癌症的发生与多种因素以及它们之间的协同作用有关,其中环境因素与病毒的协同致癌作用正受到越来越多的关注。苯并[a]芘（B[a]P）是重要的环境致癌物,其代谢活化后与DNA共价结合生成BPDE-N²-dG加合物是致癌的关键步骤[1]。人乳头瘤病毒（HPV）是一类重要的肿瘤相关病毒,通过将其自身DNA整合到宿主基因中而诱发生殖道、口腔、食道等皮肤和粘膜的恶性肿瘤。已有研究提出,HPV可诱导DNA修复基因XRCC3和XRCC5的启动子高度甲基化,使得B[a]P导致的DNA加合物难以修复,进而增强B[a]P的致癌活性[2]。本研究使用高效液相色谱电喷雾串联质谱法（HPLC-ESI-MS/MS）对B[a]P与HPV协同作用下导致的DNA损伤进行了分析。利用选择反应扫描（SRM）监测BPDE-N2-dG的m/z 570→454通道和内标[¹³C₁₀,¹⁵N₅]-BPDE-N²-d G的m/z 585→464通道（图1A）,建立了B[a]P导致的BPDE-N²-d G加合物定量分析方法。该方法检出限为3 fmol（S/N=5）,定量限为6 fmol（S/N=10）;回收率为99.7%-105.1%;准确度为92.9%-101.2%。在此基础上,将HPV阳性的人宫颈癌HeLa细胞和HPV阴性的人宫颈癌C33A细胞暴露于浓度为10μmol/L的B[a]P 24h后,提取细胞DNA进行酶解,然后再经C18固相萃取纯化,最后进行HPLC-ESI-MS/MS分析。如图1B所示,在HPV阴性的C33A细胞中未能测到该加合物;但是,在经B[a]P处理后的HeLa细胞（HPV阳性）中能够检测到BPDE-N²-dG加合物的含量为124±5个加合物/106个碱基（图1C）。结果表明,HPV能够显著促进B[a]P导致的BPDE-N²-d G加合物生成,这不仅为B[a]P与HPV协同导致DNA损伤提供了有力的实验证据,也为深入阐明其协同致癌机理提供了重要的突破口。