【摘 要】
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目的构建粉尘螨全长cDNA文库,为粉尘螨相关基因研究奠定基础。方法用RNAiso Reagent试剂盒提取粉尘螨总RNA,然后以SMART IVTM Oligo-nucleotide和CDSIII/3’PCR Primer为引物
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目的构建粉尘螨全长cDNA文库,为粉尘螨相关基因研究奠定基础。方法用RNAiso Reagent试剂盒提取粉尘螨总RNA,然后以SMART IVTM Oligo-nucleotide和CDSIII/3’PCR Primer为引物,在反转录酶作用下合成cDNA第1链,利用LD-PCR方法合成cDNA第2链。合成的双链cDNA经蛋白酶K消化及SfiⅠ酶切,得到的cDNA克隆入λTripIEx2载体中,构建粉尘螨全长cDNA文库,测定分析文库滴度及插入片段大小。结果成功构建粉尘螨全长cDNA文库。检测cDNA文库未扩增时滴度为7.3×106pfu/ml,文库扩增后滴度为5.0×109pfu/ml,插入片段为0.5~2.5kb,平均1.2kb左右。结论成功构建了高质量的粉尘螨全长cDNA表达文库,所建文库容量及插入片段大小适用于对粉尘螨相关基因的进一步研究。
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