子（VEGF） Ⅲ型前胶原氨基末端肽（PⅢNP） 酶联免疫吸附法 冠心病心力衰竭
【中图分类号】R541 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）03-01269-02
心力衰竭（心衰）是一种复杂的临床症状群，为各种心脏病的严重阶段，其发病率高。随着年龄增高，心衰的患病率显著上升。冠心病心肌缺血和（或）心肌梗死是引起心力衰竭的最常见的原因。血管内皮生长因子（VEGF）是近年发现的特异性促血管生成因子，具有促进内皮细胞增殖分裂、改善内皮细胞功能等作用。大量研究证实， VEGF可促进心肌侧枝循环的建立，增加心肌血供，改善心肌缺血。但VEGF和PⅢNP在冠心病心力衰竭中的相关性国内报道甚少。本研究通过检测充血性心力衰竭患者血清VEGF和PⅢNP的浓度，探讨它们在冠心病心力衰竭病程中的相关性及临床意义。
1 对象与方法
1.1 对象 2007年9月至2008年3月我院住院冠心病心力衰竭患者60例（男32例，女28例），年龄47-75岁，平均（56±8）岁，按NYHA心功能分级， II级12例，III级28例， IV级20例。对照组20 （男11，女9）例，年龄49～78岁，平均（63±7）岁，均为门诊查体健康人员。两组在年龄、性别构成上无显著性差异。经详细询问病史，所有对象均排除感染、肿瘤、结缔组织疾病、糖尿病、自身免疫病史及严重的肝肾疾病。
1.2 检测方法
患者于入院即日晨空腹采集静脉血5ml， 离心（3000r/min）15分钟，分离血清后，存于EP管密封后，置-20℃冰箱中储存备测。健康组于清晨空腹采血。VEGF与PⅢNP的检测采用酶联免疫吸附（ELISA）法进行测定，选用武汉博士德生物工程有限公司提供的试剂盒，同批测定，由专人严格按试剂盒说明操作流程进行测定。在450nm用X960酶标仪读取吸光度，通过绘制标准曲线求出标本中VEGF与PⅢNP的浓度。
1.3 数据处理
应用SPSS13.0统计软件包进行统计学处理， 数据以均数±标准差表示，两组间检验采用t检验，多组间比较用方差分析，以P﹤0.05为差别有统计学意义.
2 结果
各组血清VEGF、PⅢNP水平检测结果，见表1。冠心病心力衰竭组与对照组的VEGF、PⅢNP水平均有明显统计学差异（p<0.01）；不同心功能亚组间VEGF、PⅢNP水平亦有统计学差异，且数据表明随心功能不全的加重VEGF、PⅢNP水平有逐渐增高趋势。
表 1 各组血清VEGF、PⅢNP水平检测结果
组别 例数 VEGF（pg/ml） PⅢNP（ug/ml）
正常组
心功II级组
心功III级组
心功IV级组 20
12
28
20 29.02±4.07
61.08±7.55△
127.6±13.51△*
170.5±19.73△★ 25.10±3.03
50.72±6.56△
81.71±6.92△*
101.92±8.50△★
△p<0.01与对照组，*p<0.01与心功II级组， ★p<0.01与心功III级组.
3 讨论
VEGF是目前已知的作用最强的促血管生成因子之一，研究结果已表明VEGF可以促进损伤后心肌组织的修复和侧枝血管的形成[1]。PⅢNP是Ⅲ型前胶原在细胞外形成原胶原前被相关酶切下而进入血液循环的氨基酸尾肽，它与Ⅲ型前胶原成等分子比例，测定PⅢNP水平可以了解组织胶原合成状态[2]。
本研究结果表明心力衰竭患者血清VEGF，PⅢNP的浓度明显高于对照组，且随心衰程度的加重它们的浓度亦随之增加，各组间存在统计学差异。显示了VEGF、PⅢNP的表达似乎与心衰及其程度关系密切。
冠心病心力衰竭时VEGF、PⅢNP浓度增高且与心衰程度呈正相关，分析其原因可能为：（1）缺血缺氧诱导VEGF产生。刺激VEGF分泌的因素主要有缺血、缺氧、炎症细胞因子等，其中最主要的是缺血、缺氧[3]。随着缺氧时间延长，心肌产生的VEGF增加，缺血时间与VEGF产生量呈正比。动物实验也证实，心肌缺血、缺氧时， VEGF及其受体表达成倍增加。心力衰竭患者往往存在心肌供血不足，影响心肌本身能量代谢而影响心功能，组织的缺血、缺氧诱导VEGF生成增加。（2） 不少学者发现血小板在VEGF的产生及调节中起重要作用[4]，血小板的聚集是所有心血管疾病的基本特点，离体实验结果显示聚集的血小板可以分泌释放包括VEGF在内的多种血管活性物质。 由于心衰患者的血液处于高凝状态，血小板聚集，由此活化的血小板释放大量的VEGF参与心衰的病理生理变化过程。（3）VEGF可以增加金属蛋白酶和间质性胶原酶的表达，而金属蛋白酶能引起胶原降解，其负责降解Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原[5]。PⅢNP是Ⅲ型前胶原在细胞外形成膠原前被金属蛋白酶切下而进入血液循环的氨基端尾肽，提示VEGF可能通过金属蛋白酶所致的胶原降解参与其中过程，降解Ⅲ型胶原，使PⅢNP增高。它们相互作用参与心室的重构，从而导致心肌纤维化引起心功能改变，在心衰的发病机制中发挥着重要作用。 综合本研究结果认为，VEGF与PⅢNP参与了冠心病心力衰竭的病理生理过程。在心力衰竭时，由于其促进心室重构，最终使心力衰竭逐渐加重。但本研究仅仅提示了心力衰竭与VEGF、PⅢNP表达呈正相关性，以上也是分析的一种可能。它们在心脏、血管调节中的生理及病理生理機制还未被阐明，但随着研究的进一步深入，相信它们将会有助于揭示心力衰竭更全面的病理生理机制，并提供新的预防及治疗手段。
参考文献：
[1] Yoshida J，ohmori K，Takeuchi H，et al.Treatment of ischemic limbs based on local recruiment of vascular endothelial growth factor producing inflammatory cells with ultrasonic microbubble destruction [J]. J Am Coll Cardiol.2005，46（5）：899-905
[2] Li G， Yan QB， WeiLM， et al. Serum concentrations of hyaluronic acid， procollagen type Ⅲ NH2-terminal peptide， and laminin in patients with chronic congestive heart failure.Chin Med Sci J.2006，21（3）：175-8.
[3] Breen EC. VEGF in biological control[J]. J Cell Biochem. 2007，102（6）：1358-67.
[4] Gerrah R， Fogel M， Gilon D. Aspirin decreases vascular endothelial growth factor release during myocardial ischemia. Int J Cardiol.2004，94（1）：25-9
[5] Gallagher GL， Jackson CJ， Hunyor SN. Myocardial extracellular matrix remodeling in ischemic heart failure. Front Biosci. 2007，12：1410-9.