【摘 要】
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本文以聚乙烯亚胺修饰的磷酸铁纳米粒子作为固相萃取分离介质,建立了一种快速、高效的DNA分离纯化方法。首先通过静电作用将阳离子型超支化聚合物-聚乙烯亚胺(PEI)修饰在纳米
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本文以聚乙烯亚胺修饰的磷酸铁纳米粒子作为固相萃取分离介质,建立了一种快速、高效的DNA分离纯化方法。首先通过静电作用将阳离子型超支化聚合物-聚乙烯亚胺(PEI)修饰在纳米磷酸铁表面,制备了PEI-FePO4纳米材料。采用红外光谱(FT-IR)、扫描电镜(SEM)和Zeta电位等方法对所得的PEI-FePO4纳米材料进行了表征。对PEI-FePO4纳米材料在DNA的分离纯化中的表现性能进行了研究,在pH 4.0时,2.0 mg PEI-FePO4纳米材料可对1.0mL 50mg L-1DNA达到完全吸附,而此时蛋白质对DNA的吸附基本不产生干扰。PEI-FePO4纳米材料对DNA的吸附在30s达到吸附平衡,其吸附行为符合Langmuir模型,最大吸附容量为61.88 mg g-1。吸附的DNA可采用pH10.0的BR缓冲溶液进行洗脱,洗脱率能达到85%。将所建立的分离纯化过程应用于模拟λDNA样品、人体全血样品和大肠杆菌样品中DNA的分离纯化,以纯化后的DNA为模板,成功对500 bp λDNA、543 bp人体P53基因以及700 bp GFP基因进行PCR扩增,表明所建立的分离纯化方法可从复杂基体中提取的DNA能够满足下游PCR扩增实验的需要。
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