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【研究背景和目的】胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和病死率均居恶性肿瘤前列，在我国居消化道恶性肿瘤发病率的首位。胃癌的早期诊断和治疗一直是临床难点所在，尤其是中晚期无法手术及伴有远处转移的患者。因此，深入研究胃癌发生、发展和转移的机制有助于更好地诊断和治疗。 microRNA（miRNA或miR）是一类真核生物内源性的具有重要调节作用的小分子单链RNA，在转录后水平对基因表达进行调节，参与细胞的生长、分化、凋亡等生命活动。研究表明，miRNA与肿瘤的发生、转移、耐药等病理进程密切相关，miRNA可能在肿瘤的发生发展中起重要作用。 为此，本研究收集胃癌细胞和正常胃黏膜细胞，通过miRNA寡核苷酸芯片技术，筛选胃癌可能相关的差异miRNAs，建立胃癌细胞miRNAs表达谱。进一步采用实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法对差异miRNAs进行筛选和验证，以期发现在胃癌细胞和胃癌组织中表达相一致的胃癌相关miRNAs，作为候选的在胃癌发生发展过程中起重要作用的miRNAs，以便进一步研究其在胃癌进程中的影响。 【材料与方法】收集9株胃癌细胞和6例正常胃黏膜细胞，抽提总RNA，采用miRNA寡核苷酸芯片，检测胃癌细胞和正常胃黏膜中的miRNAs表达谱，比较并筛选出具有显著差异的miRNAs。采用Q-PCR方法验证由芯片筛选出的差异miRNAs在胃癌细胞和正常胃黏膜中的表达情况，并收集40对胃癌组织样本检测这些差异miRNAs的表达。筛选出在胃癌细胞和胃癌组织中表达相一致的胃癌相关miRNAs，其中包括miR-29c。采用miR-29c precursor或miR-29c逆转录病毒过表达载体上调胃癌细胞SGC-7901中miR-29c的表达水平，观察其过表达对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移能力和裸鼠皮下肿瘤生长能力等生物学行为的影响来研究miR-29c在胃癌发生发展中的作用。并利用生物信息学方法预测miR-29c的靶基因，结合双荧光素酶报告基因系统、Q-PCR和Western blot检测方法，验证NASP为miR-29c的靶基因，初步明确miR-29c发挥生物学功能的分子机制。 【结果】在miRNA寡核苷酸芯片筛选的566个人类miRNAs中，通过比较胃癌细胞和正常胃黏膜中miRNAs的表达谱，发现46个miRNAs有显著差异，其中17个miRNAs显著上调（LogRatio>1.0），29个miRNAs显著下调（LogRatio<-5.0）。利用这46个差异miRNAs进行聚类分析，能较好地将胃癌细胞和正常胃黏膜区分开来。由于引物商品化等原因，我们合成了41个miRNAs的引物（其中包括15个上调的miRNAs和26个下调的miRNAs），进入下一步的Q-PCR验证。 比较上述miRNAs在9株胃癌细胞和6例正常胃黏膜及40对胃癌组织和配对癌旁组织中的表达情况，15个上调的miRNAs在胃癌细胞和胃癌组织中的表达情况与芯片结果的符合率分别为73.33％（11/15）和66.67%（10/15），26个下调的miRNAs分别为88.46%（23/26）和30.77%（8/26）。综合以上结果，我们筛选出15个与胃癌相关的miRNAs，其中有8个上调，分别为miR-196a，miR-196b，miR-18a*，miR-183，miR-18a，miR-106a，miR-186和 miR-93；7个下调，分别为 miR-451，miR-495，miR-409-3p，miR-497，miR-133b，miR-136和miR-29c。 以上15个miRNAs作为胃癌相关miRNAs，可能在胃癌的发生发展过程中起相当重要的作用。在此课题中，我们主要关注了miR-29c在胃癌中的生物学功能。研究表明，上调miR-29c的表达水平能有效抑制胃癌细胞SGC-7901体外增殖、克隆形成及迁移能力，并诱导细胞凋亡，体内实验表明，过表达 miR-29c能抑制胃癌细胞SGC-7901裸鼠皮下肿瘤生长能力。 生物信息学分析提示NASP3’UTR含有miR-29c作用的靶序列，双荧光素酶报告基因系统检测进一步验证了NASP是miR-29c的直接靶基因，Q-PCR及Western blot证实miR-29c对NASP表达的调控发生在转录后水平。 【结论】miRNA寡核苷酸芯片筛选出的差异miRNAs构成的miRNAs表达谱能将胃癌细胞与正常胃黏膜较好地区分开来。miR-29c在胃癌细胞和胃癌组织中显著下调，能抑制胃癌细胞SGC-7901体外增殖、克隆形成及迁移能力，并诱导细胞凋亡，体内实验表明，过表达miR-29c能抑制胃癌细胞SGC-7901裸鼠皮下肿瘤生长能力。miR-29c可能通过对靶基因NASP的直接调控发挥其抑制肿瘤的作用。