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【摘要】人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板（血球计数板），教材中没有介绍其构造和用法，學生对此感到很生疏。本文简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。
【关键词】血细胞计数板的构造 计数方法 使用方法
人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板（血球计数板），教材中没有介绍其构造和用法，学生对此感到很生疏。下面简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。
1.血细胞计数板的构造
血细胞计数板 (血球计数板)是显微镜上的外挂物件，可用来测量细胞、细菌等一些微小物体的长度，测量单位体积细胞的数量等。血细胞计数板是由一块比普通玻片大而厚的特制玻璃片制成的，它的两边有两个凸起部分，中间有四条槽沟构成三个平台，中央的平台较宽，而且被一短槽隔成两半，每个半边上各刻有一个方格网，每个方格网共有九大格，中央的大格就是计数室、中央的平台比两边稍低，加盖盖玻片后，中央平台要比两边平台低0.1mm,也就是盖上盖玻片后计数室深度为0.1mm.。（见图A、B、C、D）
1.1 计数室的规格有两种，一种是由25中格组成，每个中格又分为16个小格（共25×16＝400小格）（见图E）；另一种是由16中格组成，每个中格又分成25个小格（共16×25＝400小格）(见图F)。可见，尽管计数室有两种规格，但是，不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是16×25=25×16=400个小方格组成。
1.2 计数室的大小有两种，一种是边长为1mm,则计数室面积为1mm2,每个小格面积为〖SX(〗1〖〗400〖SX)〗mm2 ，盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm。所以，一个计数室的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为〖SX(〗1〖〗4000〖SX)〗mm3 ；另一种是边长为2mm，则计数室的面积为4mm2，每个小格面积为〖SX(〗1〖〗100〖SX)〗mm2，盖上盖玻片后计数室的高度为0.1mm，所以，一个计数室的体积为0.4mm3，每个小方格的体积为〖SX(〗1〖〗1000〖SX)〗mm3。
〖XC12.TIF；%50%50〗
2.计数方法
2.1 25×16计数室：显微镜下数左上、右上、左下、右下和中央共五个中格，即5×16＝80个小方格的细菌数，若这80个小方格细菌数为A(对每个样品计数三次,取其平均值)。①若计数室的边长为1mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为 〖SX(〗A〖〗80〖SX)〗×400×10×1000=50000A（若菌液被稀释，还要乘以稀释倍数）；②若计数室的边长为2mm，则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX(〗A〖〗80〖SX)〗×400×2.5×1000=12500A （若菌液被稀释，还要乘以稀释倍数）。
2.2 16×25计数室：显微镜下数左上、右上、左下、右下共四个中格，即4×25＝100个小方格的细菌数，若这100个小方格的细菌数为B(对每个样品计数三次,取其平均值)。①若计数室边长为1mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX(〗B〖〗100〖SX)〗×400×10×1000=4000B （若菌液被稀释，还要乘以稀释倍数）。②若计数室的边长为2mm，则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX(〗B〖〗100〖SX)〗×400×2.5×1000=10000B （若菌液被稀释，还要乘以稀释倍数）。
3.使用方法（以酵母菌为例）
3.1 取血细胞计数板，盖上盖玻片，将加入酵母菌的试管摇匀后，用滴管吸取少许菌液，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的边缘滴入一小滴，菌液会沿着沟槽扩散，充满计数区，然后用吸水纸吸去多余的菌悬液。
3.2 静置数分钟，待全部菌体细胞沉降到载玻片表面再置于显微镜下观察，先用低倍镜观察，找到计数板刻度后，换高倍镜计数，将结果记录下来，作为原始数据使用，取下盖玻片，用水将计数板浸泡、冲洗干净（切勿用硬物洗刷或擦抹，以免损坏网格刻度），待自然晾干，放入盒内保存。
3.3 每个样品计数通常应重复三次以上，取平均值，求出每个小方格中的酵母菌平均数，按以上计数方法计算。
3.4 由于菌液处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，故观察时必须不断调节细准焦螺旋，才能找到全部菌体，以免误差，对于压线的菌体，采取计上不计下，计左不计右的计算方法，以减少误差，若酵母菌已出芽，只要芽体达到母体的〖SX(〗1〖〗2〖SX)〗，即可单独计为一个个体。
3.5 由于酵母菌是单细胞生物，细胞体积很小，不易观察，在观察显微镜时，要注意对视野的明暗进行选择，太明或太暗都不好，如果样品密度很大，为了计数准确，常常需将待测样品稀释成不同浓度的菌液后再进行计数，一般每一小格内酵母菌数目平均在10个以上的，通常应该稀释，稀释倍数以每小格5～6个菌体为宜。
3.6 取液过程中，为了防止污染，一定要用无菌滴管或无菌移液器，稀释时尽量取少一些，稀释后的溶液不能放回原液。
4.血球计数板的清洁
血球汁数板使用后，用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。
举例：在用血细胞计数板（1mm×1mm）刻度为25中格×16小格，装入液体后液体高度为0.1mm,经过计数计算，求得每个小格中的平均酵母菌数为A个，且已知稀释倍数为B，则1mL培养液中的酵母菌数为〖CD#4〗个？（答案4AB×106）。
参考文献
［1］ 《高中生物新课程探究实验指导》，教育部教学仪器研究所，凯普生物科技有限公司 编著.人民教育出版社,2007年2月第1版.
【关键词】血细胞计数板的构造 计数方法 使用方法
人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板（血球计数板），教材中没有介绍其构造和用法，学生对此感到很生疏。下面简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。
1.血细胞计数板的构造
血细胞计数板 (血球计数板)是显微镜上的外挂物件，可用来测量细胞、细菌等一些微小物体的长度，测量单位体积细胞的数量等。血细胞计数板是由一块比普通玻片大而厚的特制玻璃片制成的，它的两边有两个凸起部分，中间有四条槽沟构成三个平台，中央的平台较宽，而且被一短槽隔成两半，每个半边上各刻有一个方格网，每个方格网共有九大格，中央的大格就是计数室、中央的平台比两边稍低，加盖盖玻片后，中央平台要比两边平台低0.1mm,也就是盖上盖玻片后计数室深度为0.1mm.。（见图A、B、C、D）
1.1 计数室的规格有两种，一种是由25中格组成，每个中格又分为16个小格（共25×16＝400小格）（见图E）；另一种是由16中格组成，每个中格又分成25个小格（共16×25＝400小格）(见图F)。可见，尽管计数室有两种规格，但是，不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是16×25=25×16=400个小方格组成。
1.2 计数室的大小有两种，一种是边长为1mm,则计数室面积为1mm2,每个小格面积为〖SX(〗1〖〗400〖SX)〗mm2 ，盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm。所以，一个计数室的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为〖SX(〗1〖〗4000〖SX)〗mm3 ；另一种是边长为2mm，则计数室的面积为4mm2，每个小格面积为〖SX(〗1〖〗100〖SX)〗mm2，盖上盖玻片后计数室的高度为0.1mm，所以，一个计数室的体积为0.4mm3，每个小方格的体积为〖SX(〗1〖〗1000〖SX)〗mm3。
〖XC12.TIF；%50%50〗
2.计数方法
2.1 25×16计数室：显微镜下数左上、右上、左下、右下和中央共五个中格，即5×16＝80个小方格的细菌数，若这80个小方格细菌数为A(对每个样品计数三次,取其平均值)。①若计数室的边长为1mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为 〖SX(〗A〖〗80〖SX)〗×400×10×1000=50000A（若菌液被稀释，还要乘以稀释倍数）；②若计数室的边长为2mm，则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX(〗A〖〗80〖SX)〗×400×2.5×1000=12500A （若菌液被稀释，还要乘以稀释倍数）。
2.2 16×25计数室：显微镜下数左上、右上、左下、右下共四个中格，即4×25＝100个小方格的细菌数，若这100个小方格的细菌数为B(对每个样品计数三次,取其平均值)。①若计数室边长为1mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX(〗B〖〗100〖SX)〗×400×10×1000=4000B （若菌液被稀释，还要乘以稀释倍数）。②若计数室的边长为2mm，则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX(〗B〖〗100〖SX)〗×400×2.5×1000=10000B （若菌液被稀释，还要乘以稀释倍数）。
3.使用方法（以酵母菌为例）
3.1 取血细胞计数板，盖上盖玻片，将加入酵母菌的试管摇匀后，用滴管吸取少许菌液，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的边缘滴入一小滴，菌液会沿着沟槽扩散，充满计数区，然后用吸水纸吸去多余的菌悬液。
3.2 静置数分钟，待全部菌体细胞沉降到载玻片表面再置于显微镜下观察，先用低倍镜观察，找到计数板刻度后，换高倍镜计数，将结果记录下来，作为原始数据使用，取下盖玻片，用水将计数板浸泡、冲洗干净（切勿用硬物洗刷或擦抹，以免损坏网格刻度），待自然晾干，放入盒内保存。
3.3 每个样品计数通常应重复三次以上，取平均值，求出每个小方格中的酵母菌平均数，按以上计数方法计算。
3.4 由于菌液处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，故观察时必须不断调节细准焦螺旋，才能找到全部菌体，以免误差，对于压线的菌体，采取计上不计下，计左不计右的计算方法，以减少误差，若酵母菌已出芽，只要芽体达到母体的〖SX(〗1〖〗2〖SX)〗，即可单独计为一个个体。
3.5 由于酵母菌是单细胞生物，细胞体积很小，不易观察，在观察显微镜时，要注意对视野的明暗进行选择，太明或太暗都不好，如果样品密度很大，为了计数准确，常常需将待测样品稀释成不同浓度的菌液后再进行计数，一般每一小格内酵母菌数目平均在10个以上的，通常应该稀释，稀释倍数以每小格5～6个菌体为宜。
3.6 取液过程中，为了防止污染，一定要用无菌滴管或无菌移液器，稀释时尽量取少一些，稀释后的溶液不能放回原液。
4.血球计数板的清洁
血球汁数板使用后，用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。
举例：在用血细胞计数板（1mm×1mm）刻度为25中格×16小格，装入液体后液体高度为0.1mm,经过计数计算，求得每个小格中的平均酵母菌数为A个，且已知稀释倍数为B，则1mL培养液中的酵母菌数为〖CD#4〗个？（答案4AB×106）。
参考文献
［1］ 《高中生物新课程探究实验指导》，教育部教学仪器研究所，凯普生物科技有限公司 编著.人民教育出版社,2007年2月第1版.