【摘 要】
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目的观察自噬在小剂量衣霉素(TM)诱导内质网应激(ERS)预处理减轻缺血再灌注心肌损伤中的作用。方法使用数字表法将50只成年雄性SD大鼠随机分为5组：假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、I/R＋衣霉素处理组(TM组，模型建立前30 min腹腔注射TM)、I/R＋TM处理＋3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理1组(3-MA-1组，模型建立前30 min腹腔注射TM、静脉注射自噬抑制剂3-MA
【机 构】
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目的观察自噬在小剂量衣霉素(TM)诱导内质网应激(ERS)预处理减轻缺血再灌注心肌损伤中的作用。
方法使用数字表法将50只成年雄性SD大鼠随机分为5组：假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、I/R＋衣霉素处理组(TM组，模型建立前30 min腹腔注射TM)、I/R＋TM处理＋3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理1组(3-MA-1组，模型建立前30 min腹腔注射TM、静脉注射自噬抑制剂3-MA)；I/R＋衣霉素处理＋3-MA处理2组(3-MA-2组，模型建立前30 min腹腔注射TM、再灌注时静脉注射3-MA)；各组TM按0.6 mg/kg体重、3-MA按1 mg/kg体重给药。使用结扎左冠状动脉前降支并再灌注的方法建立I/R模型。在开胸后、再灌注2 h时通过颈动脉取血，比色法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性；再灌注2 h后处死动物摘出心脏，原位缺口末端标记法(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡情况，蛋白质印迹法(Western blot)检测自噬蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达。使用方差分析比较各组CK-MB、LDH、细胞凋亡及自噬蛋白的表达。
结果CK-MB、LDH活性在再灌注2 h时，TM组较I/R组低，差异有统计学意义(t＝2.672、2.834，P<0.05)；3-MA-1组与I/R组比较差异无统计学意义(t＝1.232、1.275，P>0.05)。Sham、I/R、TM、3-MA-1和3-MA-2组细胞凋亡指数依次为(2.5±0.3)%、(27.9±3.1)%、(13.4±1.6)%、(26.4±2.9)%和(9.4±0.8)%。TM、3-MA-2组较I/R组低，差异有统计学意义(t＝3.695、3.587，P<0.05)；3-MA-1组与I/R组比较，差异无统计学意义(t＝0.673，P>0.05)。再灌注2 h时I/R、TM、3-MA-1和3-MA-2组Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Sham组比较均增高，差异有统计学意义(Beclin-1比较：t＝4.047、3.773、3.738、2.542，P<0.05，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比较：t＝3.447、3.363、3.169、2.527，P<0.05)，TM、3-MA-1、3-MA-2组均低于I/R组，差异有统计学意义(Beclin-1比较：t＝2.671、3.150、3.357，P<0.05；LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比较：t＝2.479、3.263、3.351，P<0.05)。
结论心肌缺血再灌注损伤过程中自噬起重要作用，小剂量衣霉素诱导ERS预处理可在缺血期引起适度的细胞自噬，有助于维持心肌细胞的内稳态，产生一定程度的心肌保护效果。
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