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利用从国外引进的新城疫热稳定性天然弱毒B95株接种SPF鸡胚繁殖病毒，经处理后提取病毒的基因组RNA，参考国内外发表的NDV融合蛋白基因序列，设计一对特异性引物，经反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增出约1700bp大小的特异性片段，将此片段回收纯化后，利用T-A克隆技术将其克隆到PGEM-T-easy克隆载体中，再转化大肠杆菌JM109感受态细胞，转化后经分子量比较、PCR鉴定和酶切分析筛选阳性克隆。结果表明，所得到的阳性重组子（PEGM-F）中含有新城疫热稳定性天然弱毒B95株F基因。经核苷酸测序，该基因含一个1662bp的开放阅读框，编码553个氨基酸，与国外报导的新城疫各毒株F基因相比，核苷酸序列同源性为88.3％～96.4％，氨基酸同源性为92.1％～96.4％。氨基酸的差异主要集中在N端1-32残基，该序列为F蛋白的信号序列，在F蛋白新生多肽与囊膜泡结合后不久被切下来，因此他不是功能性F蛋白的构成成分，所承受的进化强制就很小。 将正确的重组克隆质粒PGEM-F用NotI单酶切，电泳回收纯化目的片段，与同样用NotI单酶切并经去磷酸化处理的真核表达载体PcDNA3.1连接，转化大肠杆菌JM109感受态细胞，得到的转化子经PCR鉴定和酶切分析，筛选出符合阅读框的重组子，构建成新城疫核酸疫苗，并用所构建的新城疫核酸疫苗与制备的载基因阳离子脂质体结合进行免疫实验，通过ELISA试验、淋巴细胞转化试验等检测核酸疫苗在鸡体内的表达，表达产物作为抗原物质刺激机体产生了特异性应答反应，引起了机体特异性的体液免疫和细胞免疫，对新城疫强毒的攻击具有75％保护率，为进一步研究重组疫苗奠定了一定的基础。