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磷脂酶C(Phospholipase C,简称PLC)(EC3.1.4.3)是一种水解甘油磷脂C3位点磷酯酰键生成甘油二酯和磷酸胆碱、磷酸肌醇、磷酸乙醇胺等的脂类水解酶.随着对PLC研究的深入及工业发展的需求,PLC的应用价值逐渐被挖掘开发,已经逐渐从药品生产延伸至油脂精炼、食品加工、磷脂改性等领域.本论文以筛选获得的一株产PLC的菌株Pseudomonas aeruginosa出发,开展了其磷脂酶C基因的异源表达研究.具体研究结果如下：
利用卵黄琼脂LB平板分离法筛到一株产酶水平较高的铜绿假单胞菌,命名为P.aeruginosa 41.
以P.aeruginosa 41基因组DNA为模板, PCR扩增获得溶血性磷脂酶C(PlcH)基因,构建重组大肠杆菌表达质粒并转化E.coli BL21(DE3).经IPTG诱导,重组菌表现出明显的磷脂酶C活性,摇瓶最佳诱导条件为：5％转接量,37℃、150 r/min下培养4h添加IPTG至终浓度为0.9 mmol/L,25℃、150 r/min诱导培养14h,破碎上清酶活达到722.89 U/ml±0.47.
对重组菌进行溶血性试验,在哥伦比亚血琼脂平板上进行溶血性试验,结果表明PlcH具有较强的溶血性.
利用卵黄琼脂LB平板分离法筛到一株产酶水平较高的铜绿假单胞菌,命名为P.aeruginosa 41.
以P.aeruginosa 41基因组DNA为模板, PCR扩增获得溶血性磷脂酶C(PlcH)基因,构建重组大肠杆菌表达质粒并转化E.coli BL21(DE3).经IPTG诱导,重组菌表现出明显的磷脂酶C活性,摇瓶最佳诱导条件为：5％转接量,37℃、150 r/min下培养4h添加IPTG至终浓度为0.9 mmol/L,25℃、150 r/min诱导培养14h,破碎上清酶活达到722.89 U/ml±0.47.
对重组菌进行溶血性试验,在哥伦比亚血琼脂平板上进行溶血性试验,结果表明PlcH具有较强的溶血性.