玫瑰孢链霉菌中犬尿氨酸酶的克隆表达及其在达托霉素高产菌株构建中的应用

来源 :2012年第五届全国微生物遗传学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:enlic
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  目的:通过克隆表达和敲除编码犬尿氨酸酶的kyn基因,考察此途径中犬尿氨途径对达托霉素生物合成的影响。方法:将kyn和pET23b载体用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后连接,化入E.coil BL21(DE3)并进行诱导表达,最佳诱导条件为28℃,5h,通过荧光光度计检测检测酶活。结果:KYN蛋白体外存在酶活性,可以将犬尿氨酸分解代谢为邻氨基苯甲酸,进一步证明S.roseosporus中存在犬尿氨酸途径。通过同源双交换构建kyn敲除突变株,培养和检测达托霉素含量。结论:犬尿氨酸途径中大yn基因敲除后,达托霉素的产量与野生型菌株相比上升了的33.75%。这说明了犬尿氨酸途径在达托霉素的生物合成中有着重要影响。
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