【摘 要】
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橡胶树起源热带雨林,对低温敏感.在中国橡胶树(Hevea brasiliensis种植受到严重的低温胁迫影响,而CBF/DREB 1 (C-repeat binding factor/dehydration responsive element bin
【机 构】
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海南大学热带农林学院,海口,570228
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橡胶树起源热带雨林,对低温敏感.在中国橡胶树(Hevea brasiliensis种植受到严重的低温胁迫影响,而CBF/DREB 1 (C-repeat binding factor/dehydration responsive element binding factor 1)是低温信号通路中重要的转录因子,但目前橡胶树中仅克隆到HbCBF1.本研究从橡胶树中克隆出两个新的CBF家族基因HbCBF2和Hb CBF3.经测序,HbCBF2和HbCBF3分别编码了234个和242个氨基酸.氨基酸序列分析表明Hb CBF2和HbCBF3均含有CBF家族特有两个短肽序列包括一个保守的DNA结合结构域和NLS簇.通过构建进化树发现HbCBF2、HbCBF3与HbCBF1以及拟南芥中的CBF序列同源性很高.将HbCBF2和HbCBF3构建到pGEX4T-1原核表达载体上,在Transetta (DE3)中进行表达.SDS-PAGE电泳检测它们蛋白质表达量为51.8kD和53kD,与预期一致.对蛋白的诱导条件进行优化,构建融合表达质粒pGEX4T-1-C BF2和pGEX4T-1-C BF3,在28℃、IPTG浓度为0.4 mmol/L的情况下表达量最佳.实验为纯化蛋白和研究HbCBF2和HbCBF3在橡胶树中的功能提供理论帮助.
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