【摘 要】
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目的:肺腺癌是中国最常见的癌症死亡原因之一,其五年生存率较差。研究发现白介素37（IL-37）在肺腺癌的进展中发挥作用,但对于IL-37在肺腺癌糖代谢中的影响还不清楚,因此本课题主要探究IL-37对肺腺癌细胞糖代谢的影响及其机制。方法:通过实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）比较肺腺癌A549细胞与正常肺上皮BEAS-2b细胞的IL-37、己糖激酶2（HK2）、6-磷酸果糖-2-激酶/果
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目的:肺腺癌是中国最常见的癌症死亡原因之一,其五年生存率较差。研究发现白介素37（IL-37）在肺腺癌的进展中发挥作用,但对于IL-37在肺腺癌糖代谢中的影响还不清楚,因此本课题主要探究IL-37对肺腺癌细胞糖代谢的影响及其机制。方法:通过实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）比较肺腺癌A549细胞与正常肺上皮BEAS-2b细胞的IL-37、己糖激酶2（HK2）、6-磷酸果糖-2-激酶/果糖2,6-二磷酸酶3（PFKFB3）和丙酮酸激酶M（PKM）的表达差异。以不同浓度（0 ng/m L、10 ng/m L、50 ng/m L、100 ng/m L、200 ng/m L）重组人IL-37（rh IL-37）处理A549细胞不同时间（24 h、48 h、72 h）,葡萄糖和乳酸检测试剂盒检测处理前后葡萄糖摄取和乳酸产生的差异,筛选出rh IL-37适宜刺激浓度及作用时间。应用q RT-PCR检测A549细胞经rh IL-37处理后几种关键酶的m RNA水平表达变化,选择具有统计学差异的酶,并通过蛋白免疫印迹（Western-blot）技术检测该蛋白水平的表达。利用特异性的小分子抑制剂下调A549细胞中该酶的表达,并检测葡萄糖摄取和乳酸产生。通过Western-blot技术检测动物实验肿瘤组织中的IL-37和该酶蛋白水平的表达。实验数据通过Graph Pad Prism 9附带统计学软件进行统计学分析,以P<0.05判定为有统计学意义。结果:q RT-PCR结果显示肺腺癌A549细胞较正常肺上皮BEAS-2b细胞的IL-37和HK2表达显著降低（P<0.05）,PFKFB3和PKM的表达显著增加（P<0.05）。当以rh IL-37处理A549细胞72 h时,葡萄糖摄取和乳酸产生均有不同程度的下降,当rh IL-37浓度为100 ng/m L时下降程度最显著（P<0.05）。rh IL-37处理A549细胞后较处理前HK2和PKM的m RNA表达差异无统计学差异,PFKFB3 m RNA表达显著下降（P<0.05）。Western-blot结果显示,与未处理组相比,rh IL-37处理后,A549细胞PFKFB3蛋白表达显著下降（P<0.05）。PFK15处理A549细胞后PFKFB3的蛋白水平随着PFK15浓度升高而下降,具有浓度依赖性,在PFK15浓度为10μM时显著下降（P<0.05）;葡萄糖摄取和乳酸产生结果显示当PFK15浓度为10μM时葡萄糖摄取和乳酸产生量显著下降（P<0.05）。动物肿瘤组织检测表明,IL-37处理组中IL-37蛋白水平表达较对照组表达显著升高（P<0.05）,IL-37组中PFKFB3蛋白水平表达较对照组显著下降（P<0.05）。结论:IL-37可以抑制肺腺癌细胞的葡萄糖摄取和乳酸产生。推断IL-37通过抑制肺腺癌细胞中的PFKFB3 m RNA和其蛋白的表达,进而能够显著降低肺腺癌细胞的糖酵解,在肺腺癌细胞的糖代谢中发挥作用。
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