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【摘要】 目的： 研究妊娠期糖尿病患者和正常孕妇的内脏脂肪素、脂联素在不同孕周的血清及新生儿脐血清中的表达。方法：2013年1月-7月在青岛市立医院产科产检的孕妇中，选取妊娠期糖尿病孕妇62例为试验组，正常孕妇68例为对照组。用ELISA方法检测31～33周孕妇血清，37～41周孕妇血清，足月新生儿脐血血清脂联素（adiponectin）、内脂素（visfatin）的含量。结果：随着妊娠的进展，血清脂联素水平呈逐渐下降，内脂素水平逐渐上升，三个采血时间段比较差异均有统计学意义（P<0.001）。妊娠期糖尿病患者血清脂联素水平在中孕及晚孕均低于正常妊娠组，而血清内脂素水平在中孕及晚孕均高于正常妊娠组，两组比较差异均有统计学意义（P<0.001）。新生儿脐血脂联素、内脂素水平显著高于母血，比较差异均有统计学意义（P<0.001）。结论：可考虑应用血清脂联素水平与内脂素水平对妊娠期糖尿病进行预测及评估，并作为指导GDM的治疗的新的理论。
【关键词】 内脏脂肪素； 脂联素； GDM； 新生儿脐血
脂肪组织能供应能量、调节体温、填充固定、绝缘减震、贮存中性脂肪等，同时脂肪组织还是个内分泌器官，其代谢活跃、功能非常复杂，可分泌多种脂肪因子（adipocytokines），这些因子同样地影响和调节机体的能量代谢及各种功能[1]。已有研究证明脂联素（adiponectin）、内脂素（visfatin）在多种代谢综合征中发挥重要作用，GDM作为一种特殊的糖尿病类型应该同样存在脂肪细胞因子的表达紊乱，对此进行系统的研究有利于阐明脂肪组织功能紊乱与GDM发病的关系，为其预防与治疗提供理论依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2013年1-7月在青岛市立医院产科产检的孕妇中，选取妊娠期糖尿病孕妇62例为试验组，正常孕妇68例为对照组。妊娠期糖尿病参照IADPSG2010诊断方法及标准，在妊娠24～28周首先检查FPG[2]。FPG≥5.1 mmol/L，可诊断。4.4 mmol/L≤FPG<5.1 mmol/L，则行OGTT，空腹、口服75 g糖1、2 h静脉血糖值分别为5.1、10.0、8.5 mmol/L，如血糖有1项达到或超过正常值可诊断为GDM，3项均正常为NGT。试验组及对照组无妊娠期高血压、冠心病，肝肾功能损害、感染等合并症，并且在年龄、体质指数、采血孕周等一般资料差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 标本采集 31～33周及分娩前采取空腹肘静脉血，孕妇采血前3 d正常饮食与作息，每日碳水化合物摄入量在150 g以上。采血前一晚要求禁食12 h，晨起8点抽取空腹静脉血，静置2 h使充分凝固，以1000 r/min离心10 min，取上清（血清）分装，-70 ℃冰箱保存备用。胎儿娩出断脐后立即采脐静脉血，静置2 h使充分凝固，以1000 r/min离心10 min，取上清（血清）分装，-80 ℃冰箱保存备用。但应避免反复冻融，-80 ℃不应超过1个月，标本溶血会影响结果，因此溶血标本不应进行此项检测。所有血样统一编号保存，各项指标均统一标准。
1.3 试验方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定母血和脐血血清内脂素水平，内脂素试剂盒购自美国R&D公司，批内差异<5%。试验开始前，各试剂均平衡至室温，严格按照说明书将标准品倍比稀释。分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔内加样品稀释液100 μL，其他孔分别加标准品或待测样品100 μL，注意将样品加于酶标板底部，不触及孔壁，轻摇动混匀，避免气泡，用酶标板覆膜，37 ℃温育2 h。弃去液体，甩干，每孔加临用前配制的检测溶液A工作液100 μL（生物素化抗体溶液），酶标板覆膜，37 ℃温育1 h。弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2 min，甩干。每孔加临用前配制的检测溶液B工作液100 μL（HRP酶结合物溶液），酶标板覆膜，37 ℃温育1 h。弃去孔内液体，甩干，洗板5次。每孔加底物溶液90 μL，酶标板覆膜，37 ℃避光显色，当标准孔的前3～4孔有明显的梯度蓝色，后3～4孔梯度不明显时终止。以与底物液的加入顺序相同的顺序加终止液50 μL终止反应，蓝色立转黄色。提前设定好酶标仪（美国BIO-RAD iMark型全自动酶标仪），在450 nm波长测量，直接读出检测样本的浓度值。
人脂联素酶联免疫吸附试验试剂盒试验原理：采用双抗体夹心ELISA法。用抗人脂联素抗体包被于酶标板上，试验时标本或标准品中的脂联素会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人脂联素抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人脂联素抗体与结合在包被抗体上的人脂联素结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物（TMB），TMB在辣根过氧化物酶的催化下显蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450 nm波长下测定OD值，脂联素浓度与OD450值之间成正比，通过绘制标准曲线求出标本中的脂联素浓度。试验室是用的美国BIO-RAD iMark型全自动酶标仪，试验步骤同上。
1.4 统计学处理
两组血清脂联素浓度水平随着妊娠的进展均呈下降趋势，且对照组血清脂联素水平在中孕及晚孕均高于试验组，两组比较差异均有统计学意义（P<0.001）。两组脐血脂联素水平高于母血，且对照组高于试验组，两组比较差异有统计学意义（P<0.001）。三个采血时段脂联素浓度差异比较差异均有统计学意义（P<0.001）。见表2。
3 讨论
近年来，GDM发病率不断提高，GDM发生率占妊娠的1.0%～14.0%，WHO预测糖尿病的发病率在发展中国家将逐渐增加，GDM与多种母儿并发症密切相关，GDM对母婴的危害极大，易导致血管病变，而发生胎儿宫内窘迫，巨大儿，子痫，胎盘早剥，早产等并发症[3-4]。而GDM早期诊断与治疗尤其重要，人们对他研究了多年，但迄今为止GDM的发病机制尚不清，有学者提出，GDM可能是多种因素起作用而引起的一种疾病，研究脂肪因子，可进一步探讨GDM的发病机制[5]。脂联素与内脂素是近年研究较多的脂肪因子，有学者提出将脂联素（adiponectin）作为GDM的发病风险及疾病严重程度的预测指标。也有学者认为血清内脂素visfatin水平的监测有助于GDM的早期诊断及病情的监控，一般人群脂联素的血浆浓度0.5～30 μg/mL[6]。已有研究显示随妊娠进展，血清脂联素水平呈明显下降趋势[7]。另有报道GDM患者血清脂联素早孕时含量己低于正常孕妇，且血清脂联素含量每降低1%，发生妊娠期糖尿病的概率增加20%[8]。因此有学者认为血清脂联素可作为GDM发病的独立预测因子，用来排除GDM低危人群[9]。另外，妊娠期糖尿病患者与正常妊娠相比内脂素水平上升还是下降目前尚有争议[10-15]。本文研究显示血清脂联素随着妊娠的进展，呈下降趋势；内脂素水平呈上升趋势。妊娠期糖尿病患者血清脂联素水平各时期均低于正常妊娠组，内脂素均高于正常妊娠组。妊娠早期脂联素水平高于妊娠晚期，内脂素水平妊娠晚期却升高，这些可以作为妊娠期糖尿病的预测因子，及早干预。因而血清脂联素水平与内脂素水平，对妊娠期糖尿病的筛查、预测及评估预后有重要意义，这将为GDM的诊断、治疗提供新的理论依据。 参考文献
[1] Wozniak S E， Gee L L， Wachtel M S， et al. Adipose tissue：the new endocrine organ-A review article[J].Did Dis Sci， 2009， 54（5）： 1847-1856.
[2] International Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups Consensus Panel. International association of diabetes and pregnancy study groups recommendations on the diagnosis and classification of hyperglycemia in pregnancy[J]. Diabetes Care， 2010，33（4）： 676-682.
[3] Zera C A， Seely E W. Diabetes： Treatment of gestational diabetes reduces obstetric morbidity[J]. Nat Rev Endocrinol， 2010， 6（2）： 69-70.
[4]魏玉梅，杨慧霞.妊娠期糖尿病诊断标准变迁[J]. 中国实用妇科与产科杂志，2013，29（4）：298.
[5]马瑶，程琐，程海东，等.脂肪因子与妊娠期糖尿病胰岛素抵抗的相关性研究[J].中国优生与遗传杂志，2010，15（5）：50-52.
[6]魏文清.脂联素的研究现状与展望[J].标记免疫分析与临床，2007，14（2）：122-125.
[7] Mazaki T S， Kanety H， Pariente C， et al. Maternal serum adiponectin levels during human pregnancy[J]. Jouma] of Perinatology， 2007， 27（2）： 77-81.
[8] Ranheim T， Haugen F， Staff A C， et al. Adiponectin is reduced in gestational diabetes mellitus in normal weight women[J]. Acta Obstet Gynecol Scand， 2004， 83（4）： 341.
[9] Weerakiet S，Lertnarkom K， Panburana P，et al. Can adiponectin predict gestational diabetes[J]. Gynecol Endocrinol， 2006， 22（7）： 362-368.
[10] Chan T F， Chen Y L， Lee C H et al. Decreased plasma visfatin concentrations in women with gestational diabetes mellitus[J]. J Soc Gynecol Investig， 2006，13（2）： 364-367.
[11] Telejko B， Kuzmicki M， Zonenberg A， et al. Visfatin in gestational diabetes： serum level and mRNA expression in fat and placental tissue[J]. Diabetes Res Clin Pract， 2009， 84（10）：68-75.
[12] Lewandowski K C， Stojanovic N， Press M， et al. Elevated serum levels of visfatin in gestational diabetes： a comparative study across various degrees of glucose tolerance[J]. Diabetologia， 2007， 50（5）：1033-1037.
[13] Akturk M， Altinova A E， Mert I， et al. Visfatin concentration is decreased in women with gestational diabetes mellitus in the third trimester[J]. J Endocrinol Invest， 2008， 31（3）：610-613.
[14] Krzyzanowska K， Krugluger W， Mittermayer F， et al. Increased visfatin concentrations in women with gestational diabetes mellitus[J]. Clin Sci， 2006， 110（8）：605-609.
[15] Haider D G， Handisurya A， Storka A， et al. Visfatin response to glucose is reduced in women with gestational diabetes mellitus[J]. Diabetes Care， 2007， 30（6）：1889-1891.
（收稿日期：2014-01-21） （本文编辑：黄新珍）
【关键词】 内脏脂肪素； 脂联素； GDM； 新生儿脐血
脂肪组织能供应能量、调节体温、填充固定、绝缘减震、贮存中性脂肪等，同时脂肪组织还是个内分泌器官，其代谢活跃、功能非常复杂，可分泌多种脂肪因子（adipocytokines），这些因子同样地影响和调节机体的能量代谢及各种功能[1]。已有研究证明脂联素（adiponectin）、内脂素（visfatin）在多种代谢综合征中发挥重要作用，GDM作为一种特殊的糖尿病类型应该同样存在脂肪细胞因子的表达紊乱，对此进行系统的研究有利于阐明脂肪组织功能紊乱与GDM发病的关系，为其预防与治疗提供理论依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2013年1-7月在青岛市立医院产科产检的孕妇中，选取妊娠期糖尿病孕妇62例为试验组，正常孕妇68例为对照组。妊娠期糖尿病参照IADPSG2010诊断方法及标准，在妊娠24～28周首先检查FPG[2]。FPG≥5.1 mmol/L，可诊断。4.4 mmol/L≤FPG<5.1 mmol/L，则行OGTT，空腹、口服75 g糖1、2 h静脉血糖值分别为5.1、10.0、8.5 mmol/L，如血糖有1项达到或超过正常值可诊断为GDM，3项均正常为NGT。试验组及对照组无妊娠期高血压、冠心病，肝肾功能损害、感染等合并症，并且在年龄、体质指数、采血孕周等一般资料差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 标本采集 31～33周及分娩前采取空腹肘静脉血，孕妇采血前3 d正常饮食与作息，每日碳水化合物摄入量在150 g以上。采血前一晚要求禁食12 h，晨起8点抽取空腹静脉血，静置2 h使充分凝固，以1000 r/min离心10 min，取上清（血清）分装，-70 ℃冰箱保存备用。胎儿娩出断脐后立即采脐静脉血，静置2 h使充分凝固，以1000 r/min离心10 min，取上清（血清）分装，-80 ℃冰箱保存备用。但应避免反复冻融，-80 ℃不应超过1个月，标本溶血会影响结果，因此溶血标本不应进行此项检测。所有血样统一编号保存，各项指标均统一标准。
1.3 试验方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定母血和脐血血清内脂素水平，内脂素试剂盒购自美国R&D公司，批内差异<5%。试验开始前，各试剂均平衡至室温，严格按照说明书将标准品倍比稀释。分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔内加样品稀释液100 μL，其他孔分别加标准品或待测样品100 μL，注意将样品加于酶标板底部，不触及孔壁，轻摇动混匀，避免气泡，用酶标板覆膜，37 ℃温育2 h。弃去液体，甩干，每孔加临用前配制的检测溶液A工作液100 μL（生物素化抗体溶液），酶标板覆膜，37 ℃温育1 h。弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2 min，甩干。每孔加临用前配制的检测溶液B工作液100 μL（HRP酶结合物溶液），酶标板覆膜，37 ℃温育1 h。弃去孔内液体，甩干，洗板5次。每孔加底物溶液90 μL，酶标板覆膜，37 ℃避光显色，当标准孔的前3～4孔有明显的梯度蓝色，后3～4孔梯度不明显时终止。以与底物液的加入顺序相同的顺序加终止液50 μL终止反应，蓝色立转黄色。提前设定好酶标仪（美国BIO-RAD iMark型全自动酶标仪），在450 nm波长测量，直接读出检测样本的浓度值。
人脂联素酶联免疫吸附试验试剂盒试验原理：采用双抗体夹心ELISA法。用抗人脂联素抗体包被于酶标板上，试验时标本或标准品中的脂联素会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人脂联素抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人脂联素抗体与结合在包被抗体上的人脂联素结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物（TMB），TMB在辣根过氧化物酶的催化下显蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450 nm波长下测定OD值，脂联素浓度与OD450值之间成正比，通过绘制标准曲线求出标本中的脂联素浓度。试验室是用的美国BIO-RAD iMark型全自动酶标仪，试验步骤同上。
1.4 统计学处理
两组血清脂联素浓度水平随着妊娠的进展均呈下降趋势，且对照组血清脂联素水平在中孕及晚孕均高于试验组，两组比较差异均有统计学意义（P<0.001）。两组脐血脂联素水平高于母血，且对照组高于试验组，两组比较差异有统计学意义（P<0.001）。三个采血时段脂联素浓度差异比较差异均有统计学意义（P<0.001）。见表2。
3 讨论
近年来，GDM发病率不断提高，GDM发生率占妊娠的1.0%～14.0%，WHO预测糖尿病的发病率在发展中国家将逐渐增加，GDM与多种母儿并发症密切相关，GDM对母婴的危害极大，易导致血管病变，而发生胎儿宫内窘迫，巨大儿，子痫，胎盘早剥，早产等并发症[3-4]。而GDM早期诊断与治疗尤其重要，人们对他研究了多年，但迄今为止GDM的发病机制尚不清，有学者提出，GDM可能是多种因素起作用而引起的一种疾病，研究脂肪因子，可进一步探讨GDM的发病机制[5]。脂联素与内脂素是近年研究较多的脂肪因子，有学者提出将脂联素（adiponectin）作为GDM的发病风险及疾病严重程度的预测指标。也有学者认为血清内脂素visfatin水平的监测有助于GDM的早期诊断及病情的监控，一般人群脂联素的血浆浓度0.5～30 μg/mL[6]。已有研究显示随妊娠进展，血清脂联素水平呈明显下降趋势[7]。另有报道GDM患者血清脂联素早孕时含量己低于正常孕妇，且血清脂联素含量每降低1%，发生妊娠期糖尿病的概率增加20%[8]。因此有学者认为血清脂联素可作为GDM发病的独立预测因子，用来排除GDM低危人群[9]。另外，妊娠期糖尿病患者与正常妊娠相比内脂素水平上升还是下降目前尚有争议[10-15]。本文研究显示血清脂联素随着妊娠的进展，呈下降趋势；内脂素水平呈上升趋势。妊娠期糖尿病患者血清脂联素水平各时期均低于正常妊娠组，内脂素均高于正常妊娠组。妊娠早期脂联素水平高于妊娠晚期，内脂素水平妊娠晚期却升高，这些可以作为妊娠期糖尿病的预测因子，及早干预。因而血清脂联素水平与内脂素水平，对妊娠期糖尿病的筛查、预测及评估预后有重要意义，这将为GDM的诊断、治疗提供新的理论依据。 参考文献
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[8] Ranheim T， Haugen F， Staff A C， et al. Adiponectin is reduced in gestational diabetes mellitus in normal weight women[J]. Acta Obstet Gynecol Scand， 2004， 83（4）： 341.
[9] Weerakiet S，Lertnarkom K， Panburana P，et al. Can adiponectin predict gestational diabetes[J]. Gynecol Endocrinol， 2006， 22（7）： 362-368.
[10] Chan T F， Chen Y L， Lee C H et al. Decreased plasma visfatin concentrations in women with gestational diabetes mellitus[J]. J Soc Gynecol Investig， 2006，13（2）： 364-367.
[11] Telejko B， Kuzmicki M， Zonenberg A， et al. Visfatin in gestational diabetes： serum level and mRNA expression in fat and placental tissue[J]. Diabetes Res Clin Pract， 2009， 84（10）：68-75.
[12] Lewandowski K C， Stojanovic N， Press M， et al. Elevated serum levels of visfatin in gestational diabetes： a comparative study across various degrees of glucose tolerance[J]. Diabetologia， 2007， 50（5）：1033-1037.
[13] Akturk M， Altinova A E， Mert I， et al. Visfatin concentration is decreased in women with gestational diabetes mellitus in the third trimester[J]. J Endocrinol Invest， 2008， 31（3）：610-613.
[14] Krzyzanowska K， Krugluger W， Mittermayer F， et al. Increased visfatin concentrations in women with gestational diabetes mellitus[J]. Clin Sci， 2006， 110（8）：605-609.
[15] Haider D G， Handisurya A， Storka A， et al. Visfatin response to glucose is reduced in women with gestational diabetes mellitus[J]. Diabetes Care， 2007， 30（6）：1889-1891.
（收稿日期：2014-01-21） （本文编辑：黄新珍）