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百合是世界著名的球根花卉,具有较高的观赏价值。然而目前大量珍贵野生资源濒临灭绝,种质保存方面尚存在困难,国内拥有自主知识产权的品种较少。体细胞胚发生对于解决百合种质保存、遗传性状改良、种球繁育等问题具有重要意义,但目前有关于百合体胚发生的相关分子机制研究尚未明确。本课题组研究表明miR171在调控百合体胚发生过程中起到重要作用,本研究克隆了细叶百合（Lilium pumilum DC.Fisch）miR171前体（pre-miR171）;使用qRT-PCR技术探讨百合体细胞胚发生过程中pre-miR171及内源诱捕靶标（eTM171）的表达模式;使用双酶切方法进行miR171过表达载体的构建,并采用小串联模拟靶标技术及CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了mi R171沉默和敲除载体,为揭示百合体胚发生过程中miR171的产生、加工和调控过程,以及深入研究百合体胚发生过程中eTM-miR171-SCL6的调控网络奠定了基础。主要试验结果如下:1.lpu-pre-miR171a/b的克隆及表达分析根据miRNA前体具有高度保守的特点,成功克隆得到了细叶百合lpu-miR171a、lpu-miR171b的前体。对lpu-miR171a/b前体序列进行二级结构预测及最小折叠自由能分析,结果表明lpu-pre-miR171a/b均具有典型的茎环结构,最小折叠自由能分别为-44.0kal·mol-1和-36.8 kal·mol-1。百合体胚发生过程中pre-miR171a的表达存在显著差异,在非胚性愈伤时期到胚性保存阶段表达量显著降低;pre-miR171b的表达量在非胚性愈伤时期到胚性愈伤阶段显著下降,而到百合体胚发生后期鱼雷形胚和子叶形胚阶段表达量显著上升。2.百合体胚发生过程中eTM171的表达分析确定了miR171a的内源诱捕靶标为c40819g1i1和c46484g1i1,百合体胚发生过程中c40819g1i1在胚性保存阶段表达量达到最高,c46484g1i1在百合体胚发生过程中表达量最高时期出现在胚性愈伤阶段。miR171b的内源诱捕靶标为c40253g1i1,在百合体胚发生过程中c40253g1i1表达量最高出现在球形胚时期,表达量最低出现在鱼雷形胚时期。3.mi R171a/b的载体构建克隆获得了包括miR171a/b前体的EST序列,成功构建得到了miR171a、miR171b过表达载体pRI101-miR171a和pRI101-miR171b;设计并人工合成了miR171aSTTM、miR171bSTTM序列,成功构建了miR171aSTTM、miR171bSTTM的表达载体pRI101-miR171aSTTM和pRI101-miR171bSTTM;根据克隆得到的miR171a/b EST序列寻找打靶位点,在百合中首次使用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了miR171a/b的敲除载体pBUE411-miR171a,pBUE411-mi R171b。