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摘要：目的：分析与探讨PAI（纤溶酶原激活抑制因子）-1和TLR4（Toll样受体4）基因多态性与脓毒症的关系。方法：选取60例2013年1月～2014年8月在我院接受治疗的脓毒症患者，根据MODS（多脏器功能障碍综合征）的诊断标准分成MODS组和非MODS组，采用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP）分析各组中PAI-1和TLR4單个核苷酸多态性，比较MODS组和非MODS组，比较死亡组和存活组中PAI-1基因型和等位基因频率分布的差异。对比PAI-1和TLR4基因多态性与脓毒症的关系。结果：MODS组患者中，4G/5G多态性与脓毒症转归和易感性呈正相关性，且两者具有明显差异性，P<0.05，具有统计学意义。结论：研究表明，PAI-14G/5G多态性和脓毒症呈正相关性，PAI-1与TLR4基因多态性和脓毒症发生发展中存在相关性。
关键词：脓毒症，TLR4基因多态性，PAI-1，相关性
【中图分类号】R632.5 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602（2015）01-0149-02
脓毒症严重感染是全球性的威胁和挑战，患病率约为人口的3‰，全球总病例数约为1800万/年。约30%的外科ICU患者发生严重感染，并导致多器官功能障碍甚至衰竭，严重感染是外科大手术患者的主要死亡原因之一，因此手术后严重感染的预防及有效救治是从事感染工作者和临床医生的重要使命[1]。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取60例2013年1月～2014年8月在我院接受治疗的脓毒症患者，根据MODS的诊断标准分成MODS组和非MODS组，其中MODS组患者中，MODS组患者中，男患者为18例，女患者为12例，年龄为25岁～66岁，平均年龄在（36.5±5.1）岁，非MODS组中，男患者为15例，女患者为15例，年龄为26岁～63岁，平均年龄在（36.1±4.9）岁，两组研究对象性别、年龄等一般资料差异性不明显，P>0.05，具有可比性。
1.2 研究方法
静脉抽取两组研究对象2ml血液，通过2%EDTA（乙二胺四乙酸二钠）实施抗凝，并在冻存于-80e中以作备用。提取DNA时，通过2%EDTA抗凝1ml静脉血，采用酚-氯仿取出研究对象的DNA，通过紫外分光光度仪进行定量，不断扩增DNA片段，采用聚合酶链，依照其反应（PCR）特异性对PAI-1基因序列进行扩增。最后，多态性分析PAI-1基因序列，通过5Ubsll限制性内切酶酶切5L1 PCR产物，以此对基因序列进行标识，酶切99bp（5G）片段为22bp片段与99bp（5G）片段，采用浓度为16%的聚丙烯酰胺凝胶电泳，将电压设置为180V，于凝胶成像仪下对溴化乙锭染色后的结果进行观察，最终确定基因类型。
1.3 统计学处理
采用软件SPSS15.0进行统计学处理，（ ）表示计量资料，t检验，采用APACHII评分评价两组研究对象阳性率，P<0.05表示差异性比较明显，具有统计学意义。
2 结果
研究结果显示，PAI-14G/5G多态性和脓毒症发生与发展存在相关性， PAI-14G/5G基因型分布中，两组对象结果具有明显差异性，P<0.05，具有统计学意义。MODS患者PAI-14G/5G基因型携带率为0.44，而患者5G等位基因携带率为0.65。非MODS研究对象的PAI-14G/5G基因型携带率、5G等位基因携带率分别为0.25、0.50。此外，MODS组存活和死亡患者中的PAI-14G/5G基因也具有多态性，P<0.05，具有统计学意义，见表1、2。
3 讨论
PAI是单链糖蛋白的一种，为氨酸蛋白酶抑制物家族范畴，其具有52000的相对分子量质量，PAI-1成熟后的氨基酸有379个。通常由血管内皮细胞产生PAI-1，此外巨核细胞、血小板也可以合成PAI-1。患者体内产生的PAI-1与血液循环或者细胞间质相融合，其中很多都在血小板颗粒中存储。PAI-1的主要作用在于通过结合纤溶酶原激活物，使其及时失活，降低纤维蛋白降解导致聚集纤维蛋白的概率，存在抗纤溶性，对人体中凝血系统和纤溶系统的动态平衡进行有效调节，在脓毒症、SIRS发生发展中，凝血、纤溶系统紊乱发挥着重要作用。很多研究表明[2]，脓毒症患者机体中的PAI-1活性、水平和患者预后关系极为密切，PAI-1基因启动子区多爱性采用转换PAI-1转录速率的方式，对PAI-1活性产生影响。TLR4是人体细胞表面的Toll样蛋白，是LPS主要受体。LR4启动细菌及其产物对免疫细胞的跨膜信号转导。
此外，PAI-1基因启动子区由于缺少单核苷酸而引发的4G/5G多态性，而且4G/5G多态性会导致PAI-1基因表达水平与转录速率的改变，对PAI-1活性产生影响。但是，最近相关研究中发现[3]，PAI-l基因多态性与脓毒症疾病严重程度及预后无关。所以，PAI-l基因多态性与脓毒症易感性及预后的关系值得进一步研究。本研究结果显示，MODS组患者中，4G/5G多态性与脓毒症转归和易感性呈正相关性，且两者具有明显差异性，P<0.05，具有统计学意义。
综上所述，PAI-14G/5G多态性和脓毒症呈正相关性，PAI-1与TLR4基因多态性和脓毒症发生发展中存在相关性。依照PAI-14G/5G变化提示，有助于做好脓毒症预后工作，值得临床应用与推广。
参考文献
[1] 倪俊学，王亚军，李平，付红敏，马燕，万健.脓毒症患儿血浆胆固醇、白细胞介素-6水平变化与病情危重度的关系[J].实用儿科临床杂志，2012，07（18）：41-42.
[2] 饶小平，朱绿绮.动态监测血乳酸对评估小儿脓毒症的临床意义[J].南昌大学学报（医学版），2011，14（12）：76-77.
[3] Kumpf O，Giamarellos-Bourboulis EJ， Koch A， et al. Influence of genetic variations in TLR4 and TIRAP/Mal on the course of sepsis and pneumonia and cytokine release： an observational study in three cohorts.Crit Care，2010，14（3）：1-10.
关键词：脓毒症，TLR4基因多态性，PAI-1，相关性
【中图分类号】R632.5 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602（2015）01-0149-02
脓毒症严重感染是全球性的威胁和挑战，患病率约为人口的3‰，全球总病例数约为1800万/年。约30%的外科ICU患者发生严重感染，并导致多器官功能障碍甚至衰竭，严重感染是外科大手术患者的主要死亡原因之一，因此手术后严重感染的预防及有效救治是从事感染工作者和临床医生的重要使命[1]。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取60例2013年1月～2014年8月在我院接受治疗的脓毒症患者，根据MODS的诊断标准分成MODS组和非MODS组，其中MODS组患者中，MODS组患者中，男患者为18例，女患者为12例，年龄为25岁～66岁，平均年龄在（36.5±5.1）岁，非MODS组中，男患者为15例，女患者为15例，年龄为26岁～63岁，平均年龄在（36.1±4.9）岁，两组研究对象性别、年龄等一般资料差异性不明显，P>0.05，具有可比性。
1.2 研究方法
静脉抽取两组研究对象2ml血液，通过2%EDTA（乙二胺四乙酸二钠）实施抗凝，并在冻存于-80e中以作备用。提取DNA时，通过2%EDTA抗凝1ml静脉血，采用酚-氯仿取出研究对象的DNA，通过紫外分光光度仪进行定量，不断扩增DNA片段，采用聚合酶链，依照其反应（PCR）特异性对PAI-1基因序列进行扩增。最后，多态性分析PAI-1基因序列，通过5Ubsll限制性内切酶酶切5L1 PCR产物，以此对基因序列进行标识，酶切99bp（5G）片段为22bp片段与99bp（5G）片段，采用浓度为16%的聚丙烯酰胺凝胶电泳，将电压设置为180V，于凝胶成像仪下对溴化乙锭染色后的结果进行观察，最终确定基因类型。
1.3 统计学处理
采用软件SPSS15.0进行统计学处理，（ ）表示计量资料，t检验，采用APACHII评分评价两组研究对象阳性率，P<0.05表示差异性比较明显，具有统计学意义。
2 结果
研究结果显示，PAI-14G/5G多态性和脓毒症发生与发展存在相关性， PAI-14G/5G基因型分布中，两组对象结果具有明显差异性，P<0.05，具有统计学意义。MODS患者PAI-14G/5G基因型携带率为0.44，而患者5G等位基因携带率为0.65。非MODS研究对象的PAI-14G/5G基因型携带率、5G等位基因携带率分别为0.25、0.50。此外，MODS组存活和死亡患者中的PAI-14G/5G基因也具有多态性，P<0.05，具有统计学意义，见表1、2。
3 讨论
PAI是单链糖蛋白的一种，为氨酸蛋白酶抑制物家族范畴，其具有52000的相对分子量质量，PAI-1成熟后的氨基酸有379个。通常由血管内皮细胞产生PAI-1，此外巨核细胞、血小板也可以合成PAI-1。患者体内产生的PAI-1与血液循环或者细胞间质相融合，其中很多都在血小板颗粒中存储。PAI-1的主要作用在于通过结合纤溶酶原激活物，使其及时失活，降低纤维蛋白降解导致聚集纤维蛋白的概率，存在抗纤溶性，对人体中凝血系统和纤溶系统的动态平衡进行有效调节，在脓毒症、SIRS发生发展中，凝血、纤溶系统紊乱发挥着重要作用。很多研究表明[2]，脓毒症患者机体中的PAI-1活性、水平和患者预后关系极为密切，PAI-1基因启动子区多爱性采用转换PAI-1转录速率的方式，对PAI-1活性产生影响。TLR4是人体细胞表面的Toll样蛋白，是LPS主要受体。LR4启动细菌及其产物对免疫细胞的跨膜信号转导。
此外，PAI-1基因启动子区由于缺少单核苷酸而引发的4G/5G多态性，而且4G/5G多态性会导致PAI-1基因表达水平与转录速率的改变，对PAI-1活性产生影响。但是，最近相关研究中发现[3]，PAI-l基因多态性与脓毒症疾病严重程度及预后无关。所以，PAI-l基因多态性与脓毒症易感性及预后的关系值得进一步研究。本研究结果显示，MODS组患者中，4G/5G多态性与脓毒症转归和易感性呈正相关性，且两者具有明显差异性，P<0.05，具有统计学意义。
综上所述，PAI-14G/5G多态性和脓毒症呈正相关性，PAI-1与TLR4基因多态性和脓毒症发生发展中存在相关性。依照PAI-14G/5G变化提示，有助于做好脓毒症预后工作，值得临床应用与推广。
参考文献
[1] 倪俊学，王亚军，李平，付红敏，马燕，万健.脓毒症患儿血浆胆固醇、白细胞介素-6水平变化与病情危重度的关系[J].实用儿科临床杂志，2012，07（18）：41-42.
[2] 饶小平，朱绿绮.动态监测血乳酸对评估小儿脓毒症的临床意义[J].南昌大学学报（医学版），2011，14（12）：76-77.
[3] Kumpf O，Giamarellos-Bourboulis EJ， Koch A， et al. Influence of genetic variations in TLR4 and TIRAP/Mal on the course of sepsis and pneumonia and cytokine release： an observational study in three cohorts.Crit Care，2010，14（3）：1-10.