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摘要：目的：优选珍珠蛋白液的CO2超临界萃取工艺。方法：采用正交试验，从萃取温度，萃取时间，萃取压力等方面为考察因素，以珍珠蛋白液的含氮总量为考核指标。结果：最佳萃取工艺为萃取压力30Mpa，萃取时间为2h，萃取温度为40℃。结论：经筛选的萃取工艺合理可行，适于工业生产。
关键词：珍珠蛋白液 氮 超临界CO2 萃取
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.07.475
【中图分类号】R9 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2013）07-0415-01
珍珠（Marfarita），又名真朱，蚌珠，珠子，濂珠，始载于《开宝本草》，而其原名“真珠”，最早见于《雷公炮灸论》。[1]
珍珠是名贵的中药材，有定惊安神，清热解毒及消炎的功能，珍珠的主要成分是碳酸钙，约占总量的82.93%，此外还含有4.14%的角蛋白质和2.4%的水分，以及十几种氨基酸和28种微量元素包括硒、锗等抗衰物质。在《日华子本草》载，珍珠“安心、明月”。《本草衍义》曰：“除小儿惊热”《本草汇言》曰：“镇心、定志、安魂、解结毒、化恶疮，收内溃破烂。”[2]有极高的保健和药用价值。CO2超临界流体萃取法具有安全、无毒、临界温度和临界压力较低，提取没有残留溶剂，提取效率高、节约能耗等优点[3]。利用CO2超临界技术萃取珍珠蛋白，与传统的提取工艺相比，珍珠蛋白提取率高。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂。珍珠产于广西北海合浦，粉碎，过80目，二氧化碳气体购于郑州西环工业气体有限公司。硼酸，氢氧化钠，硫酸，三氯甲烷、甲醇等均为分析纯（天津市化东试剂厂）。
1.2 仪器设备。超临界流体CO2萃取装置HA120-50-01（南通华安超临界萃取有限公司），真空旋转蒸发器（上海申科技有限公司），质环水式多用真空泵（河南巩仪器厂）。HPLC-1000（二元泵压梯度）（山东鲁南瑞虹化工仪器有限公司）。精密天平、H-05凯氏定氮仪（上海分析仪器有限公司）。
1.3 试验方法。CO2超临界提取：每次称取珍珠粉100g，用纯化水稀释到1000ml，装入萃取器，再把萃取器装进萃取罐，密封好顶盖。待萃取罐及分离罐温度达到预定温度后，打开进气阀，根据试验设计需要设定萃取罐压力及CO2流量。待萃取罐达到预定压力后开始计时，提取一定时间后关闭进气阀，收集分离罐所得提取物，测定氮含量。以含氮总量为指标分析，考察萃取压力（A）、萃取时间（B）、萃取温度（C）等因素。
氮含量的测定：精密量取一定体积的样品，置凯氏定氮瓶中，加消化剂约0.3g，硫酸1ml消化至澄明，呈蓝绿色，继续消化约60分钟，取2%硼酸吸收液10ml置100ml锥形瓶内，将凯氏蒸馏器冷凝管末端浸入硼酸吸收液内，将消化好的供试品移入凯氏蒸馏器内，用水洗定氮瓶3～4次，将洗液移入蒸馏器内，再加入50%氢氧化钠溶液5ml，然后进行蒸馏，待接收液总体积约35～50ml，将冷凝管末端移出液面，使蒸汽继续冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏，接收液用硫酸滴定液（0.005mol/L）进行滴定，至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验校正。
按下式计算：
氮含量（mg/ml）=（VX-V0）×c×14.01×n×2÷V
式中VX为供试品消耗酸滴定液的体积，ml；
V0为空白消耗酸滴定液的体积，ml；
c为硫酸滴定液的浓度，mol/L；
n为供试品的稀释倍数；
V为供试品溶液的体积，ml；
14.01为氮的相对原子质量。
2 结果与分析
正交实验。本实验选择3因素3水平标准正交表，见表1，正交实验结果见表2。
表1 正交实验因素，水平表
表2 超临界CO2萃取正交实验结果
由表2中K值得知3个因素的优劣，萃取率高的为优。
第1列A因素（萃取压力）K3>K2>K1（5.0%>4.36%>3.21%）。
第2列B因素（萃取时间）K1>K2>k3（4.97%>4.96%>4.24%）。
第3列C因素（萃取温度）K3>K2>K1（5.3%>4.93%>3.87%）。
当采用A2B1C2为实验条件时，珍珠蛋白的提取率最高。可作为最佳萃取条件，即萃取压力为30Mpa，萃取时间为2h，萃取温度为40℃。
3 结论
本实验采用三水平正交实验设计，对CO2超临界萃取珍珠蛋白液的工艺条件进行研究，考察萃取压力、萃取时间、萃取温度对其影响。得出最佳工艺条件为：萃取压力为30Mpa，萃取时间为2h，萃取温度为40℃。可适用于工业化生产。
参考文献
[1] 潘刚，编著.江苏科学技术出版社.1982年6月1版
[2] 刘敬阁，著.北京科学技术出版社.2004年1月第1版
[3] 韩玉谦，隋晓.银杏叶活性成分萃取工艺的研究.精细化工.2000；17（9）：505
关键词：珍珠蛋白液 氮 超临界CO2 萃取
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.07.475
【中图分类号】R9 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2013）07-0415-01
珍珠（Marfarita），又名真朱，蚌珠，珠子，濂珠，始载于《开宝本草》，而其原名“真珠”，最早见于《雷公炮灸论》。[1]
珍珠是名贵的中药材，有定惊安神，清热解毒及消炎的功能，珍珠的主要成分是碳酸钙，约占总量的82.93%，此外还含有4.14%的角蛋白质和2.4%的水分，以及十几种氨基酸和28种微量元素包括硒、锗等抗衰物质。在《日华子本草》载，珍珠“安心、明月”。《本草衍义》曰：“除小儿惊热”《本草汇言》曰：“镇心、定志、安魂、解结毒、化恶疮，收内溃破烂。”[2]有极高的保健和药用价值。CO2超临界流体萃取法具有安全、无毒、临界温度和临界压力较低，提取没有残留溶剂，提取效率高、节约能耗等优点[3]。利用CO2超临界技术萃取珍珠蛋白，与传统的提取工艺相比，珍珠蛋白提取率高。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂。珍珠产于广西北海合浦，粉碎，过80目，二氧化碳气体购于郑州西环工业气体有限公司。硼酸，氢氧化钠，硫酸，三氯甲烷、甲醇等均为分析纯（天津市化东试剂厂）。
1.2 仪器设备。超临界流体CO2萃取装置HA120-50-01（南通华安超临界萃取有限公司），真空旋转蒸发器（上海申科技有限公司），质环水式多用真空泵（河南巩仪器厂）。HPLC-1000（二元泵压梯度）（山东鲁南瑞虹化工仪器有限公司）。精密天平、H-05凯氏定氮仪（上海分析仪器有限公司）。
1.3 试验方法。CO2超临界提取：每次称取珍珠粉100g，用纯化水稀释到1000ml，装入萃取器，再把萃取器装进萃取罐，密封好顶盖。待萃取罐及分离罐温度达到预定温度后，打开进气阀，根据试验设计需要设定萃取罐压力及CO2流量。待萃取罐达到预定压力后开始计时，提取一定时间后关闭进气阀，收集分离罐所得提取物，测定氮含量。以含氮总量为指标分析，考察萃取压力（A）、萃取时间（B）、萃取温度（C）等因素。
氮含量的测定：精密量取一定体积的样品，置凯氏定氮瓶中，加消化剂约0.3g，硫酸1ml消化至澄明，呈蓝绿色，继续消化约60分钟，取2%硼酸吸收液10ml置100ml锥形瓶内，将凯氏蒸馏器冷凝管末端浸入硼酸吸收液内，将消化好的供试品移入凯氏蒸馏器内，用水洗定氮瓶3～4次，将洗液移入蒸馏器内，再加入50%氢氧化钠溶液5ml，然后进行蒸馏，待接收液总体积约35～50ml，将冷凝管末端移出液面，使蒸汽继续冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏，接收液用硫酸滴定液（0.005mol/L）进行滴定，至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验校正。
按下式计算：
氮含量（mg/ml）=（VX-V0）×c×14.01×n×2÷V
式中VX为供试品消耗酸滴定液的体积，ml；
V0为空白消耗酸滴定液的体积，ml；
c为硫酸滴定液的浓度，mol/L；
n为供试品的稀释倍数；
V为供试品溶液的体积，ml；
14.01为氮的相对原子质量。
2 结果与分析
正交实验。本实验选择3因素3水平标准正交表，见表1，正交实验结果见表2。
表1 正交实验因素，水平表
表2 超临界CO2萃取正交实验结果
由表2中K值得知3个因素的优劣，萃取率高的为优。
第1列A因素（萃取压力）K3>K2>K1（5.0%>4.36%>3.21%）。
第2列B因素（萃取时间）K1>K2>k3（4.97%>4.96%>4.24%）。
第3列C因素（萃取温度）K3>K2>K1（5.3%>4.93%>3.87%）。
当采用A2B1C2为实验条件时，珍珠蛋白的提取率最高。可作为最佳萃取条件，即萃取压力为30Mpa，萃取时间为2h，萃取温度为40℃。
3 结论
本实验采用三水平正交实验设计，对CO2超临界萃取珍珠蛋白液的工艺条件进行研究，考察萃取压力、萃取时间、萃取温度对其影响。得出最佳工艺条件为：萃取压力为30Mpa，萃取时间为2h，萃取温度为40℃。可适用于工业化生产。
参考文献
[1] 潘刚，编著.江苏科学技术出版社.1982年6月1版
[2] 刘敬阁，著.北京科学技术出版社.2004年1月第1版
[3] 韩玉谦，隋晓.银杏叶活性成分萃取工艺的研究.精细化工.2000；17（9）：505