【摘 要】
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目的 利用原核表达系统表达塞尼卡病毒(Seneca Valley virus,SVV)VP1蛋白,并用纯化的蛋白免疫小鼠,制备VP1多克隆抗体.方法 PCR扩增SVV VP1蛋白基因,并将其克隆至pET-28a(+)
【机 构】
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延边大学农学院,吉林延吉133002;军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所,吉林长春130122
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目的 利用原核表达系统表达塞尼卡病毒(Seneca Valley virus,SVV)VP1蛋白,并用纯化的蛋白免疫小鼠,制备VP1多克隆抗体.方法 PCR扩增SVV VP1蛋白基因,并将其克隆至pET-28a(+)载体,构建pET-28a-VP1重组质粒.将重组质粒转化至BL21(DE3)pLySs大肠埃希菌,使用IPTG诱导表达目的蛋白并优化表达条件,利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化蛋白.用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,并用接毒后的BHK-21细胞进行Western blot验证.结果 PCR扩增SVVVP1目的基因片段为792 bp,与预期相符.成功构建pET-28a-VP1重组质粒,转化至DE3后经IPTG诱导表达相对分子质量单位约为35X 103的目的蛋白,以37 ℃、0.8 mmol/L诱导剂诱导4h表达量最高,且重组蛋白以包涵体形式表达.用His标签Ni2+-NTA金属螯合蛋白质纯化柱纯化蛋白并免疫小鼠,制备的抗血清能与接毒后的BHK-21细胞裂解产生及纯化的VP1蛋白反应.结论 原核表达了塞尼卡病毒VP1蛋白,制备了抗小鼠多克隆抗体,该抗体具有免疫反应性.
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