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摘要：为实现栽培、保护野生种质的目的，本研究以山酢浆草的根颈为材料，进行了试管苗的培养和继代繁殖培养、试管苗根茎的扦插和移植研究，建立起根颈试管苗培养技术。结果表明：1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA是试管苗培养和试管苗根茎继代繁殖培养的理想培养基；在温室苗床上试管苗根茎扦插成活率为96%，繁殖速度提高了2.9倍；试管苗移植成活率为98.8%，移植成活的试管苗保持了野生山酢浆草的所有植物学性状。
关键词：山酢浆草；试管苗；繁殖
中图分类号：S543+.904.3文献标识号：A文章编号：1001-4942（2013）07-0009-03
山酢浆草（Oxalis acetosella）又称白花酢浆草、三叶铜钱草等，属于酢浆草科酢浆草属多年生草本植物，在我国黑龙江、吉林及辽宁地区的本溪、凤城和盖州等地都有分布[1]，生长在针叶林、针阔混交林、阔叶林及灌丛下阴湿地。酢浆草含黄酮类、荭草素等成分，全草可作中草药使用，具有活血化瘀、清热解毒、利尿通淋等功效，能治劳伤疼痛、跌打损伤、无名肿毒、麻风、疥癣等疾病[2]。近年来辽宁东部地区的养鸡农民发现，将山酢浆草的干粉作为蛋鸡的饲料添加剂使用，能明显地降低蛋鸡的发病率，提高养殖效益。为此，一个时期以来，辽宁东部地区养鸡农民每年都要数次采收山酢浆草，作为饲料添加剂或者出售，导致山酢浆草的野生资源受到了严重破坏，不仅严重影响其作为饲料添加剂的使用，还使本来分布和数量都很有限的这一药用植物更加稀少。虽然目前已有栽培植物尤其是酢浆草属植物组织培养的研究报道[3～10]，但迄今未有山酢浆草的相关研究报道。为实现栽培、保护野生种质的目的，研究者对其进行了根颈愈伤组织的无性系繁殖研究。
1材料与方法
1.1试验材料
6月中旬，从本溪灌丛下阴湿地采取生长旺盛的山酢浆草，将具有根颈的根剪下作为试验材料。
1.2材料灭菌
将试验材料放到500 ml的磨口广口瓶中，用无菌水摇晃洗涤5～10 min，蒸馏水摇晃洗涤5 min左右，移到超净工作台上，用75%的乙醇灭菌约10 s，再用0.1% HgCl2灭菌2 min，无菌水洗涤2次，再用饱和的次氯酸钠溶液灭菌8 min，最后用无菌水洗涤6次，即可获得无菌材料[11]。
1.3培养条件
光照强度1 500 lx，培养温度22℃，其它培养条件参见六道木嫩芽快速繁殖的研究[12]。
1.4试验方法
1.4.1根颈试管苗培养把材料上的根颈从无菌材料上切下，接种到以1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT为基本培养基、分别添加0.1、0.2、0.4、0.8 mg/L 2，4-D、NAA、IBA、IAA 4种生长素的培养基上，进行不同种类、不同浓度生长素对根颈试管苗培养影响的试验。试验重复2次，每种培养基接种培养20个根颈。
1.4.2试管苗根茎的继代繁殖培养把在1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA培养基上培养的具有生长点的根茎，用无菌手术剪子剪成具有2个生长点的根茎段后，继续接种到该种培养基上，进行试管苗根茎的继代繁殖培养。试验重复2次，每次继代繁殖培育6代，接种200个根茎段。
1.4.3试管苗根茎的扦插继代培养繁殖的试管苗从培养瓶中取出，将根茎剪成具有2个生长点的根茎段后，扦插到温室苗床上厚约6 cm的扦插基质（由1/2园土与1/2河沙组成）中，进行试管苗根茎段的扦插试验。移栽后前12 d要保持遮阴、空气相对湿度为85%的生长条件，之后按照温室内正常条件进行管理。试验重复2次，扦插的数量分别为380株和260株。
1.4.4根茎扦插试管苗的移植5月上旬，当外界最低温度达到15℃时，把在温室苗床上由根茎扦插成活的试管苗移植到大连郊区水库旁灌丛下的阴湿地上。移植试验一次性完成，共移植605株。移植后，除移植时浇1次透水外不进行其它管理。移植的同时，从本溪挖来20株正常生长的野生山酢浆草定植于试管苗旁作为对照。
2结果及分析
2.1不同种类、不同浓度生长素对试管苗培养的影响
培养到60 d时观察统计，结果见表1。只在添加不同浓度NAA和IAA的培养基上有试管苗形成，且只在添加0.2、0.4 mg/L IAA的 2种培养基上有根茎形成。从试管苗、根茎的生长率、长势 4个方面看，添加0.4 mg/L IAA的培养基生长效果最好。在该种培养基上培养9 d时，有培养材料在根颈下部长出白色的根，上部长出叶片，生长成试管苗；之后，随着试管苗的生长率不断增加，又有试管苗会相继生长出根茎；培养到60 d时，不仅试管苗生长旺盛，且所有的试管苗都长出根茎，根茎平均长度为2.6 cm，每条根茎上有2～8个可见的生长点。2次重复试验的结果基本一致。以上结果说明：1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA是山酢浆草根颈试管苗培养的理想培养基。
2.2试管苗根茎的继代繁殖培养
试管苗根茎的继代繁殖培养周期为50 d，其繁殖的试管苗生长状态比使用根颈为材料培养的试管苗更旺盛，每株试管苗的平均根茎长度为4.4 cm、平均有8.9个可见生长点，每一代的平均繁殖系数为4.2，并且采用此方法培养的试管苗没有无效苗，所有的试管苗都生长旺盛。以上结果说明，1/2MS+ 15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA也是山酢浆草试管苗根茎继代繁殖培养的理想培养基。
2.3试管苗根茎的扦插
观察表明，扦插10 d后有根茎段开始发芽，并生长为试管苗。扦插40 d后统计显示，2次扦插共成活614株，平均成活率为96%。以根茎为材料进行扦插，每株试管苗的根茎平均可切成3.9个扦插的茎段，其繁殖速度比移栽提高了2.9倍。 2.4根茎扦插试管苗的移植
移植后的观察表明，与同期移栽的野生苗相比，移植的试管苗容易成活，前期生长速度慢、植株较小，60 d后生长开始加速，秋季出现了生长旺盛、植株整齐、叶色浓绿、落叶推迟6 d左右等特点。移植70 d后统计表明，共移植成活598株，成活率为98.8%。由根茎培养的试管苗保持了野生山酢浆草的所有植物学性状，移植的试管苗当年正常开花结果。
3讨论
本研究通过两条途径进行繁殖：一是试管苗根茎继代培养的方法，50 d为一个培养周期，平均繁殖系数为4.2，按照这个繁殖速度，1株试管苗的根茎1年能繁殖出2万多株试管苗；二是在苗床上扦插根茎，其繁殖速度比移栽提高了2.9倍。以上结果说明，本研究建立的繁殖技术繁殖速度快，能够满足栽培、保护野生种质对种苗的需求。
在对试管苗进行继代繁殖培养时，其繁殖周期比直接由根颈培养试管苗的培养周期缩短了10 d。于馨恒等[13]在进行小天仙子的研究中，也观察到这种现象。产生这种现象的主要原因有：一是由根颈直接培养试管苗时，根颈材料需经过灭菌处理，在灭菌中材料可能受到严重伤害，接种到培养基上后需要恢复培养一段时间；二是根颈是在土壤中生长的，接种到培养基上后对新环境需要有一个适应过程。而继代繁殖培养时，其根茎不需经过灭菌处理，且是在相同的培养基上培养的，试管苗已经适应了这种环境条件，避免了恢复培养及适应过程所需要的时间。
参考文献：
[1]
李书心. 辽宁植物志（上册） [M]. 沈阳：辽宁科学技术出版社， 1988.
[2]南京中医药大学. 中医药大辞典（上册） [M]. 上海：上海科学技术出版社， 2006.
[3]陈晓流， 崔美， 陈学森， 等. 草莓新品系妙紫组培快繁技术研究 [J]. 山东农业科学， 2012， 44（5）：17-19.
[4]孙洪雁， 孙清荣， 单公华， 等. 鲁枣1号组织培养和植株再生体系研究 [J]. 山东农业科学， 2012， 44（1）：14-16.
[5]李霖， 宋宜颖， 鲁润龙， 等. 紫叶酢浆草的组织培养 [J]. 植物生理学通讯， 2002， 38（4）：360.
[6]高贵珍， 张兴桃， 刘小阳， 等. 三角紫叶酢浆草的组织培养与快速繁殖 [J]. 植物资源与环境学报， 2004， 13（1）：62-63.
[7]胡国富， 李凤兰， 胡宝忠. 三角紫叶酢浆草的组织培养 [J]. 安徽农业科学， 2008，6：176-178.
[8]刘建， 王永清， 王利， 等. 糖分对三角紫叶酢浆草叶片组培苗形成的影响 [J]. 安徽农业科学， 2006， 34（7）：1348-1349.
[9]王利， 王永清， 张帆. 三角酢浆草离体培养植株再生的研究 [J]. 安徽农业科学， 2005， 33（2）：238-239，315.
[10]王钰， 阮龙， 武廷章， 等. 三角紫叶酢浆草组培快繁技术的研究 [J]. 安徽农业大学学报， 2006， 33（2）：230-233.
[11]安利佳， 姜长阳. 植物组织培养导论 [M]. 大连：辽宁师范大学出版社， 1996.
[12]汪思齐， 杨萌萌， 宋年平， 等. 六道木嫩芽快速繁殖的研究 [J]. 山东林业科技， 2012，5：12-14.
[13]于馨恒， 刘兵， 王春露， 等. 小天仙子组织培养研究 [J]. 内蒙古农业科技， 2011，3：47-48.
关键词：山酢浆草；试管苗；繁殖
中图分类号：S543+.904.3文献标识号：A文章编号：1001-4942（2013）07-0009-03
山酢浆草（Oxalis acetosella）又称白花酢浆草、三叶铜钱草等，属于酢浆草科酢浆草属多年生草本植物，在我国黑龙江、吉林及辽宁地区的本溪、凤城和盖州等地都有分布[1]，生长在针叶林、针阔混交林、阔叶林及灌丛下阴湿地。酢浆草含黄酮类、荭草素等成分，全草可作中草药使用，具有活血化瘀、清热解毒、利尿通淋等功效，能治劳伤疼痛、跌打损伤、无名肿毒、麻风、疥癣等疾病[2]。近年来辽宁东部地区的养鸡农民发现，将山酢浆草的干粉作为蛋鸡的饲料添加剂使用，能明显地降低蛋鸡的发病率，提高养殖效益。为此，一个时期以来，辽宁东部地区养鸡农民每年都要数次采收山酢浆草，作为饲料添加剂或者出售，导致山酢浆草的野生资源受到了严重破坏，不仅严重影响其作为饲料添加剂的使用，还使本来分布和数量都很有限的这一药用植物更加稀少。虽然目前已有栽培植物尤其是酢浆草属植物组织培养的研究报道[3～10]，但迄今未有山酢浆草的相关研究报道。为实现栽培、保护野生种质的目的，研究者对其进行了根颈愈伤组织的无性系繁殖研究。
1材料与方法
1.1试验材料
6月中旬，从本溪灌丛下阴湿地采取生长旺盛的山酢浆草，将具有根颈的根剪下作为试验材料。
1.2材料灭菌
将试验材料放到500 ml的磨口广口瓶中，用无菌水摇晃洗涤5～10 min，蒸馏水摇晃洗涤5 min左右，移到超净工作台上，用75%的乙醇灭菌约10 s，再用0.1% HgCl2灭菌2 min，无菌水洗涤2次，再用饱和的次氯酸钠溶液灭菌8 min，最后用无菌水洗涤6次，即可获得无菌材料[11]。
1.3培养条件
光照强度1 500 lx，培养温度22℃，其它培养条件参见六道木嫩芽快速繁殖的研究[12]。
1.4试验方法
1.4.1根颈试管苗培养把材料上的根颈从无菌材料上切下，接种到以1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT为基本培养基、分别添加0.1、0.2、0.4、0.8 mg/L 2，4-D、NAA、IBA、IAA 4种生长素的培养基上，进行不同种类、不同浓度生长素对根颈试管苗培养影响的试验。试验重复2次，每种培养基接种培养20个根颈。
1.4.2试管苗根茎的继代繁殖培养把在1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA培养基上培养的具有生长点的根茎，用无菌手术剪子剪成具有2个生长点的根茎段后，继续接种到该种培养基上，进行试管苗根茎的继代繁殖培养。试验重复2次，每次继代繁殖培育6代，接种200个根茎段。
1.4.3试管苗根茎的扦插继代培养繁殖的试管苗从培养瓶中取出，将根茎剪成具有2个生长点的根茎段后，扦插到温室苗床上厚约6 cm的扦插基质（由1/2园土与1/2河沙组成）中，进行试管苗根茎段的扦插试验。移栽后前12 d要保持遮阴、空气相对湿度为85%的生长条件，之后按照温室内正常条件进行管理。试验重复2次，扦插的数量分别为380株和260株。
1.4.4根茎扦插试管苗的移植5月上旬，当外界最低温度达到15℃时，把在温室苗床上由根茎扦插成活的试管苗移植到大连郊区水库旁灌丛下的阴湿地上。移植试验一次性完成，共移植605株。移植后，除移植时浇1次透水外不进行其它管理。移植的同时，从本溪挖来20株正常生长的野生山酢浆草定植于试管苗旁作为对照。
2结果及分析
2.1不同种类、不同浓度生长素对试管苗培养的影响
培养到60 d时观察统计，结果见表1。只在添加不同浓度NAA和IAA的培养基上有试管苗形成，且只在添加0.2、0.4 mg/L IAA的 2种培养基上有根茎形成。从试管苗、根茎的生长率、长势 4个方面看，添加0.4 mg/L IAA的培养基生长效果最好。在该种培养基上培养9 d时，有培养材料在根颈下部长出白色的根，上部长出叶片，生长成试管苗；之后，随着试管苗的生长率不断增加，又有试管苗会相继生长出根茎；培养到60 d时，不仅试管苗生长旺盛，且所有的试管苗都长出根茎，根茎平均长度为2.6 cm，每条根茎上有2～8个可见的生长点。2次重复试验的结果基本一致。以上结果说明：1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA是山酢浆草根颈试管苗培养的理想培养基。
2.2试管苗根茎的继代繁殖培养
试管苗根茎的继代繁殖培养周期为50 d，其繁殖的试管苗生长状态比使用根颈为材料培养的试管苗更旺盛，每株试管苗的平均根茎长度为4.4 cm、平均有8.9个可见生长点，每一代的平均繁殖系数为4.2，并且采用此方法培养的试管苗没有无效苗，所有的试管苗都生长旺盛。以上结果说明，1/2MS+ 15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA也是山酢浆草试管苗根茎继代繁殖培养的理想培养基。
2.3试管苗根茎的扦插
观察表明，扦插10 d后有根茎段开始发芽，并生长为试管苗。扦插40 d后统计显示，2次扦插共成活614株，平均成活率为96%。以根茎为材料进行扦插，每株试管苗的根茎平均可切成3.9个扦插的茎段，其繁殖速度比移栽提高了2.9倍。 2.4根茎扦插试管苗的移植
移植后的观察表明，与同期移栽的野生苗相比，移植的试管苗容易成活，前期生长速度慢、植株较小，60 d后生长开始加速，秋季出现了生长旺盛、植株整齐、叶色浓绿、落叶推迟6 d左右等特点。移植70 d后统计表明，共移植成活598株，成活率为98.8%。由根茎培养的试管苗保持了野生山酢浆草的所有植物学性状，移植的试管苗当年正常开花结果。
3讨论
本研究通过两条途径进行繁殖：一是试管苗根茎继代培养的方法，50 d为一个培养周期，平均繁殖系数为4.2，按照这个繁殖速度，1株试管苗的根茎1年能繁殖出2万多株试管苗；二是在苗床上扦插根茎，其繁殖速度比移栽提高了2.9倍。以上结果说明，本研究建立的繁殖技术繁殖速度快，能够满足栽培、保护野生种质对种苗的需求。
在对试管苗进行继代繁殖培养时，其繁殖周期比直接由根颈培养试管苗的培养周期缩短了10 d。于馨恒等[13]在进行小天仙子的研究中，也观察到这种现象。产生这种现象的主要原因有：一是由根颈直接培养试管苗时，根颈材料需经过灭菌处理，在灭菌中材料可能受到严重伤害，接种到培养基上后需要恢复培养一段时间；二是根颈是在土壤中生长的，接种到培养基上后对新环境需要有一个适应过程。而继代繁殖培养时，其根茎不需经过灭菌处理，且是在相同的培养基上培养的，试管苗已经适应了这种环境条件，避免了恢复培养及适应过程所需要的时间。
参考文献：
[1]
李书心. 辽宁植物志（上册） [M]. 沈阳：辽宁科学技术出版社， 1988.
[2]南京中医药大学. 中医药大辞典（上册） [M]. 上海：上海科学技术出版社， 2006.
[3]陈晓流， 崔美， 陈学森， 等. 草莓新品系妙紫组培快繁技术研究 [J]. 山东农业科学， 2012， 44（5）：17-19.
[4]孙洪雁， 孙清荣， 单公华， 等. 鲁枣1号组织培养和植株再生体系研究 [J]. 山东农业科学， 2012， 44（1）：14-16.
[5]李霖， 宋宜颖， 鲁润龙， 等. 紫叶酢浆草的组织培养 [J]. 植物生理学通讯， 2002， 38（4）：360.
[6]高贵珍， 张兴桃， 刘小阳， 等. 三角紫叶酢浆草的组织培养与快速繁殖 [J]. 植物资源与环境学报， 2004， 13（1）：62-63.
[7]胡国富， 李凤兰， 胡宝忠. 三角紫叶酢浆草的组织培养 [J]. 安徽农业科学， 2008，6：176-178.
[8]刘建， 王永清， 王利， 等. 糖分对三角紫叶酢浆草叶片组培苗形成的影响 [J]. 安徽农业科学， 2006， 34（7）：1348-1349.
[9]王利， 王永清， 张帆. 三角酢浆草离体培养植株再生的研究 [J]. 安徽农业科学， 2005， 33（2）：238-239，315.
[10]王钰， 阮龙， 武廷章， 等. 三角紫叶酢浆草组培快繁技术的研究 [J]. 安徽农业大学学报， 2006， 33（2）：230-233.
[11]安利佳， 姜长阳. 植物组织培养导论 [M]. 大连：辽宁师范大学出版社， 1996.
[12]汪思齐， 杨萌萌， 宋年平， 等. 六道木嫩芽快速繁殖的研究 [J]. 山东林业科技， 2012，5：12-14.
[13]于馨恒， 刘兵， 王春露， 等. 小天仙子组织培养研究 [J]. 内蒙古农业科技， 2011，3：47-48.